수일 방사성 반감기와 유리한 붕괴 특성으로 인해 양전자 방출 방사성 금속 89Zr은 PET 이미징을 위한 항체 기반 방사성 의약품에 사용하기에 매우 적합합니다. 이 프로토콜에서는 89Zr 표지 항체의 생체접합, 방사성 합성 및 전임상 적용에 대해 설명합니다.
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이 논문에서
요약
초록
항체의 탁월한 친화력, 특이도, 선택은 그들에게 종양을 대상으로 PET 방사성 의약품에 대한 매우 매력적인 벡터를 확인합니다. 으로 인해 여러 날 생물학적 반감기, 항체는 비교적 긴 물리적 붕괴 반감기 양전자 방출 방사성 핵종으로 표시해야합니다. 전통적으로, 양전자 방출 동위 원소 (124)는 I (t 1/2 = 4.18 D), (86) Y (t 1/2 = 14.7 시간), 64 구리 (t 1/2 = 12.7 시간)은 대한 항체를 라벨 사용되어왔다 PET 영상. 그러나 최근 필드는 항체 기반 PET 이미징 에이전트에 양전자 방출 방사성 89 ZR의 사용이 크게 증가를 목격 하였다. 그것이 물리적 반을 가지고 89 ZR은 면역 접합체와 PET 이미징에 대한 거의 이상적인 방사성 동위 원소 인 항체의 생체 내 약물 동태와 호환되며 상대적으로 낮은 에너지를 방출 - 생활 (t 1/2 = 78.4 시간)고해상도 이미지를 생성 RGY의 양전자. 또한, 항체는 노골적 시데로 포어 파생 킬레이트 desferrioxamine (DFO)를 사용하여 89 ZR으로 표시 할 수 있습니다. 이 프로토콜에서, 전립선 특이 막 항원 표적 항체 J591은 예시 모델 시스템으로 사용한다 (1) 항체, (2) radiosynthesis 및 89 Zr-의 정제 - 이소 티오 시아 네이트 DFO 관능 킬레이트 바이오 콘쥬 게이션 암의 뮤린 모델 ZR-89-DFO 단클론 radioimmunoconjugate와-DFO 단클론 radioimmunoconjugate, 및 (3) 생체 내 PET 영상화.
서론
인해 현저한 감도, 친화력 및 선택성으로, 항체는 긴 암 세포에 방사선 동위 원소의 전달을 위해 유망 벡터를 고려되었다. 그러나, 양전자 방출 단층 촬영 (PET) 영상에의 응용들은 표지 용 적당한 양전자 방출 동위 원소의 부족에 의해 방해되어왔다. radioimmunoconjugates의 설계에서 가장 중요한 고려 사항 중 1-3 하나의 물리적 붕괴 매칭되는 하프 항체의 생체 내 약물 동태에 방사성 동위 원소의 생활. 보다 구체적으로, 항체는 종종 비교적 긴 멀티 일 생물학적 반감기를 가지므로 비교 물리적 반감기의 방사성 동위 원소로 표지되어야한다. PET 영상 응용 프로그램의 경우, 항체는 전통적으로 (64) 구리 (t 1/2 = 12.7 시간), (86) Y (t 1/2 = 14.7 시간), 또는 (124) I (t 1/2 = 4.18 D). (4) 방사성 동위 원소 표지왔다, 5 단, 각이러한 방사성 동위 원소 임상 영상에 대한 적합성을 방해 상당한 한계를 가지고있다. 86 Y 64 구리로 표지 radioimmunoconjugates 전임상 연구에서 유망....
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프로토콜
설명 생체 내 동물 실험의 모든 승인 된 프로토콜과 기념 슬로안 케터링 암 센터의 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)의 윤리적 지침에 따라 따라 수행 하였다.
J591에 DFO-NCS 1. 활용
- 1.7 ml의 마이크로 원심 분리 튜브에서, 1X 인산 완충 생리 식염수 (PH 7.4), 0.5 M HEPES 완충액 (pH 7.4) 중 어느 하나를 1ml의 J591 2-5 ㎎ / ㎖의 용액을 제조 하였다.
- 5 내지 10㎜ (3.8-7.6 ㎎ / ㎖)의 농도로 DMSO에 건조 DFO-NCS 녹인다. 초음파 처리 또는 소용돌이 완전히 용해를 용이하게하기 위해 충분히 용액.
- 작은 분량 씩 0.1 M 나 2의 (<10 μL) CO 3를 추가하여 8.8-9.0로 J591 용액의 pH를 조정합니다.
- 항체 용액은 pH에서 올바른되면 관능 킬레이트 3-4 배 몰 과량 대응 DFO-NCS 용액의 볼륨.
- 시험을위한PLE, 2 ㎎ / ㎖ J591 항체 액 1 ㎖ (13.3 nmol의 J591)에 10 mM의 (7.6 ㎎ / ㎖) DFO-NCS 용액 (40.4 nmol의 DFO-NCS)의 4 ~ 5 μl를 추가합....
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결과
이 프로토콜 항체 DFO-NCS의 공액의 첫 번째 단계는 일반적으로 매우 견고하고 신뢰할 수있다. 일반적으로, 정제, 킬레이트 변성 면역 접합체는> 90 %의 수율로 얻을 수 있고, 초기의 접합 반응에서 DFO-NCS의 3 몰 당량을 사용하여 차수의 표지 약 1.0-1.5의 킬레이트 DFO의 수율 것이다 / 단클론 항체. 프로 시저의 89 ZR의 방사선 및 정제 단계는 마찬가지로 간단합니다. 위의 프로토콜에 설명 된 농도> 80 %의 방사선 수율> 2.0 mCi의 / mg을 따라서 특정 활동에 실온에서 60 분 후 일반적이다. 원유의 방사선 혼합물의 무선 TLC 크로마토 그램 가능성이 용매 전면 (그림 4A)에서 용출 일부 DTPA 바인딩 89 ZR을 4+ 발표 할 예정이다. 그러나 radioc DTPA를 반응물을 급냉 (89) ZR-DFO 단클론은 크기 배제 크로마토 그래피를 통해 정제 한 후 건설정제.......
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토론
건설, 방사성 표지, 및 이미징의 ZR-89-DFO labled radioimmunoconjugates이 다소 간단한 절차가 일반적이지만,이 프로세스의 각 단계에서 마음에 몇 가지 주요 고려 사항을 유지하는 것이 중요하다. 예를 들어, 아마도 절차 공액 단계 동안 우려 원인은 공액 반응 동안 항체의 집합이다. 이 문제는 대개 DFO-NCS 스톡 용액의 첨가 후 접합 반응의 불량한 혼합하는 제품이다.이 경우, DFO-NCS의 비균질 분포가 로컬 반응이 과도하게 높은 수준을 유발할 수있다 (22) 결과적으로 집계 될 수 있습니다 항체. 이 문제는 비교적 용이하게 그리고 온도에서 반응 혼합물을 철저히 DFO-NCS의 첨가 후, 반응 혼합물을 혼합 (<5 μL) 작은 분량 씩 DFO-NCS 스톡 용액을 첨가하고, 교반에 의해 회피 될 수있다전자 제어 통. 또한, DFO 단클론 구조체의 접합 및 정제 한 결과, 정확하게 각각의 단클론 항체에 접합 DFO의 수를 결정하는 것이 중요하다. 항체 .......
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공개 사항
저자가 공개하는 게 없다.
감사의 글
저자는 도움이 대화를 교수 토마스 라이너, Jacob 박사 호튼 박사 서지 Lyaschenko 감사합니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| p-SCN-Bn-DFO | Macrocyclics | B-705 | -80 °에서 저장; C |
| [89Zr]Zr-oxalate | Perkin-Elmer | 주의: 방사성 물질 | |
| PD-10 탈염 컬럼 | GE Healthcare | 17-0851-01 | 실온에서 보관 |
| Amicon Ultra-4 원심 필터 유닛 | EMD Millipore | UFC805024 | 실리 |
| 카겔 함침 RadioTLC 종이 | Agilent Technologies | SGI0001 | 0.5cm 너비의 스트립으로 자릅니다. |
참고문헌
- Wu, A. M. Antibodies and antimatter: The resurgence of immuno-PET. Journal of Nuclear Medicine. 50 (1), 2-5 (2009).
- Wu, A. M., Olafsen, T. Antibodies for molecular imaging of cancer. Cancer Journal. 14 (3), 191-197 (2008).
- Wu, A. M., Senter, P. D.
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재인쇄 및 허가
