العزلة والكمية Immunocytochemical توصيف الخلايا عضلي الابتدائية والخلايا الليفية من العضلات الهيكلية البشرية

Chibeza C. Agley; Anthea M. Rowlerson; Cristiana P. Velloso; Norman L. Lazarus; Stephen D. R. Harridge

doi:10.3791/52049

يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

العزلة والكمية Immunocytochemical توصيف الخلايا عضلي الابتدائية والخلايا الليفية من العضلات الهيكلية البشرية

16K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/52049

⸱

يناير 12, 2015

Chibeza C. Agley¹^,² , Anthea M. Rowlerson¹ , Cristiana P. Velloso¹ , Norman L. Lazarus¹ , Stephen D. R. Harridge¹

¹Centre of Human and Aerospace Physiological Sciences, King's College London, ²Wellcome Trust-Medical Research Council, Cambridge Stem Cell Institute

في هذه المقالة

ملخص

< p class = 'jove_content'> أنواع الخلايا الملتصقة الرئيسية المشتقة من العضلات البشرية هي الخلايا العضلية والخلايا الليفية. هنا ، يتم إثراء مجموعات الخلايا باستخدام فرز الخلايا المنشطة مغناطيسيا بناء على مستضد CD56. يسمح وضع العلامات المناعية اللاحقة بأجسام مضادة محددة واستخدام تقنيات تحليل الصور بالقياس الكمي للخصائص السيتوبلازمية والنووية في الخلايا الفردية.

الملخص

إصلاح وتجديد العضلات والهيكل العظمي يتطلب العمل من الخلايا الأقمار الصناعية، والتي هي الخلايا الجذعية العضلية المقيمين. هذه يمكن أن تكون معزولة من عينات خزعة العضلات الإنسان باستخدام الهضم الأنزيمي وممتلكاتهم المنشأ العضلي درس في الثقافة. كميا، وهما أنواع الخلايا الملتصقة الرئيسية التي تم الحصول عليها من عملية الهضم الأنزيمي هي: (أ) الخلايا الأقمار الصناعية (وهو ما يسمى خلايا المنشأ العضلي أو خلايا السلائف العضلات)، التي تم تحديدها في البداية كما CD56 ⁺ CD56 وفيما بعد ⁺ / ⁺ desmin خلايا و (ثانيا) muscle- الليفية المشتقة ويدعى CD56 ^- وTE-7 ^+. الليفية تتكاثر بشكل فعال جدا في الثقافة والسكان الخلية المختلطة هذه الخلايا قد تجاوز خلايا المنشأ العضلي للهيمنة على الثقافة. عزل وتنقية من أنواع مختلفة من الخلايا من العضلات الإنسان تشكل بالتالي اعتبار المنهجي المهم عند محاولة للتحقيق في السلوك الفطري إما نوع من الخلايا في الثقافة. نحن هنا أن descrالمكتب الدولي للتربية نظام الفرز على أساس الهضم الأنزيمي لطيف من الخلايا باستخدام كولاجيناز وdispase تليها المغناطيسية خلية تنشيط الفرز (MACS) الذي يعطي كل من نقاء عالية (> خلايا المنشأ العضلي 95٪) والعائد الجيد (~ 2.8 × 10 ⁶ ± 8.87 ⁵ × 10 خلية / ز الأنسجة بعد 7 أيام في المختبر) للتجارب في الثقافة. ويستند هذا النهج على احتضان مختلطة السكان خلية مأخوذة من العضلات مع ميكروبيدات المغناطيسية الخرز مترافق إلى الأجسام المضادة ضد CD56 ومن ثم تمرير الخلايا على الرغم من مجال مغناطيسي. يتم الاحتفاظ CD56 ⁺ الخلايا بد أن ميكروبيدات حسب الحقل في حين CD56 ^- خلايا تمر دون عوائق من خلال العمود. تعليق خلية من أي مرحلة من مراحل عملية الفرز يمكن مطلي ومثقف. وبعد تدخل معين، مورفولوجيا الخلايا، والتعبير وتوطين البروتينات بما في ذلك عوامل النسخ النووية يمكن قياسها كميا باستخدام الوسم مناعي مع الاجسام المضادة المحددة وصورة عو rocessing وحزمة التحليل.

المقدمة

إصلاح وتجديد العضلات والهيكل العظمي يتطلب العمل من الخلايا الأقمار الصناعية ^1، والخلايا الجذعية المنشأ العضلي ^2،3. في الجسم الحي وتوجد هذه الخلايا في حالة هادئة عكسية تقع بين غمد الليف العضلي والصفيحة القاعدية من كل myofibre، ولكن تصبح تنشيط لتتكاثر، تلف الصمامات وتفرق كما الأنسجة العضلية، وإصلاح وإعادة إنشاء ^3. الخلايا الأقمار الصناعية يمكن أن تكون معزولة من الشباب والمسنين عضلات الإنسان عينات الخزعة باستخدام الهضم الأنزيمي ⁴ وممتلكاتهم المنشأ العضلي يمكن بعد ذلك أن تدرس في الثقافة الابتدائية ^5. كفاءة هذه العملية بمعزل فيما يتعلق بكل من المحصول ونقاء السكان الخلية....