기본 종양 및 / 또는 전임상에 대한 관련 전이 및 치료제의 임상 개발의 전 생체 치료 응답

요약

설립 암 세포주 및 이종 이식편은 지난 수십 년간 암 연구의 주류이었다. 그러나, 최근의 증거는 치료 반응이 크게 종양 세포 미세 환경에 의해 영향을 받는다는 의미한다. 따라서, 우리는 약물 개발을 목적으로 일차 종양 시료의 생체 외 분석을 개발 하였다.

초록

확립된 암 세포주의 분자 분석은 지난 수십 년 동안 암 연구의 주류였습니다. 세포 배양은 치료 민감도와 내성에 대한 직접적이고 신속한 분석을 제공합니다. 그러나 최근의 증거에 따르면 치료 반응은 암세포의 고유한 분자 구성에 국한되지 않고 오히려 전통적인 배양 방법으로는 요약할 수 없는 특징인 종양 세포 미세환경에 의해 크게 영향을 받습니다. 종양 이종이식편의 구현조차도 약물 전달/효능에 대한 풍부한 정보를 제공하지만, 인간 종양 내에서 발생하고 종양 반응에 큰 영향을 미치는 종양 세포/미세환경 누화(즉, 용해성 인자)를 포착할 수 없습니다. 이를 위해 우리는 전임상 및 임상 치료제 개발을 위한 치료 반응을 직접 평가할 수 있는 생체 외(fresh tissue sectioning) 기술을 개발했습니다. 이 기술은 치료 반응 전반에 걸쳐 종양 세포/미세환경 컨텍스트 내에서 조직 무결성과 세포 구조를 유지하여 약물 효능을 평가할 수 있는 보다 정확한 수단을 제공합니다.

서론

효과적인 암 치료제를 개발하는 것이 매우 어려운 것으로 입증되었습니다. 암 세포주와 종양 이식편 -뿐만 아니라 이종 절반 위에 세기 ^1,2,3 대한 암 연구에서 사용되어왔다. 현재까지, 약물 감수성 및 내성 둘 확립 암 세포주 및 이종 이식 환자 유래의 분자량 분석 (PDX)이 필수적이다. 그러나, 확립 암 세포주에서의 시험 화합물들은 생체 내 효능을 예측할 수없고, 특히 PDX 모델에서, 동물의 생체 내 연구에 대응하는, 매우 많은 비용과 시간이 소요된다. 이 모델 시스템, 종양 진행 및 치료 전략에 응답하여 네이티브 미세의 영향에 알리는 즉 무능력의 한계는 이러한 분석을 보완하기위한 추가 방법을 개발하는 연구 분야를 주도하고있다. 최근의, 높아진 관심은 환자 다치의 생체 분석으로 지급되는암 치료 반응은 암세포의 내재적 분자 조성물 단독이 아니라 오히려 크게 기존 배양 방법에 의해 효과적으로 요약 할 수없는 종양 세포 미세 환경 ^{(6, 7)} 기능에 의해 영향을 받는다는 인해 큰 이해 또는 이식편 ^{4, 5} / 또는 PDX. 상기 컨텍스트의 생체 외 분석 (예. 인접한 주위 종양 세포 미세 환경의 영향)보다는 셀룰러 균주 ^{8, 9의} <....

프로토콜

참고 : 환자 조직 조달이 제도적 검토위원회 (IRB)를 통해 권한이 부여 된 기념 슬로안 케터링 암 센터에서 Biospecimen 및 임상 프로토콜 (프로토콜 번호는 각각 09-121 및 11-041을) -approved.

1 조직 조달

1. 환자의 기본 종양 / 전이 조달
   참고 : 현재까지,이 프로토콜은 수술로 제거 췌장, 위 및 유방 종양 유형뿐만 아니라, 같은 림프종 전이에 수행되었습니다.
   1. 멸균 유출 방지 컨테이너 내의 밀봉 및 살균 누수 방지 플라스틱 시편 가방에 병리학 부서에 택배 또는 공압 튜브 시스템에 의해 표본을 제공하기 위해 외과 팀을 직접. 더 포르말린 고정액으로 신선한 상태의 시료를 수송 할 수있는 외과 팀을 직접.
   2. 어느 것이 Inc의 멸균 기술을 사용하여 신선한 표본을 채취하기 위해 병리학 자 또는 병리학 지원을 직접층류 후드 멸균 장갑과 악기의 ludes 사용.
   3. 수술의 완성에서 30 분에서 엄격하게 유지된다 조달 시료의 채취 시간을 기록한다. 냉 허혈을 고려하여 효과를 고려,> 30 분 ^(18)의 감기 허혈성 시간 절제술에서 샘플을 채취하지 않습니다.
   4. 무균 환경을 유지하기 위해 층류 후드에서 1.0 ....

결과

이 연구를 위해 생체 외 기술은 열 충격 단백질 90 저해제 (Hsp90i)의 치료 감수성 / 내성 상관 분석에 사용 하였다. 이 Hsp90i, 유방암 일차 종양, ER + 침윤성 암종 (IDC), 및 관련된 림프절 전이의 임상 평가에 치료 반응을위한 생체 외 분석 하였다   (그림 1). 여러 200 μm의 시리얼 섹션 Hsp90i의 차량 만 증가 복용량 (0.25, 0.50, 1.0 및 2.5 μM)로 처리 하였다. 그림 1의 데이터는 포르말린에 고정 된 48 시간의 치료 기간에 따라 파라핀 (FFPE)와 헤 마톡 실린 및 에오신 (H & E) 염색 섹션을 나타냅니다. 핵 형태 학적 변화에 의해 볼 때 2.5 μM 처리 조직 절편은 세포 사멸의 40 % 유도 결과 반면 처리 부분 제어 (전용 차량) 가능한 IDC 둥지를 보여줍니다 (즉, pyknotic 핵 / APOPtotic .......

토론

효과적인 치료 전략을 개발하려고 할 때 암 생물 학자들은 상당한 도전에 직면하고 있습니다. 확립 암 세포주에서 약물 개발을 테스트하는 것은 정확하게 생체 반응과 PDX 모델에서 생체 내 실험은 노동 집약적이고 비용이 매우 다를 수있다. 상기를 감안 기본 환자의 생체 기술의 애플리케이션 ^(15)은 현재 설정된 암 세포주와 환자 유래의 이종 이식 (PDX)의 분자량 분석 옆에 ^{위치되는, 14} 종양.

이 문서는 기술이 충실하게 응답에 (IC50)를 알려주는 것을에 새로운 높이로, 오프 - 타겟 효과를 생체 기술의 적용을 받아 저항과 피드백 메커니즘을 분자 분석을 할 수 있습니다. 응답 데이터는 종양 분자 프로필에 종양 몰 대 (즉, 단백질, 종양 바이오 마커의 발현, 돌연변이) 상호 연구 (응답 상관되면ecular 프로필) 환자의 결과를 개선하기위한 노력으로, 특.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Vibratome Leica VT1000s	Leica	14047235613
UltraPure 아가로스	Invitrogen	16500500	사용 전에 4%와 6%를 준비하십시오
. 주입기 블레이드	Ted Pella	121-4
MEM과 페니실린; + 스트렙토마이신	미디어 코어 시설 (MSKCC)		미디어는 Memorial Sloan Kettering Cancer Center에서 준비됩니다
메스 번호 10	Thermo Scientific	31-200-32
일회용 집게	Cole-Parmer	84011182
Embedding mold	전자 현미경 과학	70181
FBS (불활성화)	Gemini	100106
24웰 플레이트	Corning	3524
포르말린(10%)	Sigma Diagnostics	SDHT501128
16% 포름알데히드 용액	Thermo Scientific	28908
임베딩 마이크로제트	Simport	M503-2
에탄올(70%)	Fisher Scientific	A405P-4
수조	Fisher Scientific	15-462-2SQ
마이크로파	General Electric	ModelJES2051DNBB
접착제(에틸 시아노아크릴레이트)	Sigma-Aldrich	E1505-5G
10mm 접시	BD 팔콘	353003
15ml 튜브	BD 팔콘	352096