Дифференцируя функциональной роли экспрессии генов от иммунной и не-иммунных клеток в мышь колит трансплантацией костного мозга

Summary

Трансплантация костного мозга дает возможность изменить генотип костного мозга клетки. Если ген интерес выражается как в костном мозге клеток, полученных и не полученных костного мозга клеток, трансплантация костного мозга может изменить костного мозга клеток разного генотипа без изменения без костного мозга клетки генотипа.

Abstract

Чтобы понять роль генов в развитии колита, мы сравнили ответы мышей дикого типа и ген интересов, дефицитных мышей нокаутом колит. Если ген интересов, выражается и в костном мозге клеток, полученных и не полученных костного мозга клеток хозяина, однако можно дифференцировать роль интересующего гена в костном мозге клеток, полученных и не костного мозга клеток, полученных из костного технику трансплантации костного мозга. Для изменения костного мозга клетки генотипа мышей, оригинальный костный мозг получателя мышей были уничтожены путем облучения, а затем заменяются новыми костного мозга донора различных генотипов. Когда мышей дикого типа донора костного мозга пересаживают на мышах, мы могли бы генерировать нокаутных мышей дикого типа экспрессия генов в клетках костного мозга, полученных клеток. Кроме того, при нокаутных мышей-доноров костного мозга пересаживают в дикий тип получателя мышей, мышей дикого типа без гена интересов, выражающийиз костного мозга клеток, полученных были произведены. Тем не менее, пересадка костного мозга не может быть на 100%. Таким образом, мы использовали кластер дифференцировки (CD) молекул (CD45.1 и CD45.2) в качестве маркеров донора и реципиента клетки для отслеживания доли донорского костного мозга клеток, полученных в получатель мышей и успех трансплантации костного мозга. Дикого типа мышей с генотипом и CD45.1 нокаутных мышей с генотипом CD45.2 были использованы. После облучения получателя мышей, доноров клеток костного мозга различных генотипов вводили в получатель мышей. Когда новый костный мозг регенерировать взять на свой иммунитет, мышей заражали химического агента (декстран сульфат натрия, DSS 5%), чтобы вызвать колит. Здесь мы также показали способ, чтобы побудить колита у мышей и оценить роль генов интерес, проявленный из костного мозга, полученных клеток. Если ген интересов, от клеток, полученных из костного играет важную роль в развитии заболевания (такие как кишечнаяТИС), фенотип получателя мышей с трансплантацией костного мозга может быть существенно изменен. В конце колит экспериментов, костного мозга клеток в крови и костном мозге были помечены антитела против CD45.1 и CD45.2 и их количественное соотношение существование может быть использован для оценки успеха пересадки костного мозга методом проточной цитометрии. Успешная трансплантация костного мозга должны показать подавляющее большинство генотипа (в срок маркер молекулу CD) над получателем генотипа как в костном мозге и крови мышей получателя.

Protocol

1. Перед тем, как начать-технического соображения

1. Мы рекомендуем использовать как C57/BL6 мышей дикого типа и нокаутных мышей для эксперимента потому, что мыши с соответствующими молекулами CD можно приобрести у основных поставщиков мыши.
2. Поскольку трудно отслеживать мышей дикого типа и нокаутных мышей, полученных донорских клеток после трансплантации костного мозга, необходимо использовать CD45.1 мышей представляют мышей дикого типа. (CD45.1 C57/SJL мышей дикого Jackson Laboratories складе # 002014).
3. Большинство колоний мышь CD45.2. Наши мышей принадлежат CD45.2 генотипа (в качестве альтернативы CD45.2 WT источник мышей: Jackson Labora....

Results

Если ген интересов, играет важную роль в иммунных клетках в процессе развития колита, мышей, получавших костного мозга различных генотипов по трансплантации костного мозга (WT, чтобы KO KO или в WT) должны иметь измененный ответ на DSS колит. Одним из наиболее важных параметров для определения тяжести колита H & E окрашивание толстой ткани. Толстой ткани структурные изменения и признаки воспаления могут быть количественно оценены H & E гистологии система подсчета очков. Критерии для H & E гистологии очки для.......

Discussion

Это трансплантации костного мозга подход годится для иммунологии исследования колит, инфекции, рак, ожирение и другие заболевания. Это трансплантации костного мозга эксперимента необходима, когда ген интересов, выражается в обоих костного мозга и не костного мозга и клеток, полученных из генно-интересов, подозревается посредником заболевание клеток или от населения. Например, антимикробного пептида кателицидина показан для модуляции острого колита. Но это выражается как в эпителиальные клетки и клетки иммунной системы (.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Название реагента	Компания	Номер в каталоге
Буфер сотовых окрашивания	Biolegend	# 420201
10X лизис буфера РБК	Biolegend	# 420301
FITC мыши контроля изотипа	Biolegend	# 400207
PE мыши контроля изотипа	Biolegend	# 400211
PE анти-мышиных CD45.2	Biolegend	# 109807
FITC анти-мышиных CD45.1	Biolegend	# 110705
Anti-мышь CD16/32 блокировки	Biolegend	# 101301
40 мкм фильтр клетке	Fisherbrand	# 22363547
PBS 1X	MP Biomedicals	# 1860454
Гепарин	Fisherbrand	# BP2425
Sulfatrim (СМЗ)	QualiTest	NC9242720 (Фишер)
Лизола IC	Andwin Научные	NC9745686 (Фишер)
Vaccutainer	BD	# 8000813
Мышь фиксатор	Braintree Научные	# TV-150
Облучатель	JL Пастух и Associates	Mark I 68A
Проточный цитометр	BD	BD FACSCanto II
Проточный цитометр пробирке	Сокол	# 352052
Цифровой суппорт	Fisherbrand	14-648-17
Hemoccult ИКТ	Beckman Coulter	G0328QW