ניתן לשלב nanosensors סול ביולוגית pH מגיב לפולי (חומצה לקטית-Co-גליקולית) (PLGA) פיגומי electrospun. פיגומי דיווח עצמיים המיוצרים יכולים לשמש לניטור באתר של תנאי microenvironmental תוך תאי culturing על הפיגום. זה מועיל כמבנה התאי 3D יכול להיות במעקב בזמן אמת מבלי להפריע לניסוי.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
במאמר זה
סיכום
תקציר
תאי culturing ב-3D על פיגומים המתאימים חשבו לחקות טוב יותר vivo microenvironment ובלהגדיל את תאי תאי אינטראקציות. המבנה התאי 3D וכתוצאה מכך לעתים קרובות יכול להיות יותר רלוונטי ללימוד אירועים המולקולריים ותאי תאי אינטראקציות יותר מניסויים דומים למדו ב2D. כדי ליצור תרבויות 3D יעילות עם כדאיות גבוהה תא לאורך כל פיגום תנאי התרבות כגון חמצן וצורך pH להיות מבוקרים בקפידה כהדרגתי בריכוז אנליטי יכולים להתקיים לאורך כל מבנה 3D. כאן אנו מתארים את השיטות של הכנת nanosensors ביולוגית pH מגיב סול ושילובם בפולי (חומצה לקטית-Co-גליקולית) (PLGA) פיגומי electrospun יחד עם ההכנה הבאה שלהם לתרבות של תאי יונקים. הפיגומים מגיבים pH יכולים לשמש ככלי לקביעת pH microenvironmental בתוך מבנה תאי 3D. יתר על כן, אנו מפרטים את המסירה של nanose התגובה pHnsors לסביבה תאית של תאי יונקים הצמיחה שנתמך על ידי פיגומי PLGA electrospun. מיקום cytoplasmic של החיישנים הזעירים מגיבים pH יכול להיות מנוצל כדי לפקח על ה-pH תאית (אובדן כושר עבודה) במהלך ניסויים מתמשכים.
מבוא
אסטרטגיה מרכזית בהנדסת רקמות היא השימוש בחומרים ביולוגית לפברק פיגומי המורפולוגיה דומה לרקמה שזה הולך להחליף, והוא גם מסוגל לתמוך בצמיחת תא ותפקודו 1,2. הפיגום מספק תמיכה מכאנית כך שהוא מאפשר מצורף תא ושגשוגם עדיין מאפשר נדידת תאים לאורך הסדקים של מבנה תאי 3D. הפיגום חייב גם לאפשר לתחבורה ההמונית של חומרים מזינים סלולריים ולא לעכב פינוי פסולת המטבולית 3.
Electrospinning התפתחה שיטה מבטיחה עבור הייצור של פיגומים פולימריים מסוגלים לתמוך 4-6 צמיחה הסלולר. סיבי electrospun ארוגים המיוצרים מתאימים לצמיחת תאים כפי שהם לעתים קרובות נק....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
סקירה
סעיף 1 מתאר את ההכנה של nanosensors התגובה pH ואפיון של תגובת nanosensor ל-pH באמצעות ספקטרומטריית הקרינה ואת גודלם באמצעות SEM.
סעיף 2 מתאר את הכנת פיגומי פולימר electrospun והאפיון של המורפולוגיה שלהם ואת הגודל באמצעות SEM. סעיף 2 גם מתאר את ההכנה של פיגומי דיווח עצמיים שהם פיגומי electrospun עם הצטרפותם של החיישנים זעירים מגיבים ה-pH. פיגומי דיווח עצמי וכתוצאה מכך הם מתאפיינים בSEM להעריך האם כל שינויים מורפולוגיים בסיבי electrospun התרחשו. הקרינה מפיגומי דיווח העצמי הנובעים מהחיישנים ה....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
התפלגות הגודל של החיישנים הזעירים מגיבים pH מוכנים התאפיינה באמצעות SEM, שבו האוכלוסייה של nanosensors צילם נמדדה ונמצאה כי ממדי ננומטר בטווח של 240-470 ננומטר (איור 1 א). ההישג של קוטר צר וקטן למדי בקנה אחד עם שימוש בשיטת Stober להכין חלקיקים. זה נמצא כי שימוש בסביבת ה-pH בסיסית במהלך הסינתזה של חלקיקים כלומר חלקיקים מוכנים תוך שימוש בשיטת Stober, מאפשר שליטה טובה של הגודל, ואילו הכנה באמצעות תנאים חומציים מייצרת פיזור רחב בגודל חלקיקים. micrographs SEM .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
הנדסת רקמות שואפת ליצור תחליפים ביולוגיים שיכולה לשמש גם כin vivo כמו במבחנה מודלים רקמות ובטיפול בתחליפי רקמות לתקן, להחליף, לשמר או לשפר את התפקוד של רקמה או איבר מסוים. תחליפים סינטטיים היו בשימוש במשך שנים רבות כדי להחליף או לתקן את הסיוע של רקמות אך אלה לעתים קרובות אינם מצליחים בשל שילוב עני עם רקמת המארח ו / או זיהום, שסופו של דבר מוביל לדחייה או ניתוח תיקון נוסף. יצירת רקמת חיה במעבדה לפני ההשתלה יכולה להתייחס לנושא של השגת אינטגרציה מלאה ולהפחית את הצורך.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.
תודות
מימון מBBSRC הוא הודה בחביבות (מספר מענק BB H011293 / 1).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| אתנול | פישר | 32221 | |
| דימתילפורממיד נטול מים (DMF) | Sigma | 270547 | |
| אמוניום הידרוקסיד 50% (v/v) תמיסה מימית | Alfa Aesar | 35574 | מדולל ל-30% (v/v) עם מים טהורים |
| TEOS | Sigma | 13190-3 | |
| 3-Aminopropyltriethoxysilane (APTES) | Sigma | A3648 | |
| 5-(ו-6)-קרבוקסיפלואורסצאין, אסתר סוקסינימידיל (FAM-SE) | Invitrogen | C1311 | |
| 6-carboxytetramethylrhodamine, אסתר סוקסינימידיל (TAMRA-SE) | Invitrogen | C1171 | |
| נתרן פוספט מונו-בסיסי (0.2 מ') | Sigma Aldrich | S-9638 | |
| נתרן פוספט דו-בסיסי (0.2 מ') | Sigma Aldrich | S-0876 | |
| NaOH | Sigma Aldrich | S8045 | |
| טריפסין/EDTA | סיגמא אולדריץ' | T4174 | |
| פניצילין/סטרפטומיצין | סיגמא אולדריץ' | P0781 | |
| PBS | סיגמא אולדריץ' | D8537 | |
| DMEM | סיגמא אולדריץ' | D6046 | |
| FBS מקור Bioscience | אצווה-213-101992 | ||
| L-גלוטמין | סיגמא אולדריץ' | G7513 | |
| Lipofectamine 2000 | Invitrogen | 11668-019 | |
| Optimem | Invitrogen | 11058-021 | |
| LysoTracker Red | Invitrogen | L-7528 | |
| Draq5 | Biostatus Ltd | DR50050 | |
| גז חנקן | BOC | ||
| DCM | סיגמא אולדריץ' | 320269 | |
| TFA | Sigma Aldrich | T6508 | |
| מיקרוסקופ קונפוקלי | Leica TCS-SP | מצויד בלייזרים ארגון וקריפטון ועדשת טבילה במים 63X 0.9NA | |
| אור UV | UVLS28 UVP, ארה"ב | ||
| צלחת בוחש | SB161-3 Jencons-PLS | ||
| מד pH | Jenway דגם 3510 | ||
| מאייד סיבובי | Buchi Rotary מאייד R200 | ||
| צנטריפוגה (ננו-חיישנים) | Hermle Z300 | ||
| (תרבית תאים) | Thermo Scientific Heraeus Biofuge Primo | ||
| Vortex | Whirlimixer Fisherbrand | ||
| Ultrasonicator | FB11021 Fisherbrand | ||
| גיליון אלומיניום | אוניברסיטת | ||
| צלחת תרבית תאים 35 מ"מ | איוואקי | 3000035 | |
| מזרק 10 מ"ל | בקטון דיקנסון | ||
| 3T3 תאי פיברובלסטים | אוסף אירופאי של תרביות | ||
| PLGA | Lakeshore Biomaterials | 7525 DLG 7E | |
| Pyridinium formate | Sigma Aldrich | P8535 | |
| Trypan blue | Sigma Aldrich | T8154 | |
| נתרן פוספט מונו-בסיסי | סיגמא אולדריץ' | S9638 | |
| נתרן פוספט דו-בסיסי | סיגמא אולדריץ' | S5136 | |
| HCl | סיגמא אולדריץ' | 320331 |
מקורות
- Takimoto, Y., Dixit, V., Arthur, M., Gitnick, G. De novo liver tissue formation in rats using a novel collagen-polypropylene scaffold. Cell Transplantation. 12 (4), 413-421 (2003).
- Sales, V. L., Engelmayr, G. C., et al.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
