الخلايا الآكلة هي الخلايا الرئيسية resorbing العظام في الجسم. وقد أدت القدرة على عزل الخلايا الآكلة بأعداد كبيرة في تحقيق تقدم جوهري في فهم علم الأحياء ناقضة العظم. في هذا البروتوكول، ونحن تصف طريقة لعزل وزراعة وقياس النشاط ناقضة العظم في المختبر.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
ناقضة العظم اشتقاق من الفأر نخاع العظم
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الخلايا الآكلة هي الخلايا المتخصصة جدا التي هي مستمدة من النسب الوحيدات / بلعم من نخاع العظام. قدرة فريدة ليرتشف كل من المصفوفات العضوية وغير العضوية من العظام يعني أنها تلعب دورا رئيسيا في تنظيم إعادة الهيكل العظمي. معا، وبانيات الآكلة هي المسؤولة عن عملية الربط الديناميكية التي تنطوي على حد سواء ارتشاف العظام وتكوين العظام تعمل معا للحفاظ على الهيكل العظمي العادي أثناء الصحة والمرض.
كما أن خلايا العظام resorbing الرئيسية في الجسم، ويمكن التغيرات في التفريق ناقضة العظم أو وظيفة يؤدي إلى آثار عميقة في الجسم. الأمراض المرتبطة ظيفة ناقضة العظم المتغيرة يمكن أن تتراوح في شدتها من أمراض حديثي الولادة قاتلة بسبب الفشل في تشكيل الفضاء لنخاع الدم، لاحظ أكثر شيوعا الأمراض مثل هشاشة العظام، والتي المفرط ارتشاف العظم ناقضة العظم يهيئ لكسر تشكيل. وقد سمح الأنف والحنجرة "> القدرة على عزل الخلايا الآكلة بأعداد كبيرة في المختبر لتقدم كبير في فهم دورة إعادة تشكيل العظام ومهدت الطريق لاكتشاف استراتيجيات علاجية جديدة أن مكافحة هذه الأمراض.
هنا، نحن تصف بروتوكول لعزل وزراعة الخلايا الآكلة من نخاع العظم الماوس التي من شأنها أن تسفر عن أعداد كبيرة من الخلايا الآكلة.
المقدمة
إعادة تشكيل العظام هو دينامية وينطوي على اقتران تكوين العظام مع ارتشاف العظم 1. هذه العملية للتنظيم محكم مسؤولة عن الحفاظ على الهيكل العظمي خلال التوازن الطبيعي، وردا على الاصابة والمرض.
الخلايا الآكلة هي الخلايا متعددة النوى الفريدة القادرة على resorbing كلا من المصفوفات العضوية وغير العضوية من العظام. وتستمد الخلايا الآكلة من نسب الوحيدات / بلعم من نخاع العظم 2-5. تشوهات في وظيفة أو تشكيل الخلايا الآكلة يمكن أن يؤدي إلى مجموعة متنوعة من الأمراض السريرية، بما في ذلك الحالات الشائعة مثل مرض هشاشة العظام.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
ملاحظة: البيان الأخلاقي: تم تنفيذ كافة البحوث التي تنطوي على الحيوانات الفقارية في بروتوكولات فقا افق الفريق الإداري ستانفورد في رعاية الحيوان المعملية (APLAC).
1. إعداد
- تمكين 10 مل من وسائل الإعلام المتاحة تجاريا الفصل كثافة الخلية التدرج (الذي يحتوي polysucrose والصوديوم دياتريزوات، تعديلها لكثافة 1.077 غ / مل) للقدوم إلى RT في 50 مل أنبوب مخروطي الشكل.
- إعداد التدفق الخلوي (نظام مراقبة الأصول الميدانية) العازلة مع 1X الفوسفات مخزنة المالحة ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
وكان الهدف من هذا الأسلوب لعزل بسهولة أعداد كبيرة من الخلايا الآكلة في المختبر، وعادة في أسبوع واحد. وقد أكد العزلة الناجحة لأعداد كبيرة من الخلايا الآكلة باستخدام المقاومة للحمض الفوسفاتيز طرطرات تلطيخ (الشكل 1A). وتصور الخلايا الآكلة الكبيرة وخلايا الأرجواني كبيرة مع نوى متعددة (عادة ≥ 3 نوى). باستخدام هذا البروتوكول، ومن الشائع لعزل الخلايا الآكلة مع ما يصل إلى 30 نواة في ناقضة العظم (الشكل 1B).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
وكانت القدرة على عزل بسهولة وزراعة أعداد كبيرة من الخلايا الآكلة في المختبر مسؤولا عن المساعدة على تعزيز فهم البيولوجيا العظام والأمراض بوساطة ناقضة العظم. كان تحديد RANKL التي تؤدي إلى هذا، عندما تم التعرف عليه مؤخرا كمنظم رئيسي لتشكيل ناقضة العظم، والتمايز والبقاء 16-18.
فقد كان من تجربتنا أن زراعة في المختبر من الخلايا الآكلة من نخاع العظام تعتمد إلى حد كبير على كثافة البذر. لاحظنا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
لا أحد المؤلفين لديه الإفصاح أو تضارب في المصالح ليعلن.
شكر وتقدير
نعترف بدعم من المعاهد الوطنية للصحة منح R01 DE021683، R01 DE019434، U01 HL099776، مؤسسة ومختبر أوك Hagey للأطفال الطب التجديدي.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| MEM ، لا جلوتامين ، لا فينول أحمر | Gibco | 51200-038 | |
| M-CSF ، ماوس مؤتلف | Gibco | PMC2044 | |
| نشوة الفأر المؤتلف / RANK L / TNFSF11 (E. coli< / em> معبر) R | & D Systems | 462-TEC-010 | |
| Prostaglandin E2 | Sigma-Aldrich | ||
| Histopaque-1077 | Sigma-Aldrich | 10771 | |
| Acid Phosphatase ، Lekocyte (TRAP) Kit | Sigma-Aldrich | 387A | |
| ألواح ارتشاف العظام ، 24 لوحة بئر | Corning Life Sciences | 3987 |
المراجع
- Sims, N. A., Martin, T. J. Coupling the activities of bone formation and resorption: a multitude of signals within the basic multicellular unit. BoneKEy reports. 3, 481 (2014).
- Kahn, A. J., Simmons, D. J. Investi....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
