Einfache Assay zur Quantifizierung von Sozialvermeidung in Drosophila melanogaster

Zusammenfassung

Hier präsentieren wir ein Protokoll zur Quantifizierung der Vermeidung von gestressten Personen. Dieses Paradigma ist leistungsfähig und dennoch benutzerfreundlich und kann verwendet werden, um den Einfluss von Genen und Umwelt auf eine Art von sozialer Interaktion bei Drosophila melanogaster zu bewerten.

Zusammenfassung

Drosophila melanogaster ist ein aufstrebendes Modell zur Untersuchung verschiedener Aspekte sozialer Interaktionen. Zum Beispiel meiden Fliegen Bereiche, die zuvor von gestressten Artgenossen besetzt waren, da ein Geruchsstoff bei Stress freigesetzt wird, der als Drosophila-Stressodorant (dSO) bekannt ist. Durch die Verwendung des T-Maze-Geräts kann man die Vermeidung des dSO durch Responder-Fliegen in einem sehr erschwinglichen und robusten Assay quantifizieren. Hier werden die Bedingungen dargestellt, die notwendig sind, um eine starke Leistung zu erzielen. Eine stressige Erfahrung ist notwendig, damit die Fliegen dSO ausstoßen, sowie genügend Emitterfliegen, um eine robuste Vermeidungsreaktion auf das Vorhandensein von dSO zu bewirken. Der genetische Hintergrund, aber nicht die Gruppengröße, veränderte die Vermeidung des dSO durch die Responder-Fliegen stark. Canton-S und Elwood zeigen eine höhere Leistung bei der Vermeidung des dSO als die Stämme aus Oregon und Samarkand. Dieser Verhaltensassay wird es ermöglichen, die Mechanismen zu identifizieren, die diesem Sozialverhalten zugrunde liegen, und den Einfluss von Genen und Umweltbedingungen auf die Emission und Vermeidung von dSO zu bewerten. Ein solcher Assay kann in Batterien einfacher diagnostischer Tests aufgenommen werden, die zur Identifizierung sozialer Mängel von Mutanten oder Umweltbedingungen von Interesse verwendet werden.

Einleitung

Das Ziel dieser Methode ist es, einfach zu quantifizieren einen neuen Aspekt des einfachen Sozialverhalten in Drosophila melanogaster, von Balz und Aggression unabhängig.

Soziale Interaktionen sind entscheidend für die richtige Entwicklung und Gesundheit von Personen innerhalb der Gesellschaft, sowie die Funktionalität einer sozialen Gruppe als Ganzes. Die hohe Komplexität dieser Wechselwirkungen erfordert große Probengrößen und ein System zur Vereinfachung des Verhaltens ermöglicht, da die genetischen und neuronalen Basen des Sozialverhaltens sind noch weitgehend unverstanden. Drosophila melanogaster ist eine leistungsf....

Protokoll

1. Geräte und Reagenzien Erstellt Inhouse (Siehe Liste der Materialien für andere)

1. Bereiten Sie eine Drosophila kalten Narkosegerät zu fly Arbeit zu verrichten.
   1. Schneiden Sie einen porösen Polyethylenfolie, eine kleine Plastikdose (12,7 cm lang, 10,2 cm breit), in der Regel die obere Abdeckung des Pipettenspitzen-Box (12,7 cm lang, 10,2 cm breit, 3,8 cm tief) zu decken.
   2. Füllen Sie das Feld mit Crushed Ice, decken mit der porösen Polyethylenfolie.
2. Bereiten Sie einen T-Labyrinth Apparate; Anpassung der zuvor im Detail ^28-31 beschriebenen Vorrichtung.
3. Bereiten Sie eine Fliege Aspirator wie beschriebe....

Ergebnisse

Die soziale Vermeidung Assay ist eine robuste Test Quantifizierung der Fähigkeit von Drosophila melanogaster, um eine Belastungssignal zu erkennen (DSO) von anderen Fliegen emittiert und damit die Beurteilung ein Aspekt der sozialen Interaktionen. Der Test wird durchgeführt unter Verwendung einer Vorrichtung üblicherweise in verschiedenen Verhaltenstests, wie einem T-Labyrinth, das die Fliegen mit einer Wahl zwischen zwei verschiedenen Optionen zu präsentieren bekannt verwendet - links oder rechts ^{19,28-31.......}

Diskussion

Dieses Protokoll beschreibt ein detailliertes Verfahren für die soziale Vermeidungstest. Canton-S nur ein Fläschchen zu vermeiden, in denen fliegt zuvor mechanisch belastet gewesen, und dass das Geschlecht und Anzahl der Responder hat keinen Einfluss auf die soziale Vermeidung Leistung. Allerdings hat der genetische Hintergrund der Responder einen großen Einfluss.

Im Folgenden sind einige wichtige Schritte zur Durchführung dieses Experiment erfolgreich: 1) immer vor dem Experiment über die F.......

Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien

Name	Unternehmen	Katalognummer	Kommentare
Stereo-Zoom-Mikroskop	Nikon	SMZ-645	Jedes andere Standard-Zielfernrohr für die Handhabung von Fliegen würde funktionieren
Kleine Pinsel			zum Schieben von Fliegen
Poröses Polyethylen, 12" x 12" Sheet Flystuff	- Genesee	46-100	http://www.flystuff.com/ProductInfo.php?productID=46-100 Poröse Kunststofffolie für die Kälteanästhesiebox
Mini-Wecker/Stoppuhr
Sharpie Stifte
Klebeband
Mini Vortex	Fisher	14-955-151	http://www.fishersci.com/ecomm/servlet/itemdetail Für mechanisches Bewegen der Fliegen - jeder Wirbel würde funktionieren.
Corning Life Sciences DL Nr.:352017, Falcon Reagenzglas; runder Boden; Einweg; ohne Verschluss, 14 ml; 17 x 100 mm	Fisher	14-959-8	http://www.fishersci.com/ecomm/servlet/itemdetail?storeId=10652&langId=-1&catalogId=29104&productId=2771811&distype=0&highlightProductsItemsFlag=Y&fromSearch=1&searchType=PROD&hasPromo=0 Diese rasten in dem hauseigenen T-Labyrinth ein und die Gegenstromapparatur (siehe Text)
Wattebällchen			um die Fläschchen nach dem Experiment zu verschließen.
Dreifach gefaltetes Brett und weiße Bankabdeckung			, um einen weißen Hintergrund und ein homogenes Licht zu schaffen.
Weiße Bankabdeckung
Pounding Pad			Jedes Mauspad funktioniert.
Großes schwarzes Tuch			zum Abdecken des Gegenstromapparates bei Phototaxis-Reaktion.
kaltweißes Licht	Home Depot	1000516563	http://www.homedepot.ca/product/illume-26-fluorescent-plug-in-linear/911423 jede ähnliche lineare Leuchte mit Leuchtstofflampe kaltweiß bei 13-15 W würde funktionieren

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