הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

למבוגרים עכבר ורידי יתר לחץ דם דגם: עורק תרדמה משותף לחיצוני הצוואר וריד השקה.

13.8K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/50472

⸱

27 בינואר 2015

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Anesthesia and Perioperative Care and Center for Cerebrovascular Research, University of California, San Francisco, 2Department of Neurological Surgery, University of California, San Francisco, 3Department of Neurology, University of California, San Francisco

במאמר זה

סיכום

אנו מתארים שיטה ליצירת מודל אמין של יתר לחץ דם ורידים במוח בעכבר הבוגר. מודל זה תואר בהרחבה ונבדק בחולדה. עמית החדש בעכברים פותח את האפשרות של שימוש בבעלי חיים מהונדסים גנטיים ובכך מרחיב את היישומים של המודל.

תקציר

ההבנה של הפתופיזיולוגיה של מומים arteriovenous מוח וfistulas arteriovenous השתפרה הודות למודלים של בעלי חיים. מודל חולדה יצירת פיסטולה מלאכותית בין עורק התרדמה המשותפת (CCA) ווריד הצוואר החיצוני (EJV) תואר בהרחבה והוכיח אפשרי מבחינה טכנית. מבנה זה מעורר יתר לחץ דם עולה בקנה אחד מוחין ורידים (CVH), ולכן סייע לומד את תרומתם של יתר לחץ דם ורידים להיווצרות, תסמינים קליניים, והפרוגנוזה של AVMs המוח וAVFs dural. מודלים בעכברים מקבילים תוארו רק בקושי והראו בעיות עם היצרות של פיסטולה. מודל עכברי הוקם יאפשר המחקר של הפתופיזיולוגיה לא רק, אלא גם טיפולים גנטיים למחלות כלי דם במוח פוטנציאליים אלה.

אנו מציגים מודל של פיסטולה arteriovenous שמייצר יתר לחץ דם ורידים תוך גולגולתי עמידה בעכבר. o השקה מייקרוf העכברית CCA וEJV יכולים להיות קשה בשל האנטומיה זעירה ולעתים קרובות לגרום לפיסטולה אינו פטנט. בפרוטוקול צעד-אחר-צעד זה אנו מטפלים בכל האתגרים החשובים נתקלו במהלך הליך זה. הימנעות הכחשה מופרזת של הווריד במהלך החשיפה, באמצעות 11-0 תפרים במקום 10-0, ומה שהופך את השקה קצה לצד מתוכננת בקפידה כמה שלבים הקריטיים. למרות ששיטה זו דורשת מיומנות מייקרו מתקדמת ועקומה למידה ארוכה יותר ששווה הערך בחולדה, זה יכול להיות מפותח באופן עקבי.

מודל חדשני זה תוכנן לשלב טכניקות עכבר מהונדסים עם מערכת ניסיונית בעבר ומבוסס שהוכיחה שימושי ללמוד AVMs המוח וAVFs dural. על ידי פתיחת האפשרות של שימוש בעכברים הטרנסגניים, ספקטרום רחב יותר של דגמים תקפים ניתן להשיג והוא יכול להיות גם נבדקו טיפולים גנטיים. המבנה הניסיוני גם יכול להיות מותאם בהמשך למחקר של otמחלות כלי דם במוח הקשורים עם יתר לחץ דם ורידים כגון מיגרנה, אמנזיה הגלובלית חולפת, עיוורון משקפת חולף, וכו '

מבוא

מודלים של בעלי החיים של יתר לחץ דם ורידי המוח הוכיחו להיות כלי מרכזי בהבנת הפתופיזיולוגיה של מומים arteriovenous מוח וfistulas arteriovenous 1-7. שימוש נרחב ביותר הוא מודל העכברים שנוצר באמצעות פיסטולה מלאכותית בין עורק התרדמה המשותפת (CCA) ווריד הצוואר החיצוני (EJV), אשר מעורר יתר לחץ דם ורידים במוח עולה בקנה אחד (CVH) בחולדה 1,8-10. מודלים בעכברים שווי ערך, על ידי פתיחת האפשרות לשימוש בזני עכברים הטרנסגניים שונים, יאפשר מחקר נוסף על הפתופיזיולוגיה לא רק, אלא גם טיפולים גנטיים למחלות כלי דם במוח פוטנציאליים אלה. יתר על כן, המבנה הניסיוני יכול גם להיות מותאם בהמשך למחקר של מחלות כלי דם במוח אחרות הקשורים עם יתר לחץ דם ורידים כגון מיגרנה, אמנזיה הגלובלית חולפת, עיוורון משקפת חולף, וכו '11 עם זאת, ניסיונות קודמים להקים h מודלים בעכברים אלהave הפגין קשיים עם patency של פיסטולה בשל האנטומיה הזעירה 5,12. כאן אנו מתארים פרוטוקול צעד-אחר-צעד שלנו להשקה מוצלחת של העכברי CCA וEJV שמיתרגם פיסטולה פטנט לטווח ארוך ויתר לחץ דם ורידים עמיד בעכבר.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1. הכנת העכבר

  1. לגרום להרדמה כללית בעכבר עם גז isoflurane. להזריק 0.15 מיליליטר של brupenorphine intraperitoneal לניהול כאב. לפני שימשיך, לבדוק אם רמת ההרדמה היא משביעה רצון על ידי לדקור כפות של העכבר.
  2. שים את העכבר שכיבה על גב עם ארבעה הגפיים קבועים על ידי דבק. להסיר את השיער של הצוואר וחזה העליון עם מספריים. באמצעות הזרקה תת עורית, לנהל .2-0.4 מיליליטר של תמיסת מלח 0.9% כדי לשמור על עכבר התייבשות במהלך ההליך הכירורגי.
  3. הכן את שדה הניתוח הבא שיטה סטרילית קפדנית. האזור של החתך בעור יש לנקות עם אלכוהול 90%.

2. ביתור עורקי התרדמה המשותפת והחיצוני הצוואר הווריד

  1. לעשות חתך בצוואר הרחם קו האמצע אופקי על פני אזור הצוואר התחתון של העכבר. לאחר העמקת הפצע, לרומם את בלוטות רוק ורקמות רכות בצוואר הרחם באמצעות בתפר raction (איור 1). לחשוף את הווריד הנכון החיצוני הצוואר (EJV) לרוחב לשריר sternocleidomastoid (SCM). צעד זה צריך להתבצע תחת מיקרוסקופ, מאז מתיחה מוגזמת על הווריד עלולה לפגוע בו ולגרום לפקקת שלה.
  2. זהירות לנתח EJV תקין לאורך מסלולו מעצם הבריח לבסיס הגולגולת. בדרך כלל מלקחיים דו קוטביים חשמליים, להקריש ולחלק כל סניפים להכין אורך מתאים למיקום מאוחר יותר הזמני קליפ וההשקה.
  3. לרוחב לקנה הנשימה והמדיאלי לSCM, לחקור את עורק התרדמה המשותף (CCA). יש לחשוף אותו בזהירות מעצם הבריח רק כדי מעבר הסתעפות שלה לתוך עורקי הראש החיצוניים ופנימיים. במהלך שלב זה, יש לתת תשומת לב שוב כדי למנוע מתיחת יתר לEJV שמאוחר יותר עלול לפגוע בpatency של ההשקה.

3. הכנת ההשקה

  1. לקשור את המרכז לאמנות עכשווית בניו יורק 10-0לון רק הפרוקסימלי להסתעפות שלה. בשלב הבא, תחול קליפ זמני על הפרוקסימלי CCA הקרוב לעצם הבריח ככל האפשר.
  2. ברגע שהזרימה הופסקה, תחצה את העורק ממש מתחת למייתר הסתעפות ולהשקות אותו עם מי מלח כדי לשטוף את כל דם שנותר בתוך לומן. הימנע קרישה דו קוטבית בשלב זה, מאז פציעה התרמית לקיר העורק יכולה לשים את ההשקה העתיד בסכנה.
  3. על מנת לשפר את הנראות של הקצוות של EJV, הקיר המדיאלי מסומן עם עט סימון כחול לאורך המסלול של venotomy המתוכנן. ברגע שEJV מסומן, להשתמש תפר 10-0 ולקשור את הקצה הדיסטלי כזנב ככל האפשר ולהחיל קליפ כלי דם זמני על הקצה הפרוקסימלי כגולגולת ככל האפשר.
  4. עם מזרק 30 מחט G ו 0.5 מיליליטר בסדר, להפוך את צמצם ראשוני על האזור המסומן של EJV ומייד להשקות את לומן עם מי מלח כדי למנוע היווצרות קרישי דם. בשלב הבא, להאריך את venotomy עם microscissorsעד האורך הוא כ 2-3 פעמים הקוטר של המרכז לאמנות העכשווית. הימנע אלים מתיחה ולשים לב כדי לשמור על חוד החנית חד ומסודר.
  5. בקירוב את סוף CCA לEJV. לעשות חתך לחתוך צד בסופו של התורם של המרכז לאמנות העכשווית כדי להתאים את הקוטר לאורך לגודל venotomy (איור 2).

4. קצה לצד השקה

  1. השתמש תפר ניילון 11-0 monofilament להשקת קצה לצד המרכז לאמנות עכשווית לEJV. תפירת הקיר המדיאלי של ההשקה בכיוון craneo-הזנב היא הצעד הראשוני. כל תפר צריך להיות ממוקם מחוץ-בקיר הוורידים הראשון (איור 3) ומבפנים החוצה דפנות העורקים (איור 4) הבא. זה יהיה לשמור על הקשר על פני השטח החיצוניים של כלי anastomotic בכל העת (איור 5). כך או מופרע או ניתן להשתמש תפרים רציפים, אבל כל התפרים רציפים יש להדק כשלב הסופי.
  2. Oפליטות הקיר המדיאלי כבר נתפר, לחזור על התהליך מהזנב לגולגולת עם הקיר לרוחב. עכשיו כל תפר צריך להיות ממוקם מחוץ-בקיר העורק ראשון וממבפנים החוצה קיר הוורידים הבא. השקיה מלוחה תעזור לשמור על לומן של ההשקה גלויה בכל העת במהלך ההליך.
  3. לאחר שסיים את כל השלבים של ההשקה, להסיר את הסרטון הזמני מהווריד ראשון ומהעורק הבא. דם העורקים יזרום לתוך EJV עם דליפה קטנה אין או מההשקה (ראה קטעי וידאו דגם VH ומודל VH 2). הדימום המינימלי צריך להפסיק ללא שימוש בדחיסת צמר גפן מעל להשקה. זה יש להימנע כדי למנוע פקקת של הווריד העדין.
  4. ברגע שpulsatile לזרום דרך ההשקה הוא אישר ולא דימום לכאורה הוא ציין, להשקות את שדה הניתוח עם מי מלח ולסגור את החתך בצוואר הרחם עם תפר 6-0 ניילון. לבסוף, לנהל 0.15 מיליליטר יותר של intrapbrupenorphine eritoneal לניהול כאב שלאחר ניתוח ו.2-.4 מיליליטר של תמיסת מלח 0.9% תת-עורי לחדש כל איבוד דם במהלך הניתוח.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

תוצאה מוצלחת של המודל היא פיסטולה arteriovenous פטנט שגורמת יתר לחץ דם ורידים במוח העכברי. כדי לאמת את המודל שנמדדנו לראשונה הלחץ תוך גולגולתי בורידי סינוס sagital של העכברים ב 2, 3 ו -4 שבועות לאחר ניתוח. 6 עכברים אחרים מונו לכל קבוצת זמן. לחץ סינוס היה 8.8 ± 1.2 מ"מ כספית בקבוצה נמדד שבועיים לאחר הניתוח. בעכברים 6 נמדדו 3 שבועות לאחר הניתוח, לחץ סינוס היה 4.7 ± 1.4 מ"מ כספית. לבסוף, 6 העכברים נמדדו 4 שבועות לאחר הניתוח היה לחץ הסינוס של 3.9 ± 0.6 מ"מ כספית

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

יתר לחץ דם ורידים במוח שנגרם כבר קשור באופן הדוק עם ביטויים קליניים חמורים יותר ופרוגנוזה גרועה בחולים עם AVFs dural וAVMs המוח 3. תופעות אלה של CVH נחקרו בהרחבה במודלים של עכברים 1,2,8. מודל מקביל בעכבר יאפשר את השימוש בבעלי החיים מהונדסים גנטי שסופו של דבר יאפשר הניתוח של מסלולים מולקולריים המעורבים בפתוגנזה של יתר לחץ דם ורידים ומערכת היחסים שלה עם AVF dural וAVM המוח.

כאן, אנו מדווחים על...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

הפרוצדורות עם חיות מעבדה אושרו על ידי הוועדה המוסדית הטיפול בבעלי חיים ושימוש באוניברסיטה קליפורניה, סן פרנסיסקו (UCSF).

אי לנו פוטנציאל לניגודי עניינים הנוגעים לתרופות וחומרים המשמשים בהליך זה.

תודות

פרויקט זה נתמך בחלקו על ידי NIH T32 GM008440 לאספן ווקר, R01 NS27713 לוויליאם L.Young, NS44155 P01 לוויליאם L.Young והואה סו, R21 NS070153 להואה SU ועל ידי איגוד לב האמריקאי AHA 10GRNT3130004 להואה סו. ד"ר אנה רודריגז-הרננדז נתמך על ידי מענק מ" Obra החברתי La Caixa "

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
10-0 מיקרו-תפר סטרילי ArosurgicalIC.
VT5A010Q10 11-0 מיקרו-תפר סטריליארוכירורגי ICVT4A00N07
DUROTIP מספרייםAesculapBC210R
מיקרו-אדסון רקמות מלקחייםAesculapBD510R
מיקרו מספרייםAesculapOC496R
מיקרו מלקחיים #5 תכשיטניםAesculapBD331R
זוויתי תכשיטנים מלקחייםAesculapBD329R
מלקחיים מיקרו תפריםAesculapBD338R
מחזיק מחט DUROGRIPAesculapBM009R

מקורות

  1. Bederson, J. B., Wiestler, O. D., Brüstle, O., Roth, P., Frick, R., Yaşargil, M. G. Intracranial venous hypertension and the effects of venous outflow obstruction in a rat model of arteriovenous fistula. Neurosurgery. 29, 341-350 (1991).
  2. Gao, P., Zhu, Y., Ling, F., Shen, F., Lee, B., Gabriel, R. A., Hao, Q., Yang, G. Y., Su, H., Young, W. L. Nonischemic cerebral venous hypertension promotes a pro-angiogenic stage through HIF-1 downstream genes and leukocyte-derived MMP-9. J. Cereb. Blood Flow Metab. 29, 1482-1490 (2009).
  3. Kim, H., Su, H., Weinsheimer, S., Pawlikowska, L., Brain Young, W. L. arteriovenous malformation pathogenesis: a response-to-injury paradigm. Acta Neurochir. Suppl. 111, 83-92 (2011).
  4. Lawton, M. T., Arnold, C. M., Kim, Y. J., Bogarin, E. A., Stewart, C. L., Wulfstat, A. A., Derugin, N., Deen, D., Young, W. L. Radiation arteriopathy in the transgenic arteriovenous fistula model. Neurosurgery. 62, 1129-1138 (2008).
  5. Lawton, M. T., Stewart, C. L., Wulfstat, A. A., Derugin, N., Hashimoto, T., Young, W. L. The transgenic arteriovenous fistula in the rat: an experimental model of gene therapy for brain arteriovenous malformations. Neurosurgery. 54, 1463-1471 (2004).
  6. Schaller, B., Graf, R., Sanada, Y., Tolnay, M., Rosner, G., Wienhard, K., Heiss, W., D, Hemodynamic changes after occlusion of the posterior superior sagittal sinus: an experimental PET study in cats. AJNR Am J Neuroradiol. 24, 1876-1880 (2003).
  7. Zhu, Y., Lawton, M. T., Du, R., Shwe, Y., Chen, Y., Shen, F., Young, W. L., Yang, G. Y. Expression of hypoxia-inducible factor-1 and vascular endothelial growth factor in response to venous hypertension. Neurosurgery. 59, 687-696 (2006).
  8. Herman, J. M., Spetzler, R. F., Bederson, J. B., Kurbat, J. M., Zabramski, J. M. Genesis of a dural arteriovenous malformation in a rat model. J. Neurosurg. 83, 539-545 (1995).
  9. Terada, T., Higashida, R. T., Halbach, V. V., Dowd, C. F., Tsuura, M., Komai, N., Wilson, C. B., Hieshima, G. B. Development of acquired arteriovenous fistulas in rats due to venous hypertension. J. Neurosurg. 80, 884-889 (1994).
  10. Yassari, R., Sayama, T., Jahromi, B. S., Aihara, Y., Stoodley, M., Macdonald, R. L. Angiographic, hemodynamic and histological characterization of an arteriovenous fistula in rats. Acta Neurochir (Wien). 146, 495-504 (2004).
  11. Solheim, O., Skeidsvoll, T. Transient global amnesia may be caused by cerebral vein thrombosis. Med. Hypotheses. 65, 1142-1149 (2005).
  12. Yang, B., Shergill, U., Fu, A. A., Knudsen, B., Misra, S. The mouse arteriovenous fistula model. J Vasc Interv Radiol. 20, 946-950 (2009).
  13. Choi, E. J., Choi, E. J., Walker, E. J., Shen, F., Oh, S. P., Arthur, H. M., Young, W. L., Su, H. Minimal Homozygous Endothelial Deletion of Eng with VEGF Stimulation Is Sufficient to Cause Cerebrovascular Dysplasia in the Adult Mouse. Cerebrovascular diseases. 33, 540-547 (2012).
  14. Hao, Q., Su, H., Marchuk, D. A., Rola, R., Wang, Y., Liu, W., Young, W. L., Yang, G. Y. Increased tissue perfusion promotes capillary dysplasia in the ALK1-deficient mouse brain following VEGF stimulation. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 295, H2250-H2256 (2008).
  15. Su, H., Hao, Q., Shen, F., Zhu, Y., Lee, C. Z., Young, W. L., Yang, G. Y. Development of a cerebral microvascular dysplasia model in rodents. Acta Neurochir. Suppl. 105, 185-189 (2008).
  16. Walker, E. J., Su, H., Shen, F., Degos, V., Jun, K., Young, W. L. Bevacizumab Attenuates VEGF-Induced Angiogenesis and Vascular Malformations in the Adult Mouse Brain. Stroke; a journal of cerebral circulation. , (2012).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

יתר לחץ ורידי מוחימודל עכבריםאנסטומוזיס מיקרו-כירורגיתמעקף קצה-אל-צדפיסטולה ורידיתפרוטוקול כירורגיעכברים טרנסגנייםלחץ תו-גולגולתי
למבוגרים עכבר ורידי יתר לחץ דם דגם: עורק תרדמה משותף לחיצוני הצוואר וריד השקה.
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.