كانت خطوط الخلايا السرطانية وإنشاء xenografts الدعامة الأساسية لأبحاث السرطان على مدى العقود العديدة الماضية. ومع ذلك، تشير الأدلة مؤخرا أن الاستجابة العلاجية وتتأثر الى حد كبير المكروية الخلايا السرطانية. لذلك، قمنا بتطوير تحليل العينات خارج الحي الورم الرئيسي لأغراض تطوير الأدوية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الاستجابة للعلاج خارج الحي من الأورام الابتدائية و / أو أسوشيتد الانبثاث لما قبل السريرية والسريرية التنمية من التداوي
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
كان التحليل الجزيئي لخطوط الخلايا السرطانية الراسخة الدعامة الأساسية لأبحاث السرطان على مدى العقود العديدة الماضية. توفر زراعة الخلايا تحليلا مباشرا وسريعا للحساسية العلاجية والمقاومة. ومع ذلك ، تشير الأدلة الحديثة إلى أن الاستجابة العلاجية ليست حصرية للتركيب الجزيئي المتأصل في الخلايا السرطانية ولكنها تتأثر بشكل كبير بالبيئة الدقيقة للخلايا السرطانية ، وهي ميزة لا يمكن تلخيصها بطرق الاستزراع التقليدية. حتى تنفيذ الطعوم الغريبة للورم ، على الرغم من أنه يوفر ثروة من المعلومات حول توصيل / فعالية الدواء ، لا يمكنه التقاط الحديث المتبادل للخلية السرطانية / البيئة الدقيقة (أي العوامل القابلة للذوبان) التي تحدث داخل الأورام البشرية وتؤثر بشكل كبير على استجابة الورم. إلى هذا الحد ، قمنا بتطوير تقنية ex vivo (تقسيم الأنسجة الطازجة) والتي تسمح بالتقييم المباشر للاستجابة للعلاج لتطوير العلاجات قبل السريرية والسريرية. تحافظ هذه التقنية على سلامة الأنسجة والهندسة الخلوية في سياق الخلية السرطانية / البيئة المكروية طوال استجابة العلاج مما يوفر وسيلة أكثر دقة لتقييم فعالية الدواء.
المقدمة
وقد ثبت تطوير علاجات فعالة لمرض السرطان تكون صعبة للغاية. خطوط الخلايا السرطانية والأورام إإكسبلنتس - وكذلك xenografts استخدمت في أبحاث السرطان لأكثر من نصف قرن 1،2،3. حتى الآن، فإن التحليل الجزيئي للحساسية المخدرات والمقاومة في كل من أنشأ خطوط الخلايا السرطانية وxenografts المستمدة من المريض (PDX) أمر لا غنى عنه. ومع ذلك، واختبار المركبات في خطوط الخلايا السرطانية أنشئت ليست في كثير من الأحيان التنبؤي من فعالية في الجسم الحي، وما يقابلها من الدراسات المجراة على الحيوانات، وخاصة في نماذج PDX، مكلفة للغاية وتستغرق وقتا طويلا. القيود المفروضة على هذه الأنظمة النموذجية، وهي عدم القدرة على الإبلاغ عن تأ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
ملاحظة: وأذن المشتريات الأنسجة للمريض من خلال مجلس مراجعة المؤسسية (IRB) وافق عليها Biospecimen والبروتوكولات السريرية (أرقام بروتوكول 09-121 11-041 و، على التوالي) في مركز ميموريال سلون كيترينج للسرطان.
1. الأنسجة المشتريات
- شراء المريض الورم الأساسي / ثانوي لورم خبيث
ملاحظة: حتى الآن، وقد تم تنفيذ هذا البروتوكول على البنكرياس والمعدة وورم الثدي أنواع ازالتها جراحيا، وكذلك، الانبثاث سرطان الغدد الليمفاوية.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
لهذه الدراسة، تم استخدام هذه التقنية المجراة سابقا في تحليل مترابط من حساسية العلاجية / مقاومة بروتين الصدمة الحرارية 90 المانع (Hsp90i). في التقييم قبل السريرية لهذا Hsp90i، الورم الرئيسي سرطان الثدي، وهو ER + الغازية سرطان الأقنية (IDC)، وما يرتبط بها من الانبثاث العقدة الليمفاوية تم تحليلها خارج الحي للاستجابة العلاج (الشكل 1). تم علاج 200 ميكرون أقسام متعددة التسلسلية مع السيارة فقط وزيادة جرعات (0.25، 0.50، 1.0 و 2.5 ميكرو.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
تواجه الأحياء السرطان تحديات كبيرة عند محاولة وضع استراتيجيات علاجية فعالة. يمكن اختبار المخدرات في التنمية على خطوط الخلايا السرطانية أنشئت لا تعكس بدقة ردا المجراة في التجارب المجراة على نماذج PDX هي عمالة كثيفة ومكلفة للغاية. نظرا لأعلاه، تطبيق فيفو السابقين تقنيات مريض الأورام الأولية 14 و 15 يتم وضع الآن بجانب التحليل الجزيئي للخطوط الخلايا السرطانية وإنشاء xenografts المستمدة من المريض (PDX).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
لم يتم الكشف عن أي تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
يود المؤلفون أن يشكروا فريق خدمة شراء الأنسجة MSKCC (TPS) ، على وجه التحديد ، ماريا كورازون ماريانو ، وبريسيلا ماكنيل ، وأنس إدلبي ، ودانيال نافاريت ، وكاترينا ألين ، في جميع جهودهم في السعي الناجح لهذا المشروع والتمويل من المصادر التالية: 5 R21 CA158609-02 ومؤسسة Conquer Cancer Foundation ومؤسسة أبحاث سرطان الثدي. بالإضافة إلى ذلك ، يود المؤلفون أن يشكروا إريك كوتنغتون دكتوراه ، نائب رئيس مكتب البحوث وإدارة المشاريع ، ومكتب تطوير التكنولوجيا ، والتوعية البحثية والامتثال ، ودعم أنظمة المعلومات RTM ، في دعم تقديم هذه المخطوطة.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| Vibratome Leica VT1000s | Leica | 14047235613 | |
| UltraPure agarose | Invitrogen | 16500500 | تحضير 4٪ و 6٪ قبل الاستخدام |
| شفرة حاقن | Ted Pella | 121-4 | |
| MEM مع البنسلين + Streptomycin | Media Core Facilities (MSKCC) يتم | إعداد وسائل الإعلام في مركز ميموريال سلون كيترينج للسرطان ؛ | |
| مشرط رقم 10 | Thermo Scientific | 31-200-32 | |
| ملقط يمكن التخلص | Cole-Parmer | 84011182 | |
| قالب | علم المجهر الإلكتروني | 70181 | |
| FBS (معطل بالحرارة) | Gemini | 100106 | |
| 24 لوحة بئر | Corning | 3524 | |
| Formalin (10٪) | Sigma Diagnostics | SDHT501128 | |
| محلول فورمالديهايد 16٪ | Thermo Scientific | 28908 | |
| تضمين ميكروسيتات | Simport | M503-2 | |
| الإيثانول (70٪) | فيشر Scientific | A405P-4 | |
| حمام مائي | فيشر Scientific | 15-462-2SQ | |
| ميكروويف | جنرال إلكتريك | موديل JES2051DNBB | |
| لاصق (إيثيل سيانواكريلات) | سيجما ألدريتش | E1505-5G | |
| أطباق 10 ملم | BD Falcon | 353003 | |
| أنابيب 15 مل BD | Falcon 352096 |
المراجع
- Abercrombie, M., Ambrose, E. J. Interference Microscope Studies of Cell Contacts in Tissue Culture. Experimental Cell Research. 15 (58), 332-345 (1958).
- Coriell, L. L., McAllister, R. M., Wagner, B. M. Criteria for Determining Malignancy in....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
