トウモロコシとテオシンテ線における ウスチラゴ の病原性を評価するための迅速かつ効率的な方法

Summary

メズおよびテオシンテ植物を生物栄養病原体 ウスチラゴメイディス で接種する注射法の使用について説明する。 針注射接種方法は、病原体がアプリソリアの形成を通じて植物に入る植物葉の間の真菌病原体の制御された送達を促進する。この方法は非常に効率的で 、U.maydisで再現可能な接種を可能にします。

Abstract

トウモロコシは世界中の主要な穀物作物です。しかし、生物栄養病原体に対する感受性は、生産性を高めるための主要な制約である。 U.maydis は、トウモロコシの生物栄養真菌病原体およびトウモロコシスムートの因果剤である。この病気は、米国で年間約10億ドルの著しい収量損失を引き起こします¹ 作物の回転を含むいくつかの方法, 殺菌剤の適用と種子治療は、現在、トウモロコシのスマットを制御するために使用されています^2.しかし、ホスト抵抗は、トウモロコシスマットを管理するための唯一の実用的な方法です。種々の生物栄養病原体に耐性のあるトウモロコシ、小麦、米などの作物植物の同定は、毎年^3〜5の収量損失を著しく減少させている。したがって、植物葉間で病原体を効率的かつ再現的に送達する病原体接種方法を用いることは 、U.maydisに耐性のあるトウモロコシ株の迅速な同定を容易にするであろう。として 、U.maydisに耐性のあるトウモロコシラインを識別するための第一歩として、ニードル注射接種法および抵抗反応スクリーニング方法を利用して、トウモロコシ、テオシンテ、トウモロコシxテオシンテイントログレスラインを U.maydis 株で接種し、耐性植物を選択した。

トウモロコシ、テオシンテ及びトウモロコシxテオシンテ内線は、約700の植物からなる、植え付け 、U.maydisの株で接種し、抵抗性をスクリーニングした。接種およびスクリーニング方法は 、U.maydisに耐性のある3つのテオシンテ線を同定することに成功した。ここでは、トウモロコシ、テオシンテ、及びトウモロコシxテオシンテイントログレスラインの詳細な注射接種及び抵抗反応スクリーニングプロトコルが提示される。この研究は、針注射接種が植物の葉の間に U.maydis を効率的に供給できる農業における貴重なツールであり、現在組み合わせることができ、改善された疾患耐性のための繁殖プログラムでテストすることができる U.maydis に耐性のある植物ラインを提供していることを示しています。

Introduction

植物の真菌病は、農業に対する最も重要な脅威の1つを表しています。世界人口の増加に伴い、食のニーズが高まる中、耐病性の向上を伴う作物の開発が必要とされています。植物病原体は自然に作物収量に悪影響を与える疾患を引き起こすフィールドの作物植物に感染^{する 6}.耐性植物を同定し、利用することは抵抗を改善し、収量損失を減少させることができることが示されている。植物病原体を植物に接種し、耐性ライン⁷を選択することにより、トウモロコシ、小麦、米、ソルガムを含む多くの植物種において耐性品種が同定されている。したがって、効率的な接種方法の開発と使用は、多くの植物を接種し、抵抗性のためにスクリーニングすることを可能にするであろう。浸入接種、病原体細胞懸濁培養を植物の渦にピペット化、注射注射^8~11の注射など様々な接種方法が用いられている。各方法を用いて、病原体は、病原体の発達と植物感染^を確実に行うために、アプレソリアの形成を通じて植物に入る植物葉の間に確実に導入されなければならない。

浸潤接種法は、植物苗を病原体細胞懸濁培養物に浸入することを含み、ピペット法では病原体細胞懸濁液を植物苗の渦に入れる必要がある。ただし、両方の方法に問題があります。第一に、どちらの方法も、葉表面から植物組織への病原体の自然な動きに依存する。ほとんどの病原体は、自然に植物の葉表面に口孔や傷を介して植物に入ります.しかし、植物の葉表面を....

Protocol

1. 植物材料の成長

1. 接種とスクリーニングのための植物ラインを選択します。この作業には、2つのトウモロコシライン、5つのテオシンテライン、および40のトウモロコシxテオシンテ線が、この作業に使用された。
2. 実験用植物種子(U.maydis 注射)および制御(水注入)針注入接種実験。各プラントラインに対してこれを行います。
3. 小さなフラットに各植物ラインの4つの種子(複製)を植える指で約1/2インチの種子を土に押し込み、軽く土で覆う(図1Aと 1B)。土を種の上に詰めないでください。種を深く植えたり、種の上に土を詰め込んだりすると、苗の出現に問題が生じる可能性があります。
4. 種子を土に水を入れます。土壌が浸され、種子が水を浸した後も土壌の下に残っていることを確認してください。
5. 水をやった後、昼と夜の環境で植物を配置し、昼と夜の環境は28/20°Cの温度と14/10時間の光周期、キャノピーの上部に約500 μmol/m²秒   の光合成活性放射線。昼夜の相対湿度を、それぞれ約70%と90%に保つ。
6. すべての植物を同じ成長室に保管して、実験全体で一致する成長環境....

Results

針注射の接種に成功した場合、U.maydis(実験)で接種された植物の表現型を可視化することによって決定することができる。実験植物の大部分は、U.maydis感染の影響を受けやすかった。この影響を受けやすい植物は、黒色の管門を有する茎および基底胆汁形成によって示される非常に重篤な疾患の発症を示した(図3Dおよび3E、表2)。いくつかの植物は、病気の重症度のために接種後に死亡した。米国メイディスに耐性のある3つのトウモロコシxテオシンテ内線が同定された。U.maydisに耐性のある植物については、軽度クロロシス、アントシアニン産生またはマイナー葉の胆汁形成によって成功した接種が実証された。(図3A-Cおよび表2)

実験植物について観察された表現型が接種の結果であることを確認するために、実験植物と対照植物の表現型(水接種)を比較した。実験植物は、上.......

Discussion

本研究では、700トウモロコシとテオシンテ植物の茎に U.maydis の株を送達するために使用される針注射接種方法が成功した。さらに、改訂された疾患耐性評価尺度を使用して、植物をスクリーニングし、病原体の発達を検出した。両方の方法を使用した結果 、U.maydis に耐性のある植物ラインが700トウモロコシとテオシンテ植物の間で同定され、現在は組み合わせることができ、改善された耐病性のための繁殖プログラムでテストすることができます。

ほとんどの接種方法と同様に、同じラインから植物の間で同じ抵抗表現型を再現する能力が不可欠です。さらに、同じ抵抗性の型は、少なくとも2つの別々の実験^20,21で観察されなければならない。植物表現型を得る能力は、耐性であるか、影響を受けやすいかにかかわらず、主に病原体が植物組織にアクセスする能力によって決定されるので、各接種を離れる植物の間に病原体を送達する接種方法を選択することが非常に重要である。 研究者がU.maydis などの生物栄養真菌病原体を用いた針注射接種方法に直面し.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
植物のための種子			元の十字架から集められた
成長チャンバー	Conviron	PGR14 REACH-IN
植栽フラット	Hummert International	14-3385-2
土壌 (松の樹皮 3 部、パーライト付きピート モス 1 部)	Hummert International	10-1059-2
層流フード	ラボ Conoco	70875372
病原体(U.maydis)または関心のある			ストックは元の培養から成長しました
滅菌ループ	フィッシャーサイエンティフィック	S17356A
ポテトデキストロース寒天(PDA)プレート	フィッシャーサイエンティフィック	R454311
インキュベーターを30°Cに設定。C	フィッシャーサイエンティフィック	11-690-650F
滅菌爪楊枝	マート	ウォルマートから購入し、オートクレーブで滅菌
C	ニューブランズウィック	14-278-179
分光光度計	フィッシャー サイエンティフィック	4001000
U. maydis 細胞懸濁液培養(1 x 106細胞/ ml)
mm x 1.3 cm皮下注射針	Kendall Brands	8881250321