이 프로토콜의 목표는 마우스의 정소성 췌장 종양 이종 이식편에 동적 대비 강화 자기 공명 영상(DCE-MRI)을 적용하는 것입니다. DCE-MRI는 표적 조직의 미세혈관 구조를 분석하는 비침습적 방법이며, 새로운 요법 후 종양의 혈관 반응을 평가하는 데 유용합니다.
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이 논문에서
요약
초록
Dynamic contrast enhanced magnetic resonance imaging (DCE-MRI)은 복부 부위의 심각한 호흡 운동 아티팩트로 인해 정소성 췌장 종양 이종 이식편에 제한적으로 사용되었습니다. 정형소 종양 모델은 혈액 공급, 신생혈관형성 및 종양 세포 침습에 영향을 미치는 원발성 종양 미세환경을 반영할 수 있기 때문에 피하 종양 모델에 비해 이점을 제공합니다. 최근에는 이미징 중 흉부 부위의 움직임 전달을 방지하기 위해 직각으로 구부러진 플라스틱 보드로 종양을 고정하여 마우스 모델에서 orthotopic 췌장 종양 이종이식편의 DCE-MRI 프로토콜을 수립했습니다. 이 위원회에 의한 압력은 복부에 국한되어 있었고 동물의 호흡 곤란을 초래하지 않았습니다. 이 논문은 소동물을 사용한 정형소 췌장 종양 모델링과 종양 이종이식편의 DCE-MRI에 대한 자세한 절차를 보여줍니다. DCE-MRI에서 약동학 매개변수의 정량화 방법도 소개합니다. 이 기사에 설명된 절차는 연구자가 정소성 위장관 암 마우스 모델에 DCE-MRI를 적용하는 데 도움이 됩니다.
서론
이 방법의 전반적인 목표는 생쥐에서 소성 췌장 종양 이종 이식에 대한 동적 대비 강화 된 자기 공명 영상 (DCE-MRI)을 적용하는 것입니다. DCE-MRI는 주사 후 일정 기간에 걸쳐 MR 콘트라스트의 변화를 모니터링함으로써 표적 조직에서 미세 혈관을 평가하는 비 침습적 방법이다. DCE-MRI는 악성 종양을 진단하고 치료 1-4 다양한 종양 반응을 평가하기 위해 이용되고있다. 양적 DCE-MRI는 높은 재현성 5를 발표했다. 표적 조직 MR 조영제의 약물 동태 학적 파라미터를 정량하기 위해, 콘트라스트 주입 전의 다양한 시점 및 T1 맵 취득한 모든 DCE-MR 이미지는 6 coregistered되어야한다. 그러나, 복부의 호흡과 연동 운동에 양적 DCE-MRI는 위장관 종양 제한된 응용 프로그램을했다.
동소 췌장 종양 모델을 평가하기 위해 사용되어왔다생물학적 치료와 화학 요법 7,8 다음 췌장 종양 반응. 원래 종양 부위에서의 미세 환경이 반사 및 치료함으로써 인간의 종양 반응을보다 정확하게 예측할 수 있기 때문에 종양 동소 이식 모델은, 종래의 피하 모델 우수 여겨진다. 그러나, 마우스의 췌장은 복부의 왼쪽 윗부분에 위치하고 있으며, 생쥐에서 소성 췌장....
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프로토콜
모든 절차는 버밍엄 알라바마 대학의 기관 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다.
1. 동소 이식 췌장 종양 마우스 모델링
- 둘 베코 변성 이글 배지 (DMEM)에서 배양 표준 인간 췌장 암 세포주는 10 % 소 태아 혈청. 5 % CO 2 가습 분위기에서 37 ° C에서 모든 문화를 유지한다.
- 8~10주 세 여자 심한 결합 면역 결핍 마우스를 사용합니다. 12 시간 빛과 12 시간의 어둠 사이클 RT에서 (21 ± 2 ° C의) 60 %의 습도에서 동물 케이지를 놓습니다.
- 수술 내내 산소 (2 리터 / 분)과 혼합 된 이소 플루 란 2 %와 환기 장치를 사용하여 모든 동물을 마취. 발가락 핀치 반사에 의한 마취의 깊이를 확인합니다. 가열 패드 (37 ° C)에 도시 동물 체온을 유지한다. 마취 동안 건조를 방지하기 위해 눈에 수의학 안과 연고를 적용합니다. &# 160;
- 각 마우스의 복부의 왼쪽 윗부분에 머리를 제거하고 진통제를주는 영역으로 (5 ㎎ / 체중 피하의 kg carpofen). 노출 된 피부에 베타 딘 솔루션을 적용합니다. 멸균 수술 도구를 준비합니다.
- 피부에 1cm의 절개를하고 홍채 바로 가위를 사용하여 복막....
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결과
인간 췌장 종양 세포는 마우스 췌장 고형 종양 생성에 성공적으로 성장한다. (1) (A) 종양 세포 용액이 주입되어 정상적인 췌장, 및 (B)의 사진을 보여준다 동소 췌장 종양 이종 이식 베어링 대표적인 마우스 (MIA PACA -2- ). 종양은 다음 비장, 복부의 왼쪽 윗부분에 위치하고 있습니다. 세포 주입 후 직경 7 mm의 - 종양이 5 성장하는 사주 - 보통이 소요됩니다.
동 잡음이 특정 크기에 자기 공명 영상에 존재하지만, 동소 췌장 종양 이종 이식의 움직임은 실질적으로 억제되었다. T2W MR 이미지에서, 종양 영역 위의 공기의 MR 신호의 표준 편차는 피하 종양 모델을 사용했을 때 췌장 종양 세포는 동소보다도 주입했을 때 약 2.5 배 더 컸다.도 2a는 DCE위한 셋업의 개략도를 도시 소성 pancreati의 -MRIC 종양 이종 이식. 주황색 원은 직각으로 구부러진 플.......
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토론
우리는 면역 결핍 마우스, 마우스 복부 종양의 DCE-MRI, 그 운동 매개 변수의 정량화를 사용하여 소성 췌장 종양 모델링의 상세한 방법을 소개했다. 췌장의 꼬리에 바늘을 삽입 할 때 소성 췌장 종양 모델에서주의를 기울여야합니다. 성공적인 경우, 세포는 작은 소포를 만드는 췌장의 머리로 전달 될 것이다. 직각 굽힘 플라스틱 기판을 적용 할 때의 종양은 기판의 상부 단부 아래에 위치되는 것을 확인하는 것이 중요하다. 췌장 종양 다이어프램 근처이기 때문에, 기판은 종양의 크기는 직경 5mm 이하이며, 특히, 확실하게 유지할 수없는 일 수있다. 촬영 후, 복부는 동물이 의식 될 때까지 부드럽게 마사지한다. 이것은 복부 통증을 방지하기 위해 90 분 이상보다 각 동물에 대한 총 이미징 및 제조 시간을 초과하지 않을 것을 권장.
플라스틱의 치수보드는 종양이나 동물의 크기에 따라 재조정 될 필요가있다. 종양의 크기가 5mm 미만이면, 종양은 단단히 MR 이미지에서 발생할 수 4mm 깊.......
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공개 사항
저자는 선언할 이해 상충이 없습니다.
감사의 글
저자는 정소성 췌장암 마우스 모델링을 도와준 Jeffrey Sellers에게 감사를 표합니다. 이 작업은 UAB 방사선학과의 Research Initiative Pilot Awards와 NIH 보조금 2P30CA013148 및 P50CA101955의 지원을 받았습니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| DMEM | Invitrogen | 11965-118 | |
| 소 태아 혈청 | Harlan Laboratories | BT-9501 | |
| Betadine | Purdue 제품 | 67618-153-01 | |
| 5-0 Prolene 봉합사 | Ethicon | 8720H | |
| 9.4T MR 스캐너 | Bruker Biospin Corporation | BioSpec 94/20 USR | |
| Gadoteridol | Bracco Diagnostics Inc | NDC 0270-1111-03 | |
| 마이크로 폴리에틸렌 튜브 | Strategic Applications, Inc | #PE-10-25 | |
| 30 G 블런트 팁 니들 | Strategic Applications, Inc | 89134-194 | |
| 모니터링 및 게이팅 시스템 | SA 기기, Inc | 모델 1030 | 이것은 작은 동물의 보호 등급과 체온을 동시에 측정하는 MR 호환 시스템입니다. |
| 주사기 펌프 | New Era Pump Systems, Inc. | NE-1600 |
참고문헌
- Ergul, N., et al. Assessment of multifocality and axillary nodal involvement in early-stage breast cancer patients using 18F-FDG PET/CT compared to contrast-enhanced and diffusion-weighted magnetic resonance imaging and sentinel node biopsy. Acta Radiol. , (2014).
- Park, J. J., et al.
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재인쇄 및 허가
