يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

النقل عضية في مثقف ذبابة الفاكهة الخلايا: S2 الخط الخليوي والخلايا العصبية الابتدائية.

13.4K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/50838

⸱

نوفمبر 20, 2013

 ,  , 
1Department of Cell and Molecular Biology, Feinberg School of Medicine, Northwestern University, 2IKERBASQUE, Basque Foundation for Science

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

خلايا ذبابة الفاكهة S2 والخلايا العصبية مثقف هي أنظمة كبيرة للتصوير النقل عضية بالمحركات في الجسم الحي. نحن هنا تصف بروتوكولات مفصلة لزراعة كل من أنواع الخلايا، والتصوير، وتحليل النقل.

الملخص

خلايا ذبابة الفاكهة S2 مطلي على ساترة في وجود أي شكل من المخدرات depolymerizing الأكتين العمليات غير متفرعة طويلة مليئة الأنابيب الدقيقة الاستقطاب بشكل موحد. العضيات تتحرك هذه العمليات من قبل محركات أنيبيب. سهولة الصيانة، وحساسية عالية لبروتين رني بوساطة تدق إلى أسفل وإجراءات فعالة لإنشاء خطوط الخلايا مستقرة تجعل خلايا ذبابة الفاكهة S2 نظام نموذج مثالي لدراسة نقل البضائع عن طريق التصوير الحي. النتائج التي تم الحصول عليها مع الخلايا S2 يمكن تطبيقها إضافية لنظام أكثر ذات الصلة من الناحية الفسيولوجية: نقل محور عصبي في الخلايا العصبية الأولية مثقف من أجنة ذبابة الفاكهة فصلها. تنمو الخلايا العصبية مثقف neurites التي طويلة مليئة الأنابيب الدقيقة المجمعة، تشبه الى حد بعيد عمليات S2. كما هو الحال في خلايا S2، العضيات في الخلايا العصبية مثقف يمكن تصور من قبل أي عضية محددة الأصباغ الفلورية أو باستخدام علامات عضية الفلورسنت المشفرة بواسطة الحمض النووي حقنها في أجنة مبكرة أو المعبر عنها في transgenجيم الذباب. وبالتالي، النقل عضية يمكن تسجيلها بسهولة في الخلايا العصبية مثقف على coverslips الزجاج باستخدام التصوير الحي. نحن هنا وصف الإجراءات لزراعة وتصور نقل البضائع في خلايا ذبابة الفاكهة S2 والخلايا العصبية الأولية. ونحن نعتقد أن هذه البروتوكولات جعل كلا النظامين للوصول للمختبرات دراسة نقل البضائع.

المقدمة

اكتسبت خلايا ذبابة الفاكهة S2 شعبية متزايدة لدراسة العديد من العمليات الخلوية. وقد تم الحصول على هذه الخلايا في الأصل من trypsinized الأجنة مرحلة متأخرة من OregonR ذبابة الفاكهة السوداء البطن والحفاظ على ميزات مثل بلعم 1. خلايا ذبابة الفاكهة S2 توفر العديد من المزايا أكثر من خطوط الخلايا الأخرى. هم مثقف عند 25 درجة مئوية دون CO 2، ويمكن تصوير لساعات طويلة في درجة حرارة الغرفة دون الحاجة للتدفئة أو تبادل الغاز. الأهم من ذلك، خلايا ذبابة الفاكهة S2 حساسة للغاية للعلاج رني السماح كفاءة عالية من البروتينات ضربة قاضية من الفائدة. خلايا S2 هي transfectable للغاية وخطوط الخلايا مستقرة يمكن تحديدها في أقل من أربعة أسابيع للسماح للتعبير خارج الرحم مستقرة البروتينات المثيرة للاهتمام. خلايا S2 عادة تنمو إما فضفاضة يعلق ولكن لم ينتشر على قارورة أو في التعليق. أنها يمكن أن يتسبب في نشر coverslips على precoated مع كونكا كتين النباتnavalin A (كونا). هامش انتشار خلايا رقيقة خاصة، وبالتالي يعتبر مثاليا للفحص المجهري الخلية الحية. بروتوكولات مفصلة للثقافة الخلايا S2، العلاج رني، والتصوير ضوء الحية والمناعية ويمكن العثور عليها في 2،3 الأدب. وقد اعتمدت لدينا مختبر الخلايا S2 كنظام نموذج لدراسة نقل البضائع على أساس أنيبيب. خلايا ذبابة الفاكهة S2 تعامل مع أي نوع من المخدرات التي depolymerizes أو يقطع F-الأكتين، مثل مثبط حركة الخلايا D (CytoD)، وتنمو عمليات طويلة مليئة الأنابيب الدقيقة الاستقطاب بشكل موحد 4 -10، مما يجعله نظام مثالي لدراسة حركة نقل البضائع على طول صفائف أنيبيب. المعلمات النقل المختلفة في هذه العمليات (. أي أطوال المسارات، السرعات، الاتجاهية الخ) يمكن قياسها بسهولة باستخدام البرمجيات الآلي لتتبع الجسيمات، DiaTrack (Semasopht: http://www.microscopy.info/Organization/Details/4423، والدكتور باسكال Vallotton: http://www.csiro.au/en/Organisation-Structure/Divisions/Mathematics-Informatics-and-Statistics/PascalVallotton.aspx # A4). هذه الخصائص تجعل الخلايا S2 نظام جذابة لدراسة نقل البضائع على طول الأنابيب الدقيقة في الخلايا زراعة الأنسجة.

التجارب الرائدة في الخلايا S2 يمكن أن تمتد إلى نموذج مهمة من الناحية الفسيولوجية للدراسات نقل البضائع في ذبابة الفاكهة الخلايا العصبية الأولية. مماثلة لخلايا S2، الخلايا العصبية مثقف من أجنة فصلها هي قابلة للاختراق إلى جزيئات صغيرة مثل الأصباغ ومثبطات، وعالية الدقة التصوير الحي النقل عضية لا يمكن أن يؤديها في الخلايا العصبية في درجة حرارة الغرفة. باستخدام ذبابة الفاكهة مع خلفيات وراثية مختلفة، ونحن يمكن دراسة وظائف الجينات في الخلايا العصبية الأولية بالضربة القاضية (الجينية الخسارة من وظيفة الطفرات)، ضربة قاضية (الرنا المزدوج الجديلة حقن أو التعبير) أو التعبير خارج الرحم (الذباب المعدلة وراثيا). على وجه التحديد، تفتيت خيوط الأكتين باستخدام العلاج CytoD لا يمنع ثمرة neurite، بدلا من ذلك أنها تنمو بشكل أسرع، وبالتالي يمكننا دراسة أنيبيب-dependeالإقليم الشمالي النقل عضية في الخلايا العصبية CytoD المعاملة دون تأثير الأكتين خيوط 11. وبالتالي، الثقافات العصبية الأولية الجمع بين مزايا الخلايا زراعة الأنسجة وتطير الوراثة، مما يجعل من نظام كبير لدراسة نقل البضائع في نظام الفسيولوجية ذات الصلة 10،12. منذ قد يكون السبب العديد من الأمراض العصبية العائلية من قبل أو المرتبطة العيوب نقل البضائع (مثل مرض باركنسون 13، مرض هنتنغتون 14، 15،16 مرض الزهايمر، التصلب الجانبي الضموري / 17 ALS، وHMN7B بيري متلازمة 18،19، ومخيخي شوكي نوع ترنح 5/SCA5 20)، ويمكن الثقافات العصبية الأولية أن تكون مفيدة في تحليل آثار الطفرات محددة تسبب هذه الأمراض في وسائل النقل التي تعتمد على أنيبيب.

أخيرا، الخصائص الهامة النقل التي تعتمد على أنيبيب يتم حفظها جيدا بين الثدييات والذباب، ولكن الثقافة الوراثية وخلية ذبابة الفاكهة هو أقل تكلفة وتستغرق وقتا طويلا، لتبرير استخدام خلايا ذبابة الفاكهة مثقف لدراسة الجوانب الأساسية للنقل عضية في الظروف العادية والمرضية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. خلايا ذبابة الفاكهة S2

  1. إعداد coverslips كونا المغلفة

    1. وضع coverslips في رفوف السيراميك وغسلها عن طريق الغمر حامض الكروم لمدة 1 ساعة. [تحذير: حامض الكروم هو تآكل ويمكن أن يسبب تهيج العينين والأنف والحلق والجلد].
    2. شطف coverslips تماما مع تشغيل باستمرار DH 2 O لمدة 30 دقيقة حتى يتم غسلها تماما من حامض.
    3. اسمحوا الهواء coverslips الجافة ومعطف لهم مع CONA (محلول 0.5 ملغ / مل في DH 2 O) لمدة 30 دقيقة.
    4. شطف coverslips مع DH 2 O لمدة 15 دقيقة والسماح لهم الهواء الجاف. ويمكن تخزين coverslips كونا المغلفة يصل إلى 1 في الشهر.

  2. طلاء الخلايا

    1. تسمح للخلايا S2 لتنمو باطراد في T25 T75 أو سم 2 قوارير اعتمادا على عدد من الخلايا المطلوبة للتجربة.
    2. عد كثافة الخلايا باستخدام عدادة الكريات. إضافة 1 مل نمو مedium (على سبيل المثال الحشرات-إكسبرس) إلى 35 مم الأنسجة طبق الثقافة مع ساترة كونا المغلفة، وبلطف نقل ~ 1 × 10 5 خلايا إلى الطبق. هذا كثافة الخلية هو الأمثل للتصوير بسبب العمليات من خلايا مختلفة لا تتداخل.
    3. من أجل حمل تشكيل العمليات، وعلى الفور بعد الطلاء إضافة المتوسطة 1ML مع 5 ميكرومتر CytoD إلى الطبق (إلى تركيز النهائي من 2.5 ميكرومتر CytoD). تسمح التنمية الكاملة للعمليات التي يحتضنها الخلايا على الأقل لمدة 2 ساعة على 25 درجة مئوية قبل التصوير.

2. ذبابة الفاكهة الابتدائية العصبية الثقافة

  1. استعدادا للثقافة العصبية

    1. إعداد ذبابة الفاكهة المتوسطة نمو الخلايا العصبية (وسط شنايدر تستكمل مع: 20٪ مصل بقري جنيني، والحرارة المعطل في 55 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة، 5 ميكروغرام / الانسولين مل و 100 ميكروغرام / مل البنسلين، 100 ميكروغرام / مل الستربتوميسين، و 10 ميكروغرام / التتراسيكلين مل) . هذا سوبويمكن تخزين المتوسطة plemented شنايدر في 4 درجة مئوية لمدة 6 أشهر.
    2. إعداد قارورة عصير التفاح أغار لجمع أجنة ذبابة الفاكهة (22.5 ز آغار، 12.0 غرام السكروز و 750 مل H 2 O في قارورة 2 لتر؛ الأوتوكلاف لمدة 20-25 دقيقة، ويضاف 250 مل عصير التفاح وتصب ~ 10 مل في كل ذبابة الفاكهة قنينة، وبعد التصلب، والمكونات قارورة مع كرات من القطن، والتفاف قارورة مع التفاف البلاستيك الغذائي لتجنب ما يزيد على تجفيف الطعام). يمكن تخزين عصير التفاح في قارورة أجار في 4 درجة مئوية في أكياس من البلاستيك مختوم بشكل جيد لمدة 4 أسابيع.
    3. غسلها حمض معطف 25 ملم coverslips دائرة مع CONA (انظر التفاصيل في البروتوكول لخلايا ذبابة الفاكهة S2) وتعقيم منهم تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية لمدة 10-15 دقيقة. ويمكن تخزين هذه coverslips لمدة شهر.

  2. ذبابة الفاكهة الخلايا العصبية الجنينية الثقافة

    1. الذباب حفاظ على الشباب البالغين في قارورة عصير التفاح أجار تستكمل مع الخميرة الجافة لمدة 1-2 أيام قبل جمع الأجنة وأو إعداد الخلايا العصبية.
    2. في يوم جمع، من أجل مزامنة الأجنة التي تم جمعها، والذباب نقل الكبار إلى عصير التفاح أغار قارورة جديدة لمدة 1 ساعة precollection في ضوء وتجاهل هذه الأجنة.
    3. نقل الذباب لعصير التفاح أغار جديدة القارورة، وجمع الأجنة لمدة 1 ساعة، ونقل الذباب إلى قارورة أخرى لمدة ساعة أخرى، سواء في الظلام لزيادة الغلة الجنين.
    4. إزالة الذباب الكبار من عصير التفاح أغار قارورة والسماح للأجنة تطوير ساعة أخرى 4 إلى مراحل 9-11 في درجة حرارة الغرفة (4-6 الأجنة ساعة قديمة ما بين مرحلة 9-11).
    5. إزالة الأجنة من خلال دفق الماء في قارورة وتخفيف الأجنة من عصير التفاح أغار مع الفرشاة الصغيرة (مطلوبة لا يقل عن 10 أجنة واحدة جيدة الخلايا العصبية الإعدادية).
    6. نقل الأجنة إلى 100 ​​ميكرومتر شبكة النايلون مصفاة الخلية مع ماصة نقل لتصريف المياه (prerinse ماصة نقل في ذبابة الفاكهة غسل العازلة الجنين، 0.4٪ كلوريد الصوديوم، 0.03٪ تريتونX-100).
    7. جمع الأجنة من مصفاة باستخدام الفرشاة الصغيرة، ونقلها إلى 1.5 مل microtube مليئة 1 مل ذبابة الفاكهة غسل الجنين (ملاحظة: تنظيف أي ألياف القطن أجار أو باستخدام الفرشاة أو نصائح ماصة). في هذا البروتوكول، وmicrotube 1.5 مل يأتي مع مطابقة المتاح بيليه مدقة.
    8. غسل الأجنة في ذبابة الفاكهة غسل 3X الجنين.
    9. Dechorionate الأجنة في حل 1:1 جديدة من التبييض التجارية والايثانول 95٪ لمدة 10 دقيقة [تحذير: التبييض يمكن أن تسبب تهيج للعيون والأنف والحنجرة، والجلد].
    10. الانتقال إلى نسيج الثقافة هود، وغسل الأجنة في 2X تستكمل المتوسطة شنايدر.
    11. ترك 200-300 ميكرولتر المتوسطة في أنبوب مع الأجنة، وبلطف فصل ميكانيكيا باستخدام أجنة dechorionated كيمبل تشيس المطاحن بيليه القابل للتصرف التي تم تعقيمها بواسطة الايثانول 70٪ (طحن 10-15X).
    12. أجهزة الطرد المركزي الخليط المتجانس في 20 x ج لمدة 2 دقيقة، وهيئة تنظيم الاتصالاتnsfer طاف لأنبوب جديد. [هذه الخطوة اختيارية، بل يساعد على إزالة الحطام الجنين]
    13. أجهزة الطرد المركزي لطاف في 550 x ج لمدة 2 دقيقة لتكوير الخلايا.
    14. resuspend وبيليه في 500 ميكرولتر تستكمل الخلايا المتوسطة وتدور شنايدر إلى أسفل مرة أخرى في 550 x ج لمدة 2 دقيقة، كرر دورة إعادة تعليق الغزل مرة واحدة.
    15. أخيرا resuspend وبيليه في 100 ميكرولتر ~ تستكمل المتوسطة شنايدر ولوحة الخلايا في الصعود إلى 25 ملم ساترة كونا المغلفة في العقيمة 35 ملم طبق بيتري. احتضان لمدة 10 دقيقة للسماح مرفق الخلية.
    16. إضافة 2 مل من المتوسط ​​تستكمل شنايدر، مع 5 ميكرومتر CytoD لغمر ساترة مع الخلايا المرفقة.
    17. احتضان الطبق في ترطيب 25 º C حاضنة بين عشية وضحاها قبل التصوير.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

خلايا ذبابة الفاكهة S2 تعلق على انتشار ساترة كونا المغلفة في جولة شقة "فطيرة" شكل (أرقام 1A و 1C). ومع ذلك، عندما الخلايا S2 مطلي coverslips على في وجود CytoD وسمح لنشر لمدة 2-3 ساعة، أنها تشكل عمليات طويلة رقيقة يشغلها الأنابيب الدقيقة موازية (الأرقام 1B و 1D). هذه الأنابيب الدقيقة لديها قطبية موحدة مع زائد ينتهي من 7. الوقت الفاصل بين التصوير مضان من ذبابة الفاكهة S2 التعبير عن ثابت ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

هنا نقدم بروتوكولات وإجراءات تفصيلية لدراسة نقل البضائع تعتمد على أنيبيب في الخلايا ذبابة الفاكهة S2 والثقافة الخلايا العصبية الأولية. كلتا العمليتين S2 وneurites التي هي هياكل يشغلها المجمعة الأنابيب الدقيقة المصفوفات التي تكون بمثابة مسارات للنقل عضية.

وعادة ما تستخدم استراتيجيتين لالعضيات التسمية: ترنسفكأيشن ناقلات ترميز بروتين فلوري مع تسلسل استهداف عضية أو تلطيخ مع الأصباغ الفلورية إضافتها مباشرة إل...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

يعلن الكتاب أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

شكر وتقدير

نشكر أعضاء المختبر غيلفاند الذين ساهموا في تطوير هذه البروتوكولات. وأيد البحوث التي أعلن عنها في هذا المنشور من قبل المعهد الوطني للعلوم الطبية العامة من المعاهد الوطنية للصحة تحت رقم الجائزة R01GM052111 لVIG والباسك وزارة التربية والتعليم الحكومة والجامعات والبحوث تحت رقم الجائزة BFI-2011-295 إلى الشركة المتحدة للتنمية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

مسحوق منتجات
قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
خلية الحشرات المتوسطة (شنايدر ق)سيجماS9895
حشرة &ndash ؛ إكسبرس متوسطفيشرBW12730Q
الأنسولينسيجماI6634
أبحاث البنسلينالدوليةP93000
منتجات أبحاث الستربتومايسينالدوليةS62000
التتراسيكلين هيدروكلوريدسيجماT7660-5G
مصل الأبقار الجنينيأتلانتا بيولوجيزS11150
Concanavalin ASigmaC2010
Cytochalasin DVWRIC15077105
LysoTracker Red DND-99المجسات الجزيئيةL7528
100 & micro ؛ م مصفاة خليةفيشر Scientific22363549
25 مم زجاج غطاء دائريVWR48380 080
ذبابة الفاكهة < م > قواريرVWR89092-730
مدقات بيليه يمكن التخلص منها مع أنابيب دقيقة مطابقةKimble Chase749520-0000

المراجع

  1. Schneider, I. Cell lines derived from late embryonic stages of Drosophila melanogaster. J. Embryol. Exp. Morphol. 27, 353-365 (1972).
  2. Rogers, S. L., Rogers, G. C. Culture of Drosophila S2 cells and their use for RNAi-mediated loss-of-function studies and immunofluorescence. 3, 606-611 (2008).
  3. Buster, D. W., Nye, J., Klebba, J. E., Rogers, G. C. Preparation of Drosophila S2 cells for light microscopy. J. Vis. Exp. (40), e1982(2010).
  4. Ling, S. C., Fahrner, P. S., Greenough, W. T., Gelfand, V. I. Transport of Drosophila fragile X mental retardation protein-containing ribonucleoprotein granules by kinesin-1 and cytoplasmic dynein. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 17428-17433 (2004).
  5. Kural, C., et al. Kinesin and dynein move a peroxisome in vivo: a tug-of-war or coordinated movement. Science. 308, 1469-1472 (2005).
  6. Kim, H., et al. Microtubule binding by dynactin is required for microtubule organization but not cargo transport. J. Cell. Biol. 176, 641-651 (2007).
  7. Ally, S., Larson, A. G., Barlan, K., Rice, S. E., Gelfand, V. I. Opposite-polarity motors activate one another to trigger cargo transport in live cells. J. Cell. Biol. 187, 1071-1082 (2009).
  8. Bensenor, L. B., Barlan, K., Rice, S. E., Fehon, R. G., Gelfand, V. I. Microtubule-mediated transport of the tumor-suppressor protein Merlin and its mutants. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 7311-7316 (2010).
  9. Jolly, A. L., et al. Kinesin-1 heavy chain mediates microtubule sliding to drive changes in cell shape. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 12151-12156 (2010).
  10. Barlan, K., Lu, W., Gelfand, V. I. The microtubule-binding protein ensconsin is an essential cofactor of Kinesin-1. Curr. Biol. 23, 317-322 (2013).
  11. Lu, W., Fox, P., Lakonishok, M., Davidson, M. W., Gelfand, V. I. Initial Neurite Outgrowth in Drosophila Neurons Is Driven by Kinesin-Powered Microtubule Sliding. Curr. Biol. 23, 1018-1023 (2013).
  12. Pathak, D., Sepp, K. J., Hollenbeck, P. J. Evidence that myosin activity opposes microtubule-based axonal transport of mitochondria. J. Neurosci. 30, 8984-8992 (2010).
  13. Clark, I. E., et al. Drosophila pink1 is required for mitochondrial function and interacts genetically with parkin. Nature. 441, 1162-1166 (2006).
  14. Gunawardena, S., et al. Disruption of axonal transport by loss of huntingtin or expression of pathogenic polyQ proteins in Drosophila. Neuron. 40, 25-40 (2003).
  15. Koo, E. H., et al. Precursor of amyloid protein in Alzheimer disease undergoes fast anterograde axonal transport. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 87, 1561-1565 (1990).
  16. Stokin, G. B., Goldstein, L. S. Axonal transport and Alzheimer's disease. Annu. Rev. Biochem. 75, 607-627 (2006).
  17. Bilsland, L. G., et al. Deficits in axonal transport precede ALS symptoms in vivo. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 20523-20528 (2010).
  18. Lloyd, T. E., et al. The p150(Glued) CAP-Gly domain regulates initiation of retrograde transport at synaptic termini. Neuron. 74, 344-360 (2012).
  19. Moughamian, A. J., Holzbaur, E. L. Dynactin is required for transport initiation from the distal axon. Neuron. 74, 331-343 (2012).
  20. Lorenzo, D. N., et al. Spectrin mutations that cause spinocerebellar ataxia type 5 impair axonal transport and induce neurodegeneration in Drosophila. J. Cell. Biol. 189, 143-158 (2010).
  21. Robinow, S., White, K. The locus elav of Drosophila melanogaster is expressed in neurons at all developmental stages. Dev. Biol. 126, 294-303 (1988).
  22. Pilling, A. D., Horiuchi, D., Lively, C. M., Saxton, W. M. Kinesin-1 and Dynein are the primary motors for fast transport of mitochondria in Drosophila motor axons. Mol. Biol. Cell. 17, 2057-2068 (2006).
  23. Furst, A., Mahowald, A. P. Differentiation of primary embryonic neuroblasts in purified neural cell cultures from Drosophila. Dev. Biol. 109, 184-192 (1985).
  24. Salvaterra, P. M., Bournias-Vardiabasis, N., Nair, T., Hou, G., Lieu, C. In vitro neuronal differentiation of Drosophila embryo cells. J. Neurosci. 7, 10-22 (1987).
  25. Wiemer, E. A., Wenzel, T., Deerinck, T. J., Ellisman, M. H., Subramani, S. Visualization of the peroxisomal compartment in living mammalian cells: dynamic behavior and association with microtubules. J. Cell. Biol. 136, 71-80 (1997).
  26. Rizzuto, R., et al. A gene specifying subunit VIII of human cytochrome c oxidase is localized to chromosome 11 and is expressed in both muscle and non-muscle tissues. J. Biol. Chem. 264, 10595-10600 (1989).
  27. Poot, M., et al. Analysis of mitochondrial morphology and function with novel fixable fluorescent stains. J. Histochem. Cytochem. 44, 1363-1372 (1996).
  28. Haller, T., Dietl, P., Deetjen, P., Volkl, H. The lysosomal compartment as intracellular calcium store in MDCK cells: a possible involvement in InsP3-mediated Ca2+ release. Cell Calcium. 19, 157-165 (1996).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

خلايا Drosophila S2محركات الأنيبيبات الدقيقةتفكك الأكتينالتصوير الحيالواصمات الفلوريةالتصوير بفاصل زمنيطلاء Con Aسايتوكلاسين D
النقل عضية في مثقف ذبابة الفاكهة الخلايا: S2 الخط الخليوي والخلايا العصبية الابتدائية.
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.