يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

والقرنية Micropocket الفحص: نموذج من الأوعية الدموية في العين ماوس

16.8K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/51375

⸱

أغسطس 16, 2014

 ,  , 
1Vascular Biology Program, Boston Children's Hospital, 2Institute for Drug Research, School of Pharmacy, The Hebrew University of Jerusalem, 3Department of Ophthalmology, Harvard Medical School

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

يصف بروتوكول الفحص micropocket القرنية كما وضعت في الفئران.

الملخص

الماوس القرنية micropocket الفحص هو فحص قوي والكمي في الجسم الحي لتقييم الأوعية الدموية. باستخدام الكريات بطء الإفراج موحدة تحتوي على عوامل النمو المحددة التي تؤدي إلى نمو الأوعية الدموية في جميع أنحاء القرنية اوعائي بشكل طبيعي، الأوعية الدموية يمكن قياسها كميا و. في هذا الاختبار يتم إنشاء استجابة عائية على مدار عدة أيام، وهذا يتوقف على نوع وجرعة من عامل النمو المستخدمة. يتم تشغيل تحريض اتساع الأوعية الدموية عادة إما عاملا أساسيا نمو الخلايا الليفية (bFGF) أو عامل نمو بطانة الأوعية الدموية (VEGF). من خلال الجمع بين هذه العوامل النمو مع sucralfate وhydron (بولي HEMA (بولي (ميتاكريليت 2 هيدروكسي))) وصب الخليط في الكريات، ويمكن زرعها جراحيا في العين الماوس. هذه الكريات موحدة ببطء الافراج عن عوامل النمو أكثر من خمسة أو ستة أيام (bFGF أو VEGF على التوالي) مما يتيح استجابة عائية الكافية اللازمة لف منطقة السفينةuantification باستخدام المصباح الشقي. هذا الاختبار يمكن استخدامها لمختلف التطبيقات، بما في ذلك تقييم المخدرات المغير عائية أو العلاجات وكذلك المقارنة بين خلفيات وراثية مختلفة تؤثر على الأوعية الدموية. محقق المهرة بعد ممارسة هذا الاختبار يمكن زرع بيليه في أقل من 5 دقائق لكل عين.

المقدمة

عملية تكوين الأوعية الدموية، وتشكيل الأوعية الدموية الجديدة تشكل تلك الموجودة مسبقا، معقد للغاية وينظم من قبل العديد من العوامل الداخلية التي تتحكم في الخطوات المختلفة لتنتشر السفن والتشكل. يتم تشغيل الأوعية الدموية بسبب حدوث تحول في التوازن بين العوامل المؤيدة والمضادة للعائية، وهو التوازن الذي يحافظ عادة على الأوعية الدموية في حالة سكون. الأوعية الدموية في البالغين يحدث في بعض الظروف الفسيولوجية مثل أثناء دورة المبيض الأنثوية أو في عمليات إصلاح مثل التئام الجروح وتجديد الأنسجة. ومع ذلك، فإنه هو أيضا السمة المميزة للعديد من الأمراض بما في ذلك الأورام الخبيثة، وظروف المناعة الذاتية والأمراض الالتهابية. اشتراك الأوعية الدموية في هذه الظروف الفسيولوجية والمرضية يجعل من موضوع هام للبحث وهدفا جذابا للعلاج.

نظرا لتعقيد الأوعية الدموية وإشراك العديد مLLS والعوامل في هذه العملية، بما في ذلك الخلايا البطانية، pericytes، تعميم خلايا والخلايا اللحمية، في المختبر تظل نماذج محدودة ولا يمكن أن ألخص فريدة من نوعها المكروية في الجسم الحي. الرئيسية في فحوصات المختبر من الأوعية الدموية وتركز بشكل كبير على مراقبة الآثار المباشرة على الخلايا البطانية وقياس خطوات معينة في عملية عائية تحت ظروف خاضعة للرقابة. وتشمل هذه المقايسات الكمي من الخلايا البطانية انتشار 1، 2 الهجرة، وتشكيل شبكة 3، تشكيل أنبوب 4 و 5 تنبت من الكروية. خارج الحي النماذج، على عكس تلك الموجودة في المختبر، هي أكثر تعقيدا ودمج أنواع الخلايا الأنسجة المتعددة، على سبيل المثال الراهن حلقة الأبهر فحص 6. ومع ذلك، مثل أنظمة أخرى، فإنه لا يمكن التقاط مساهمة خلايا تعميم وسدى الطبيعي للخلايا البطانية كما موجود في الجسم الحي. محاولاتلدراسة الأوعية الدموية تحت تدفق لتقليد تتم باستخدام أنظمة ميكروفلويديك 7 الإعداد في الجسم الحي، ولكن حتى هذه المقايسات، وإن تحسنت كثيرا، لا تزال غير قادرة على حساب لجميع المقصورات الموجودة في الجسم الحي.

بسبب القيود المفروضة على في المختبر، وبحكم نماذج الأوعية الدموية الجسم الحي، في الجسم الحي نماذج تبقى الخيارات أكثر موثوقية للدراسات الأوعية الدموية. أمثلة على هذه النماذج تشمل غرس غرف شفافة، "ويندوز"، التي تسمح التصور من تزايد الأوعية الدموية تحت المجهر 8، يزرع تحت الجلد عن طريق الحقن مثل تشكيل matrigel والسفينة في الأنسجة الطبيعية مثل الماوس الأذن وغشاء مشيمائي الدجاج (CAM ). ومع ذلك، واحد من النماذج الأكثر قبولا الأوعية الدموية والكمية في الجسم الحي هو فحص القرنية micropocket اتساع الأوعية الدموية وصفها هنا، التي تستغل بشكل طبيعي اوعائيالقرنية بمثابة "شاشة" لتصور وتقييم النمو عائية جديد 9.

نحن هنا وصف micropocket فحص القرنية وتطويرها في الفئران. في البداية تم استخدام نموذج لقياس المحفزات عائية غير محددة في القرنيات أرنب. وقد تم ذلك عن طريق إدخال قطع الورم في الخلط المائي في الغرفة الأمامية للعين الأرنب ويقاس اتساع الأوعية الدموية التي يسببها الورم 11.

ومع ذلك، فقد تطورت الفحص في وقت لاحق لدراسة آثار النمو محدد 10 العوامل لتحديد وتوحيد تأثير عائية أفضل. من أجل الافراج عن عامل النمو في العين، استخدمت الكريات بطء الإفراج تحتوي على كميات معروفة من عوامل النمو عائية بدلا من الأنسجة. توفر تنقية البروتينات المؤتلف عائية مثل bFGF أو VEGF تمكين استخدامها كأهداف محددة من modulaters الأوعية الدموية 12. في البداية، كان الفحصتستخدم إلى حد كبير في الأرانب، والتي هي أسهل للعمل مع نظرا لحجمها ولكن في وقت لاحق وقد ترجم هذا النموذج في الفئران. نموذج حيواني أصغر حجما وأقل تكلفة. التحول من أرنب على الفئران تقدم ميزة هامة لتكون قادرة على استخدام الحيوانات التلاعب وراثيا، مما يخلق مجالا جديدا للبحث في المكونات الوراثية التي تؤثر على الأوعية الدموية 13. بالإضافة إلى استخدام أكثر قبولا من القرنية الفحص في دراسة الأوعية الدموية، ويمكن أيضا عمليات بيولوجية أخرى يجري التحقيق باستخدام فحوصات تعديل. على سبيل المثال، قدمت دراسات lymphangiogenesis ممكن من خلال غرس انخفاض الكريات جرعة bFGF الذي يسمح التصور من الأوعية اللمفاوية من خلال الواسمات الجزيئية محددة 14. وبالإضافة إلى ذلك، قدمت هذا الاختبار وسيلة لتقييم آثار الإشعاع على الأوعية الدموية 15.

في الجمع، والقرنية micropocket فحص الأوعية الدموية هو كمي، مندوبroducible، وتقييم مرونة الأوعية الدموية في الجسم الحي. والميزة الرئيسية لهذا الاختبار هي أن قياس السفن الخلفية غير ضروري لأن الأوعية تنمو في الأنسجة اوعائي بشكل طبيعي. نحن هنا وصف بروتوكول من هذا الاختبار في التفاصيل ومناقشة السيناريوهات المختلفة التي يمكن أن تحدث. يتكون الاختبار من 3 قطاعات منفصلة. هنا فإننا سوف تصف إعداد عامل نمو شامل الكريات، وغرس الجراحية لاحقا، وأخيرا الطريقة المستخدمة لقياس النمو التوعية المستحدثة الناتجة عن ذلك.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

وتعرض جميع البروتوكولات التي تنطوي على الحيوانات إلى وأقرته اللجنة رعاية واستخدام الحيوان المؤسسي في مستشفى بوسطن للأطفال وتتم وفقا لتوصيات الاتحاد للتقويم والاعتماد من رعاية الحيوان المعملية (AAALAC). تأكد من استخدام أدوات معقمة وtechniqure العقيم أثناء تنفيذ الإجراء.

1. إعداد الكريات

  1. تزن من 10 ملغ من sucralfate و 60 ملغ من hydron مع ملعقة unbent معقمة. وضع في أنابيب microcentrifuge منفصلة.
  2. وضع قطعة 1 سم مربع من شبكة إلى العقيمة 10 سم الطبق. عكس ذلك شبكة ترتكز على غطاء الضحلة. توضع جانبا.
  3. إضافة 500 ميكرولتر من الإيثانول إلى hydron ودوامة لمدة 10 دقيقة على الأقل.
  4. إضافة كمية مناسبة من عامل النمو (القياسية: 20 ميكروغرام للbFGF، 50 ميكروغرام للVEGF) إلى sucralfate ودوامة لفترة وجيزة. عامل النمو تخزينها في-80 ° C الفريزر بتركيز 1 ملغ / مل. يجب أن حجم السائل أضاف أن ما لا يقل عن 20 ميكرولتر لضمان sucralfate هو مبلل تماما ولكن يجب أن لا تتجاوز 50 ميكرولتر. أكبر حجم يجعل تبخر السائل في الخطوة التالية صعوبة.
  5. ضع الخليط sucralfate في المبخر الطرد المركزي تعيين على الأقل حتى يصبح الخليط الجاف تماما، وعادة 30-50 دقيقة اعتمادا على حجم السائل المستخدم.
    1. تحقق الخليط لمدة الرطوبة المتبقية مع نهاية مدبب من ملعقة معقمة. الخليط يجب أن يشعر "مقدد".
  6. استخدام نهاية مدبب من ملعقة لتفريق خليط sucralfate داخل الأنبوب.
  7. إضافة 10 ميكرولتر من hydron إلى sucralfate.
    1. نظرا لطبيعة لزجة من hydron، وقطع من نهاية الماصة غيض 200 ميكرولتر ومن ثم رسم والافراج عن 10 ميكرولتر قبل pipetting صعودا مرة أخرى وإضافة إلى sucralfate.
  8. استخدام بسرعة خلاف عازمةالعلا لخلط hydron وsucralfate وإزالتها من الأنبوب.
    1. جمع الخليط على طول الجانب السفلي من غيض من ملعقة عازمة ثم تدوير أنبوب أثناء الرسم ملعقة على طول جدار الأنبوب. سوف الخليط يجف بسرعة لذلك يجب أن يتم ذلك خطوة بكفاءة.
  9. نشر الخليط على شبكة مستعدة باستخدام ملقط ليثبت في مكانه. يجب أن يكون الخليط حتى طبقة وملء في الثقوب للشبكة.
  10. تزج ملعقة عازمة في أنبوب يحتوي على hydron واستخدامه معطف كلا الجانبين للشبكة.
  11. وضع شبكة المغلفة متوكئا على الجانب ضد حافة الطبق والسماح للتجفيف في RT لمدة 30-45 دقيقة.
  12. وضع شبكة في الثلاجة -20 درجة مئوية أو الشروع فورا في الخطوة التالية. إبقاء شبكة داخل الطبق.
  13. وضع 35 مم طبق داخل طبق بتري أكبر، الغطاء. استخدام زوج من ملقط لسحب بعناية الألياف للشبكة بغض النظر على مدى 35 مم طبق. الكريات الضالة جويتم جمعها من الطبق أكبر في نهاية المطاف.
    1. تحقق الكريات عن التوحيد تحت النطاق. عملية ينتج حوالي 250 الكريات بالتالي الجرعة القياسية في بيليه لbFGF وVEGF هو 80 نانوغرام و 200 نانوغرام، على التوالي.
  14. متجر الكريات في 35 مم طبق في الثلاجة -20 درجة مئوية لمدة تصل إلى 3 أشهر.

2. زرع الجراحي من الكريات

  1. انشاء منطقة الجراحية تحت المجهر التشغيل.
  2. تخدير الفأر مع AVERTIN (400-500 مغ / كغ، داخل الصفاق) ووضع مؤشر الماوس تحت المجهر حتى العين مرئيا. أداء قرصة أخمص قدميه لضمان مستوى كاف من التخدير.
  3. تخدير العين الماوس عن طريق وضع 1 قطرة من حل بروباراكايين فوق مقلة العين. انتظر 20-30 ثانية وربت مع الشاش.
  4. Proptose العين الفأر مع # 1 مبلد المجوهرات ملقط يجري المؤكد أن ترك الجلد بين ملقط والعين. من المهم أن نحكم على الضغوط التي مورست بشكل صحيح.60. وعقد العين بقوة أيضا يؤدي إلى أن تصبح حمراء وغضب، بينما تفقد أيضا على عقد سيسمح للتحرك العين أثناء الجراحة.
  5. استخدام microknife 30 درجة إلى إجراء شق في القرنية حوالي 1 ملم من حوف. يجب أن يكون الشق 1-2 ملم في الطول. يجب أن تكون شق عميق بما يكفي لاختراق ما وراء الطبقة الظهارية في midstroma لكن ليس عميق جدا للتمزق العين.
  6. استخدام سكين فون Graef لجعل جيب عمودي على شق.
    1. حرك السكين تحت طبقة القرنية في موقع شق والعمل بلطف سكين في وتحريكه على طول شق لتوسيع الفضاء، وبالتالي تشكيل الجيب. فإنه يساعد على تحريك الماوس وكذلك لتكون قادرة على العمل مع انحناء العين. يجب الحرص على عدم دفع نحو الانخفاض مع طرف لتجنب تمزق العين.
  7. الرطب ملقط صائغ رقم ​​5 مع بروباراكايين واختيار بيليه للخروج من الطبق. وضع بيليه على العين.
  8. ترطيب سكين فون Graef مع بروباراكايين ونقل بعض من السائل على بيليه لجعله مطاطي ولين العريكة. إزالة الرطوبة الزائدة مع الشاش أو القطن المسحة.
  9. إدراج بيليه في الجيب باستخدام سكين فون Graef لدفعها داخل تحت طبقة القرنية. مرة واحدة بيليه كله في الداخل، تشغيل الجانب المسطح من سكين فون Graef على الموقع للتأكد من أن بيليه هو آمن.
  10. معطف العين مع مرهم مضاد حيوي الثلاثي.
  11. تحويل الماوس مرارا وتكرار لعملية جراحية في العين المعاكس.

3. الكمي من القرنية اتساع الأوعية الدموية.

ترك الحيوانات لتطوير السفن على مدى فترة محددة من الوقت. اليوم سفينة الدرجات يعتمد على عامل النمو المستخدمة. الصف bFGF في يوم 5 وVEGF الأضعف في يوم 6. يوم هو يوم غرس 0.

  1. تخدير الفأر مع AVERTIN (400-500 مغ / كغ، داخل الصفاق).
  2. استخدام مجهر المصباح الشقي لجرادينغ. بصري واحد لديه شبيكة الشعر، وخطوط داخل العدسة المستخدمة كوسيلة مساعدة لتحديد قياس طول السفينة والمسافة حول محيط العين أن السفن قد ظهرت.
    1. عقد الماوس أمام نطاقها، وتحديد المواقع الماوس بحيث ينظر إلى العين في العين مع بيليه مباشرة إلى الأمام. استقرار الرأس بين الإبهام والسبابة بحيث يتم تشديد الجلد على الوجه وproptosed العين قليلا.
  3. ضع ذ محور للشبيكة الشعر على طول سفينة الحوفي مباشرة تحت بيليه. قياس طول الأوعية المتفرعة في اتجاه تصاعدي الكريات. يسجل هذا القياس في أعشار من ملليمتر وتعيين طول السفينة (VL) (الشكل 1A).
  4. تحويل الماوس أو شبيكة الشعر بحيث تكون المسافة حول العين أن هذه السفن قد ظهرت تصبح واضحة. فمن الأسهل أن نفكر في العين والوجه على مدار الساعة مع فترات من 1 إلى 12. المعين هذه الساعة ساعة عدد (CH) (الشكل 1B). يمكن أن يكون رقما صحيحا أو كسور 0.25 (على سبيل المثال، 2، 2.25، 2.5 أو 2.75). ملاحظة: CH هو ذاتي. على سبيل المثال، البعض قد قياس المسافة حول العين لتشمل جميع السفن ظهرت من حوف حين أن البعض الآخر قد يتوقف قياس عند نقطة حيث طول السفينة هو نصف القصوى. العامل المهم هو أن تكون متسقة مع واحد كيف يختار الصف.

figure-protocol-1
الرقم 1. الكمي لاتساع الأوعية الدموية القرنية. (A) 80 نانوغرام bFGF بيليه مزروع في C57BL / 6J الماوس يظهر المصباح الشقي شبيكة الشعر موجهة لقياس طول السفينة. VL = 0.9 مم. (B) نفس الاداء العين المصباح الشقي شبيكة الشعر استدارة لقياس ساعة على مدار الساعة. CH = 3.25. حساب مساحة سفينة = 1.84 مم 2. هذه الصور تم تعزيز رقميا للسماح لإضافة التخطيطي شبيكة الشعر. انقر هنا لمشاهدة صورة أكبر.

  1. حساب مساحة سفينة (VA) باستخدام الصيغة أدناه، والتي تقوم على مساحة بيضاوي (ملاحظة، فإنه من المفيد أن تضع ذلك في الاعتبار عند الدرجات.) اكسبريس VA في ملليمتر مربع. الصيغة هي كما يلي:
    سفينة طول × مدار الساعة ساعة X 0.2 = π منطقة السفينة

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

وتظهر نتائج نموذجية لbFGF وVEGF في الكريات العادية منخفضة عائية C57BL / 6J الفئران في الشكل 2A و B على التوالي. يبين الشكل 2E التوزيع الطبيعي من منطقة السفينة (VA) في C57BL / سلالة 6J بجرعات متفاوتة من هذه نمو العوامل. 80 الكريات bFGF نانوغرام يؤدي عادة في VA حوالي 2.0 ملم 2، على الرغم من القيم في مجموعة من 1.8-2.4 ملم 2 مقبولة. تسبب 200 نانوغرام الكريات VEGF عادة استجابة من حوالي 0.7 ملم 2، مع مجم...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

هناك العديد من الخطوات الهامة في إجراء فحص القرنية ناجحة. أول من صنع كريات موحدة قادرة على أن تزرع وتحفيز الأوعية. أهم أجزاء من إعداد بيليه هي 1) باستخدام عامل النمو خالية من الناقل. 2) ضمان وجود مزيج جيد من عامل النمو مع sucralfate وhydron و3) تحريك الخليط النهائي بسرعة ولكن بعناية من أنبوب إيبندورف للشبكة حيث يلقي الكريات. يوصى ببذل الكريات "زائف" من دون عامل النمو لممارسة هذه التقنية. يجب أن تظهر الكريات البيضاء وطباشيري ويكون مربع تقريبا في الشكل. ينبغي استبعاد أي ال...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

شكر وتقدير

نشكر كريستين جونسون لعمل الرسوم البيانية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
القسم 1: تحضير
SucralfateSigma#S0652
Hydron (المعروف أيضا باسم Poly (2-Hema))Sigma#P3932-10G
EthanolPharmco Products Inc#111000200CSGL
عوامل النمو:يجب أن تكون خالية من الناقل (بدون ألبومين مصل بقري (BSA))
  ؛ عامل نمو الخلايا الليفية (FGF)PeproTech#AF-100-18B
عامل نمو بطانة الأوعية الدموية (VEGF)أنظمة R D# 293-VE-050 / CF
35 مم طبقBecton-Dickson# 353001يستخدم لتخزين الكريات
طبق بتري 10 سمVWR# 25384-342يستخدم كسطح عمل لتحضير الكريات
شبكةسفر أمريكا# 03--300/51300 um nitex النايلون, مقطعة إلى قطع مربعة سم ومعقمة في الأوتوكلاف
ملاعقفيشر العلمية#21-401-10استخدم نهاية مدببة لواحد لتفتيت خليط الحبيبات. ثني نهاية مدببة من أخرى للمساعدة في إزالة الخليط من أنبوب الطرد المركزي الدقيق.
أنابيب الطرد المركزي الدقيقةفيشر العلمية# 05-408-146واحد للهيدرون ، واحد
لملقط المجوهرات ، # 5Ambler Surgical#2315Eتحتاج إلى 2 لسحب شبكة
مبخر الطرد المركزيThermoSavantDNA110 SpeedVac
القسم 2: الزرع الجراحي للكريات
مجهر التشغيلZeiss
2.5٪ Avertinمخدر عام
Proparacaine hydrochloride محلول العيون 0.5٪FalconNDC # 6131401601مخدر للعين
مضاد حيوي ثلاثي مرهم العيونBausch LombNDC # 2420878055يحتوي على النيومايسين والبولي ميكسين والباسيتراسين
ميكروسكين للعيون ، 5 ممSurgistar# 924501زاوية 30 درجة
سكين فون جريفAmbler الجراحي#3401E
ملقط المجوهرات ، # 1Ambler الجراحي#2301Eيجب أن تكون مخففة بحجر شحذ لتركيب
ملقط المجوهرات ، # 5Ambler Surgical#2305Eلالتقاط الكريات ووضعها على العين
مقص منحني صغيرAmbler جراحي#5636Eلتقليم الشعيرات
شاشلنشاف العين بعد البروباراكايين
القسم 3: تصنيف القرنية العصبية
2.5٪ أفيرتينالتخدير
العام مصباح شقنيكونFS-2يحتاج إلى عين مع شبكية للمساعدة في القياس
الحبيباتالعصبية

المراجع

  1. Gospodarowicz, D., Moran, J., Braun, D., Birdwell, C. Clonal growth of bovine vascular endothelial cells: fibroblast growth factor as a survival agent. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 73, 4120-4124 (1976).
  2. Glaser, B. M., D'Amore, P. A., Seppa, H., Seppa, S., Schiffmann, E. Adult tissues contain chemoattractants for vascular endothelial cells. Nature. 288, 483-484 (1980).
  3. Kubota, Y., Kleinman, H. K., Martin, G. R., Lawley, T. J. Role of laminin and basement membrane in the morphological differentiation of human endothelial cells into capillary-like structures. J. Cell Biol. 107, 1589-1598 (1988).
  4. Montesano, R., Orci, L. Tumor-promoting phorbol esters induce angiogenesis in vitro. Cell. 42, 469-477 (1985).
  5. Korff, T., Augustin, H. G. Integration of endothelial cells in multicellular spheroids prevents apoptosis and induces differentiation. J. Cell Biol. 143, 1341-1352 (1998).
  6. Nicosia, R. F., Tchao, R., Leighton, J. Histotypic angiogenesis in vitro: light microscopic, ultrastructural, and radioautographic studies. In Vitro. 18, 538-549 (1982).
  7. Wong, K. H., Chan, J. M., Kamm, R. D., Tien, J. Microfluidic models of vascular functions. Annu Rev Biomed Eng. 14, 205-230 (2012).
  8. Sandison, J. C. A new method for the microscopic study of living growing tissues by the introduction of a transparent chamber in the rabbit's ear. Anat. Rec. 28, 281-287 (1924).
  9. Jain, R. K., Schlenger, K., Hockel, M., Yuan, F. Quantitative angiogenesis assays: progress and problems. Nat. Med. 3, 1203-1208 (1997).
  10. Rogers, M. S., Birsner, A. E., D'Amato, R. J. The mouse cornea micropocket angiogenesis assay. Nat. Protoc. 2 (10), 2545-2550 (2007).
  11. Gimbrone, M. A., Leapman, S. B., Cotran, R. S., Folkman, J. Tumor dormancy in vivo by prevention of neovascularization. J. Exp. Med. 136, 261-276 (1972).
  12. Gimbrone, M. A., Cotran, R. S., Leapman, S. B., Folkman, J. Tumor growth and neovascularization: an experimental model using the rabbit cornea. J. Natl. Cancer Inst. 52, 413-427 (1974).
  13. Rohan, R. M., Fernandez, A., Udagawa, T., Yuan, J., D'Amato, R. J. Genetic heterogeneity of angiogenesis in mice. FASEB J. 14 (7), 871-876 (2000).
  14. Chang, L. K., et al. Dose-dependent response of FGF-2 for lymphangiogenesis. Proc Natl Acad Sci U S A. 101 (32), 11658-11663 (2004).
  15. Udagawa, T., Birsner, A. E., Wood, M., D'Amato, R. J. Chronic suppression of angiogenesis following radiation exposure is independent of hematopoietic reconstitution. Cancer Res. 67 (5), 2040-2045 (2007).
  16. Turner, P. V., Albassam, M. A. Susceptibility of rats to corneal lesions after injectable anesthesia. Med Comp. 55 (2), 175-182 (2005).
  17. Calderone, L., Grimes, P., Shalev, M. Acute reversible cataract induced by xylazine and by ketamine-xylazine anesthesia in rats and mice. Exp. Eye Res. 42, 331-337 (1986).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

تكون الأوعية الدموية في عين الفأركبيبات عامل النمومجهر المصباح الشقيقياس مساحة الأوعية الدمويةالتوعي الحديث للقرنيةتقنية الزرع الجراحيعامل النمو الأساسي FGF وعامل نمو البطانة الوعائية VEGFطريقة تحضير الكبيباتنموذج تكوين الأوعية الدموية في الجسم الحي
والقرنية Micropocket الفحص: نموذج من الأوعية الدموية في العين ماوس
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.