Изучение артериальной гладких мышц KV7 калиевых каналов функцию с помощью Patch Clamp электрофизиологии и давления Миография

Краткое содержание

Измерения KV7 (KCNQ) калиевого канала активности в изолированной артериальной миоцитов (с помощью патча зажим электрофизиологические методы) параллельно с измерениями констриктор / расширитель ответы (с помощью давления миография) могут выявить важную информацию о роли KV7 каналы в гладких сосудистых мышц и физиологии фармакологии.

Аннотация

Сокращение или расслабление гладких мышечных клеток в стенах сопротивление артерий определяет диаметр артерий и тем самым контролирует поток крови через сосуд и вносит свой вклад в системное артериальное давление. Сокращение процесс регулируется прежде всего цитозольной концентрации кальция ([Ca ^{2 +]} _цит), которая в свою очередь контролируется с помощью различных ионных транспортеров и каналов. Ионные каналы являются общими промежуточных сигнальных путей активируется вазоактивных гормонов для осуществления сужение сосудов или сосудов. И ионные каналы зачастую становятся мишенью терапевтических агентов, либо намеренно (например, блокаторы кальциевых каналов используется, чтобы вызвать расширение сосудов и снижение артериального давления) или непреднамеренно (например, чтобы вызвать нежелательные сердечно-сосудистых побочных эффектов).

KV7 (KCNQ) напряжение активированного калиевых каналов в последнее время были вовлечены в качестве важной физиологической и терапевтической ТаргETS для регуляции сокращения гладких мышц. Для выяснения конкретных ролей KV7 каналов, как в физиологическом передачи сигнала и в действиях терапевтических агентов, мы должны изучить, как их деятельность модулированные на клеточном уровне, а также оценить их вклад в контексте интактной артерии.

Артерий крыс брыжеечных обеспечить полезную модель системы. Артерий может быть легко рассеченные, очищают от соединительной ткани и используются для подготовки изолированной артериальной миоциты для патч зажим электрофизиологии, или канюлю и давлением для измерения сосудосуживающие / сосудорасширяющее ответов при относительно физиологических условиях. Здесь мы опишем методы, используемые для обоих типов измерений и привести несколько примеров того, как экспериментальная конструкция может быть интегрирована, чтобы обеспечить более четкое понимание роли этих ионных каналов в регуляции сосудистого тонуса.

Протокол

1. Хирургическое иссечение тонкого кишечника Аркады сосудистой Брыжеечные

1. Anesthetize 300-400 г Sprague-Dawley крыс с изофлурана (4%) вводят путем ингаляции.
2. Выполните средней линии лапаротомия, чтобы разоблачить брыжейки тонкого кишечника. Экстериоризироваться тонкой и толстой кишки через разрез брюшной стенки с большой осторожностью, чтобы избежать травм подвергаются кишечника и брыжейки. Осторожно раздуть брыжейки над стерильной марлей.
3. Хирургически вырезать тонкую кишку и часть толстой кишки, в том числе слепой кишки (кровеносные сосуды аккуратно разрезать вдоль поля и на происхождение от основной ветви верхней брыжеечной артерии / ....

Обсуждение

Методы и экспериментальных подходов, описанных здесь довольно надежная и может производить четкие и воспроизводимые результаты при применении с тщательным вниманием к деталям. Хорошо электрофизиологических записей и сужение / расширение артериальных сегментов зависит от здоровья клеток и артерий сегментов, соответственно. Сотовые препараты могут меняться изо дня в день, даже используя тот же протокол. Изоляция Решения могут быть использованы на срок до 2 недель, но если качество клеточный препарат низкой на двух последу.......

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Имя	Компания	Номер в каталоге	Комментарии
Хлористый натрий	Сигма	S5886	Пройдя Решение: 145 Ванна решение для электрофизиологии *: 140 Внутреннее решение для электрофизиологии: 10 Изоляция решение для миоциты *: 140 Ванна решение для давления миография: 145 Lumen решение для давления миография: 145
Хлористый калий	Сигма	P5405	Пройдя Решение: 4.7 Ванна решение для электрофизиологии *: 5,36 Внутреннее решение для электрофизиологии: 135 Изоляция решение для миоциты *: 5,36 Ванна решение для давления миография: 4,7 Lumen решение для давления миография: 4,7
Калий EGTA	Сигма	E4378	Внутреннее решение для электрофизиологии: 0,05
HEPES	Сигма	H9136	Ванна решение для электрофизиологии *: 10 Внутреннее решение для электрофизиологии: 10 Изоляция решение для миоциты *: 10
Динатрийгидрофосфат	Сигма	S5136	Изоляция решение для миоциты *: 0,34
Калий гидрофосфат	Сигма	P5655	Изоляция решение для миоциты *: 0,44
Хлорид магния	Сигма	M2393	Ванна решение для электрофизиологии *: 1,2 Внутреннее решение для электрофизиологии: 1 Изоляция решение для миоциты *: 1,2
Хлорид кальция	Сигма	C7902	Ванна решение для электрофизиологии *: 2 Изоляция решение для миоциты *: 0,05
Фосфат натрия	Fisher Scientific	BP331-1	Пройдя Решение: 1,2 Ванна решение для давления миография: 1,2 Lumen решение для давления миография: 1,2
Сульфат магния	Сигма	M2643	Пройдя Решение: 1,17 Ванна решение для давления миография: 1,17 Lumen решение для давления миография: 1,17
MOPS	Fisher Scientific	BP308	Пройдя Решение: 3 Ванна решение для давления миография: 3 Lumen решение для давления миография: 3
Пировиноградная кислота	Сигма	P4562	Пройдя Решение: 2 Ванна решение дляДавление миография: 2 Lumen решение для давления миография: 2
EDTA дигидрат	Исследования Organics	9572E	Пройдя Решение: 0,02 Ванна решение для давления миография: 0,02 Lumen решение для давления миография: 0,02
D-глюкозы	Сигма	G7021	Пройдя Решение: 5 Ванна решение для электрофизиологии *: 10 Внутреннее решение для электрофизиологии: 20 Изоляция решение для миоциты *: 10 Ванна решение для давления миография: 5 Lumen решение для давления миография: 5
Бычий сывороточный альбумин	Сигма	A3912	Пройдя Решение: 1% Lumen решение для давления миография: 1%
рН			Пройдя Solutioп: 7,4 Ванна решение для электрофизиологии *: 7,3 Внутреннее решение для электрофизиологии: 7,2 Изоляция решение для миоциты *: 7,2 Ванна решение для давления миография: 7,4 Lumen решение для давления миография: 7,4
Осмолярность			Пройдя Решение: 300 Ванна решение для электрофизиологии *: 298 Внутреннее решение для электрофизиологии: 298 Изоляция решение для миоциты *: 298 Ванна решение для давления миография: 300 Lumen решение для давления миография: 300
			* 11
			Таблица 1. Компоненты решения, используемые в эксперименте.