Этот протокол описывает высокая через положить колориметрическим методом, который опирается на формирование комплекса между йодом и цепей молекул глюкозы в крахмал. Йод образует комплексы с обеих амилозы и длинных цепей внутри амилопектина. После добавления йода в образце крахмала, максимальное поглощение амилозы и амилопектина происходит при 620 и 550 нм, соответственно. Соотношение амилозы / амилопектина можно оценить из соотношения значений абсорбции нм 620 и 550 и их сравнения со стандартной кривой, при которых определенные известные концентрации показаны в зависимости от значений поглощения. Такая высокая пропускная способность, недорогой метод является надежным и воспроизводимым, позволяя оценку крупных популяций клонов картофеля.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Определение Rapid высокую пропускную способность Амилоза в сублимированного образцов клубней картофеля
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Этот протокол описывает высокая через положить колориметрическим методом, который опирается на формирование комплекса между йодом и цепей молекул глюкозы в крахмал. Йод образует комплексы с обеих амилозы и длинных цепей внутри амилопектина. После добавления йода в образце крахмала, максимальное поглощение амилозы и амилопектина происходит при 620 и 550 нм, соответственно. Соотношение амилозы / амилопектина можно оценить из соотношения значений абсорбции нм 620 и 550 и их сравнения со стандартной кривой, при которых определенные известные концентрации показаны в зависимости от значений поглощения. Такая высокая пропускная способность, недорогой метод является надежным и воспроизводимым, позволяя оценку крупных популяций клонов картофеля.
Введение
Приблизительно 80% свежего веса клубней картофеля является вода, почти все из оставшегося сухого вещества составляет крахмал 1. Большинство из крахмала (70%) состоит из амилопектина, а остаток амилозы. Соотношение между амилозы и амилопектина является наиболее важным свойством влияния на физические свойства крахмала. Амилоза представляет собой линейный альфа 1-4 цепь глюкозы, а амилопектин представляет собой линейный альфа 1-4 цепь с альфа 1-6 ветвей 2. Методы, такие как йод связывания, дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC), размер высокая производительность эксклюзионной хроматографии (HPSEC) и взаимодействия конканавалином были разра....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. Амилоза Определение от клубня картофеля крахмала
- Очистить и нарезать свежие клубни мелкими кубиками.
- Поместите картофель кубиками в небольших коричневых сумок и хранить в течение ночи при -80 ° С
- Трансфер картофельные кубики на нейлоновые мешки и сублимационной сушки.
- После сублимационной сушке, растереть картофельную образец в порошок с помощью ступки и пестика или Wiley Mill.
- В 50 мл пробирку, добавляют 20-30 мг лиофилизированного, первый клубней образца.
- Готовят раствор 45% (вес / объем) хлорной кислоты (смесь 24,4 мл 60%-ной хлорной кислоты и 25,6 мл сверхчистой воды.
- Добавить 500 мкл 45% (....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Стандартная кривая построена с очищенных данных различных решений концентрационных амилозы / амилопектина показывает приблизительные коэффициенты абсорбции, начиная от 0,7 до 1,6 (табл. 1). Линейной регрессии тенденция по этим данным в дальнейшем используется для выведения содержание амилозы в лиофильно-высушенных образцов картофеля (рис. 1).
Среда завод имеет некоторое влияние на содержание амилозы в картофельного клубня 7. Реплицируемые определе.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Содержание амилозы в клубней картофеля обычно составляет от 20-35% 7,8. Если большинство значения вне этого диапазона, рассмотреть эти возможные ошибки: 1) необработанные данные были использованы вместо отображаться данные для построения калибровочной кривой амилозы / амилопектина, 2) необработанные данные были использованы вместо отображаться данные для определения амилозы / амилопектин отношения из картофеля образцов; или 3) вода, используемая для анализа не был достаточно чистым. Мы заметили, что с помощью.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Нам нечего раскрывать.
Благодарности
Финансирование для этого исследования была предоставлена частично научный сотрудник программы USDA-ARS и Комитета Растениеводство зародышевой плазмы USDA.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
Equipment
<td colspan="4">Считыватель
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Реагенты | |||
| Amylose | Sigma | 859656 | |
| Амилопектин | Sigma | A8515 | |
| Хлорная кислота 60% | Sigma | 311413 | Очень опасен для кожи и глаз |
| Йод | Sigma | 23214TD | |
| Йодид калия | Sigma | 08625JE | |
| plate | Bio Tek | ELx800 |
Ссылки
- Composition Hoover, R. molecular structure, and physicochemical properties of tuber and root starches: a review. Carbohydr. 45 (3), 253-267 (2001).
- Bertoft, E., Blennow, A. Structure of Potato Starch. Advances in Potato Chemistry and Technology. , 1st ed, El....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
