Злокачественные глиомы представляют собой неоднородную группу высокоинфильтративных глиальных неоплазм с различными клиническими и молекулярными особенностями. Первичные ортопедические ксенотрансплантологии подтипы гистопатологических и молекулярных новообразований в доклиниковых моделях животных.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Первичная ортопедическая Глиома Ксенотрансплантирует резюмировать инфильтративный рост и изоцитрат дегидрогеназы I Мутация
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Злокачественные глиомы представляют собой неоднородную группу высокоинфильтративных глиальных неоплазм с различными клиническими и молекулярными особенностями. Первичные ортопедические ксенотрансплантологии подтипы гистопатологических и молекулярных новообразований в доклиниковых моделях животных. Для моделирования ВОЗ III и IV классов злокачественных глиом в трансплантации анализы, человеческие опухолевые клетки ксенотрансплантированы в ортопедическое место, мозг, иммунокомпромиссных мышей. В отличие от вторичных ксенотрансплантатов, которые используют культурные опухолевые клетки, клетки глиомы человека отмежеваются от ресектированных образцов и пересажены без предварительного прохождения в культуре тканей для генерации первичных ксенотрансплантатов. Процедура в этом отчете детали подготовки образца опухоли, внутричерепной трансплантации в иммунокомпромиссных мышей, мониторинг для опухолевого прихлатения и опухоли сбора для последующего прохождения в реципиент животных или анализа. Препарат опухолевых клеток требует 2 часа, а хирургическая процедура требует 20 мин/животное.
Введение
Злокачественные глиомы являются первичными глиальными опухолями центральной нервной системы, которые возникают в головном мозге, а иногда и спинном мозге. Глиомы классифицируются Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ) в соответствии с гистологическим сходством с астроцитами, олигодендроцитами или эпендимальными клетками, а затем численно градуированы (от I до IV) на патологические особенности злокачественности. Наиболее распространенными гистологическими подтипами являются астроцитомы, олигодендроглиомы и смешанные олигоастроцитомы. Злокачественные глиомы, охватывающие II-IV классы ВОЗ, характеризуются инвазивным ростом и непокорностью современных методов лечени....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. Подготовка подвески опухолевых клеток
Примечание: Для установления и поддержания первичных ортотопических глиом ксенотрансплантатов необходимы соответствующие институциональные разрешения на использование материалов и животных пациентов. В медицинском центре Университета Вандербильта с согласия пациента собирается ресектирован опухолевый материал, превышающий тот, который необходим для диагностических целей. Specimens помечены рандомизированным 5-значным номером базы данных REDcap и все идентификаторы пациента удаляются. База данных REDcap содержит опоясывающие клинические данные по каждому экземпляру в репозитории тканей....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Диссоциированные клетки глиомы пересаживаются непосредственно в мозг ослабленных иммунитетом мышей для получения первичных ортопедических линий ксенотрансплантата. Каждому образцу опухоли присваивается рандомизированное число до трансплантации, как часть процесса деидентификации для удаления защищенной медицинской информации. Для этого мы используем 5-значный номер базы данных REDcap. Рисунок 1 иллюстрирует процесс и номенклатуру для создания линии ксенотрансплантата от глиобластомы (GBM 17182) с изоцитр.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Культурные клеточные линии, ксенотранспланты и генетически модифицированные мыши являются наиболее распространенными методами моделирования глиом, и существуют различные преимущества и ограничения для каждоймодели системы 3,13,14. Соответствующие преимущества первичной глиомы ксенотрансплантата включают инфильтративный рост, который символизирует диффузные глиомы и сохранение генетических изменений и важных сигнальных механизмов, которые могут быть чрезвычайно трудно поддерживать в культурных клетках глиомы. Н.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.
Благодарности
Мы особенно обязаны пациентам Медицинского центра Университета Вандербильта, которые предоставили бесценный исследовательский материал для Банка молекулярной нейрохирургической ткани. Мы благодарим тех, кто создал и поддерживает Tissue Bank, Reid C. Thompson MD (главный исследователь), Cherryl Kinnard RN (медсестра-исследователь) и Ларри А. Пирс MS (менеджер). Гистологические услуги были выполнены, в частности, Вандербильтского университета медицинский центр (VUMC) Переводная патология Общий ресурс (при поддержке награды 5P30 CA068485 в Вандербильт-Ингрэм онкологический центр). Эта работа была поддержана грантами MKC от NINDS (1R21NS070139), Фонда Burroughs Wellcome и....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Фосфатно-солевой буфер | Life Technologies | 14040-133 | |
| Система диссоциации папаина | Worthington Biochemical Corp. | ||
| Раствор трипанового синего 0,4% | Life Technologies | 15250061 | |
| кетамина гидрохлорида | Получен в институциональной аптеке или местной ветеринарной компании | ||
| Xylazine HCl | |||
| Кетопрофен | |||
| <>пофтальмологическая мазь | <> | ||
| Povidone-iodine | Fisher Scientific | 190061617 | |
| Cryopreservation media and spreading supplement | StemCell Technologies | 05751 | |
| 0,2% соли гепарина натрия в PBS | StemCell Technologies | 07980 | < p> |
| PPenicillin-streptomycin | Life Technologies | 15140-122 | |
| Dimethylsulfoxide | Sigma-Aldrich | D6250-5X10ML | |
| NOD. Cg-Prkdcscid I/2rgtm1Wjl/SzJ мыши | Лаборатория Джексона | 005557 | мыши NSG |
| Anti-human vimentin anti-human vimentin anti | Dako | M7020 < | p>Use от 1:200 до 1:800 |
| < p>Антитела к человеку IDH1 R132H | Dianova | DIA-H09 | Используйте от 1:100 до 1:400 |
| Centrifuge with swing bucket rotor | |||
| Pipetter с контролем скорости дозирования | |||
| Одноразовый гемоцитометр | Fisher Scientific | <с>22-600-100 | <> |
| <>Стерильные хирургические перчатки | Fisher Scientific | <>11-388128 | <> |
| <>Одноразовый халат | Fisher Scientific | <с>18-567 | <> |
| <>хирургическое маска | Fisher Scientific | <>п19-120-1256 | <> < |
| >туберкулиновый шприц | BD | <пп>305620 < | > |
| <>Спиртовые салфетки | Fisher Scientific | <>22-246-073 < | > |
| <> Портативные электронные весы | Фишер Scientific | 01-919-33 | |
| Zoom stereomicroscope | |||
| Surgical Clipper | Stoelting | 51465 < | p> |
| Рукоятка скальпеля | Fine Science Tools | 10003-12<> | /p <> |
| <>Лезвия скальпеля, #10 | <> | <> | |
| <>Стереотаксический инструмент<> | Скальпель | <пп>51730 < | > |
| <>Высокоскоростная дрель | Топтинг | <>51449 | <> |
| Сверло, 0,6 мм | Stoelting | 514552 | |
| шприц Hamilton | Hamilton | 80336 | |
| Autoclip, 9 мм | BD | 427630 | |
| Циркуляционная прокладка для нагрева воды | Kent Scientific | TP-700 TP-1215EA | <стр> |
| <стр>Сухой стерилизатор горячих шариков | Kent Scientific | <стр>INS300850 | <стр> |
| <стр>Хирургические ножницы | Инструменты для тонкой науки | <стр>14101-14 | <стр> |
| <стр> Тонкие ножницы | Инструменты для тонкой науки | <стр>14094-11 | < стр стр> |
| <стр>Пружинные ножницы | Fine Science Tools | 15018-10 | |
| щипцы Dumont | Fine Science Tools | 11251-30 | |
| Semimicro Spatulas | Fisher Scientific | 14374 | |
| Mouse brain slicer matrix | Zivic Instruments | BSMAS002-1 | |
| Cryogenic storage baulas | Fisher Scientific | 12-567-501 |
Ссылки
- Johnson, J. I., et al. Relationships between drug activity in NCI preclinical in vitro and in vivo models and early clinical trials. Br. J. 84, 1424-1431 (2001).
- Witt Hamer, D. e, C, P., et al.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
