Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Хирургическое Травма поджелудочной железы мыши через перевязка панкреатического протока в качестве модели для эндокринной и экзокринной перепрограммирования и распространения

16.4K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/52765

⸱

7 августа 2015 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Diabetes Research Center, Vrije Universiteit Brussel

В этой статье

Краткое содержание

Этот протокол описывает модель травмы, включающую хирургическое перевязку протока поджелудочной железы в поджелудочной железе взрослой мыши, что приводит к серьезной травме, которая создает среду, позволяющую неогенезу и пролиферации бета-клеток. Эта модель может быть использована в качестве инструмента для изучения механизмов, участвующих в образовании бета-клеток.

Аннотация

Расширение панкреатических бета-клетках в естественных условиях или в силу естественных или поколения бета-клеток путем дифференцирования из эмбриона или взрослого стволовых клеток, может обеспечить новые расширяемые источники бета-клеток, чтобы облегчить дефицит доноров в трансплантации островков человека в качестве терапии для лечения диабета. Хотя недавние успехи были достигнуты к достижению этой цели, механизмы, регулирующие расширение бета и дифференцировку клеток из стволовых клеток / клеток-предшественников еще предстоит характеризуется. Здесь мы опишем протокол для модели повреждения в поджелудочной железе взрослых мышей, которые могут функционировать в качестве инструмента для изучения механизмов ремоделировании ткани и пролиферации бета-клеток и дифференциации. Частичное канал перевязки (PDL), является экспериментально индуцированной травмы поджелудочной железы грызунов участием хирургическое лигирование главного панкреатического протока в результате обструкции дренажа экзокринных продуктов из области хвоста поджелудочной железы. Нанесли ущерб вызывает атрофию ацинарных, иммунную infilt клетокРацион и тяжелой ткани ремоделирования. Ранее мы уже сообщали активации Neurogenin (NGN) 3, выражая эндогенных предшественников, как клетки и увеличение пролиферации бета-клеток после PDL. Таким образом, PDL обеспечивает основу для изучения сигналов, участвующих в динамике бета-клеток и свойства эндокринной прародителя во взрослой поджелудочной железы. Так, он по-прежнему остается в значительной степени неясным, какие факторы и пути способствуют регенерации бета-клеток и пролиферации в PDL, стандартизированный протокол для PDL позволит для сравнения между лабораториями.

Введение

Растущая распространенность диабета, затрагивающая более 300 миллионов человек во всеммире1,2, подтолкнула к поиску новых источников инсулин-продуцирующих бета-клеток, как in vitro, так и in vivo, для восполнения дефицитной бета-клеточной массы.3 Выявление ключевых механизмов и факторов, регулирующих пролиферацию бета-клеток и неогенез бета-клеток, т.е. дифференцировку бета-клеток из не-бета-клеток или клеток-предшественников, может обеспечить новые мишени для разработки регенеративной терапии при сахарном диабете.

В развивающейся поджелудочной железе грызунов все типы эндокринных клеток дифференцируются от транзиторной популяции эндокринных клеток-предшественников, экспрессирующих фактор транскрипции Neurogenin3 (Ngn3). 4,5 В поджелудочной железе взрослого грызуна при нормальных физиологических условиях масса бета-клеток поддерживается на оптимальном уровне для удовлетворения метаболических потребностей. Изменения в размере бета-клеток, апоптозе и репликации являются основными механизмами роста и обновления бета-клеток. 6-8 В то время как способность бета-клеток к пролиферации в нормальных физиологических условиях однородна во всей популяции,9 скорость их пролиферации низка, а ререпликация ограничена периодом динамического покоя или рефрактерным периодом6,7, на который влияют возраст и метаболизм глюкозы. 10 Поскольку эндокринные клетки-предшественники до сих пор не были идентифицированы в нормальной взрослой поджелудочной железе, считается, что неогенез не способствует нормальному росту взрослых бета-клеток. 8

Следовательно, идентификация факультативной эндокринной клетки-предшественника в поджелудочной железе взрослого человека, которая является расширяемой и способной производить новые бета-клетки, обеспечит новый, возможно, неограниченный источник бета-клеток.

Частичная лигация протоков (PDL) - это модель травмы животных, которая, как было описано, индуцирует неогенез бета-клеток во взрослой поджелудочной железе. 11,12 В этой модели основной проток поджелудочной железы, дренирующий хвост поджелудочной железы, перевязывается хирургическим путем. Возникающая в результате обструкция экзокринного дренажа вызывает серьезное ремоделирование тканей, сопровождающееся воспалением и атрофией ацинаров дистальнее лигирования. 12-14 В этой воспалительной среде индуцируется реэкспрессия эндокринного маркера-предшественника Ngn3, и объем бета-клеток увеличивается в два раза. Это удвоение объема бета-клеток является результатом генерации новых бета-клеток из эндокринной клетки-предшественника эндокринного типа Ngn3, экспрессирующей эмбриональный тип, а также пролиферации ранее существовавших и вновь образованных бета-клеток, которые склонны к повторной дупликации без «периода покоя». 11,15

Неогенез и репликация бета-клеток в моделях травм, таких как панкреатэктомия6,7,16-19 и селективная абляция бета-клеток20, были подробно описаны. Тем не менее, регенеративный результат в этих моделях зависит от степени нанесенного повреждения и связан со снижением начальной массы бета-клеток21. PDL представляет собой хирургическую модель, при которой первоначальная масса бета-клеток не изменяется, а неогенез и пролиферация бета-клеток активируются надежно. Действительно, в поджелудочной железе мышей, которым был выполнен PDL, клетки, экспрессирующие Ngn3, идентифицируются вблизи эпителиальной выстилки протока. Эти клетки могут быть выделены из лигированной поджелудочной железы трансгенных мышей Ngn3-GFP с использованием сортировки флуоресцентно активированных клеток (FACS) и способны дифференцироваться в функциональные бета-клетки после приживления и ex vivo культуры поджелудочной железы мышей E12,5 Ngn3-/-. 11 Аналогично, в Ngn3CreERT; У мышейR26 YFP, у которых клетки, активировавшие ген Ngn3, были навсегда помечены после инъекции тамоксифена, бета-клетки, полученные из клеток Ngn3, были обнаружены после PDL. 15 Кроме того, вновь образованные бета-клетки разбавляют ранее существовавшие бета-клетки и преимущественно располагаются в небольших островках, внутри которых бета-клетки демонстрируют высокий потенциал пролиферации. 15 Ngn3 важен для экспансии бета-клеток после PDL, поскольку снижение экспрессии Ngn3 с использованием короткой РНК-мишени значительно снижает массу бета-клеток и пролиферацию бета-клеток после PDL. 11 Следует отметить, что доля бета-клеток, полученных из Ngn3, и масса бета-клеток после PDL критически зависят от уровня индукции Ngn3 15. Это согласуется с наблюдением, что высокий уровень экспрессии Ngn3 является критическим этапом для эндокринной приверженности со стороны мультипотентных предшественников поджелудочной железы во время развития поджелудочной железы. 22 Кроме того, селективная абляция клеток, экспрессирующих Ngn3, путем введения дифтерийного токсина вNgn3 CreERT; У мышейR26 iDTR снижается содержание инсулина и пролиферация бета-клеток, особенно в небольших островках. 15

Хотя индукция экспрессии Ngn3 в протоковых клетках после PDL была подтверждена многими11,15,16,23,24, экспрессия Ngn3 в островковых клетках24,25 и расхождения в исходе PDL поставили под сомнение наши первоначальные наблюдения увеличения массы бета-клеток26,27, появления Ngn3, экспрессирующих эндокринных предшественников, происходящих из протоков,24,26,28,29, и увеличения пролиферации бета-клеток27 после PDL. 30

Эти противоречивые результаты можно, по крайней мере частично, объяснить комбинацией факторов, включая различия в послеоперационных временных точках анализа, массу тела, пол и возраст мышей, послеоперационные физиологические условия и условия окружающей среды и, самое главное, различия в хирургической технике. 30 В наших руках пролиферация бета-клеток, содержание инсулина, объем бета-клеток и количество малых островков постоянно увеличиваются после PDL. Кроме того, мРНК Ngn3 постоянно увеличивается, но существуют большие различия в экспрессии мРНК Ngn3 между поджелудочными полосами хвоста PDL, для чего у нас нет прямого объяснения. Мы предположили, что уровень мРНК Ngn3 может коррелировать со степенью неогенеза бета-клеток из не-бета-клеток15, но это требует дальнейшего обоснования. Несмотря на то, что стандартизированный метод проведения операции PDL не устраняет все экспериментальные вариации, он позволяет добиться лучшего единообразия результатов и открывает новые возможности в изучении пролиферации бета-клеток и неогенеза.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Все манипуляции следуют рекомендациям Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых в экспериментальных и других научных целях (ETS 123 и 2010/63/EU).

1. Подготовка рабочей зоны

  1. Предусмотрите отдельную зону подготовки, операционную зону и зону восстановления.
  2. Проводите всю хирургическую процедуру в ламинарном шкафу, чтобы свести к минимуму загрязнение окружающей среды.
  3. Соберите необходимые материалы (как указано в разделе «Материалы и методы») на участке подготовки, хирургии и восстановления, используя надлежащую асептическую технику.
  4. Перед операцией убедитесь, что хирургические инструменты были автоклавированы.
  5. Обеспечьте грелку с рециркуляцией воды при температуре 38 °C для стабилизации температуры во время операции. Накройте грелку стерильной водонепроницаемой прокладкой.
  6. Предусмотрите операционный микроскоп с увеличением не менее 6,3Х.
  7. Используйте стерилизатор инструментов, например стерилизатор горячих шариков, для стерилизации инструментов между хирургическими процедурами.
  8. Подготовьте зону восстановления, состоящую из большой клетки, выстланной плоской бумажной подстилкой

2. Подготовка животных к операции

  1. Для PDL и фиктивной хирургии используйте 8-недельных самцов мышей, содержащихся в стандартных клетках и поддерживаемых в течение 12-часового светового / 12-часового темнового цикла, а также получающих стандартную диету для грызунов ad libitum.
    Примечание: Здесь мы используем мышей BALB/cJrJ, но мы также успешно использовали другие штаммы и различные трансгенные штаммы.
  2. Используйте бупренофин в качестве упреждающей анальгезии (0,05 – 0,1 мг/кг) за 30 минут до операции.
  3. Обезболивают мышей путем внутрибрюшинного введения 100 мг/кг кетамина и 5 - 10 мг/кг ксилазина.
  4. Оцените правильную анестезию, наблюдая за постепенной потерей произвольных движений и расслаблением мышц. Проверьте потерю рефлексов путем пощипывания пальцев ног.
  5. Применяйте офтальмологическую мазь для предотвращения сухости глаз во время пребывания под наркозом.

3. Подготовка места операции

  1. Продезинфицируйте грудную клетку и брюшную полость антисептическим раствором хлоргексидина.
  2. Побрейте участок живота размером 2,5 см х 1,5 см.
  3. Продезинфицируйте выбритый участок с помощью марли, смоченной раствором хлоргексидина, затем спиртовым раствором и заключительным нанесением раствора хлоргексидина.
  4. Расположите животное в операционной зоне таким образом, чтобы подготовленное хирургическое место было обращено вверх к хирургу.
  5. Накиньте мышь с помощью водонепроницаемой хирургической простыни с отверстием, которое оставляет продезинфицированную область живота открытой, закрывая при этом остальную часть тела, чтобы создать стерильное рабочее поле. Перед процедурой следите за мышью на предмет глубины анестезии.

4. Перевязка протоков поджелудочной железы

  1. лапаротомия
    1. Сделайте верхний разрез по средней линии на коже, идущий от мечевидного отростка до пупка, с помощью стерильного хирургического лезвия. Отделите нижележащую белую линию и брюшину с помощью стерильных ножниц, чтобы обнажить верхний квадрант брюшной полости.
    2. Предотвратите пересыхание внутренних органов регулярным посыпанием стерильным 0,9% хлоридом натрия.
    3. С помощью стерильного пинцета или тампона втяните желудок вверх, обнажив селезенку и долю селезенки (хвостовую область) поджелудочной железы.
    4. Аккуратно втяните двенадцатиперстную кишку и часть верхней тощей кишки в правый верхний брюшной квадрант, чтобы обнажить головку, шею и область тела поджелудочной железы, покрытую висцеральной брюшиной.
  2. лигатура
    1. Определите анатомическое положение главного протока поджелудочной железы в области шейки поджелудочной железы.
    2. Надрезать висцеральную брюшину и желудочно-кишечную связку, обеспечивая доступ к забрюшинному пространству, обнажая тело и хвостовую область поджелудочной железы. Для того чтобы обнажить область шеи, выполните маневр Кохера. Поднимите двенадцатиперстную кишку и головку поджелудочной железы от забрюшинного пространства, подняв их от нижней полой вены и расположенной ниже аорты.
    3. Осторожно поместите шпатель под область шеи. Перевязать проток поджелудочной железы проленовой нитью 6-0 с левой стороны воротной вены, разделяющей гастродуоденальную и селезеночную доли.
    4. Выполните вторую лигацию в непосредственной близости от первой, чтобы убедиться, что доли адекватно разделены.
    5. Перевязывайте очень осторожно, чтобы не повредить нижележащие кровеносные сосуды, а именно верхнюю панкреатодуоденальную артерию, нижнюю панкреатодуоденальную артерию и панкреатическую часть селезеночной артерии.
    6. Поместите органы обратно в брюшную полость.
    7. Закройте разрез с помощью полигликолевой нити 4-0 в непрерывном шовном виде для мышечного/брюшинного слоя и в прерывистом шовном узоре для кожи.

5. Фиктивная хирургия

  1. Выполните все действия, как описано в шагах с 1 по 4.1.4. Пока поджелудочная железа обнажена, не выполняйте перевязку протока поджелудочной железы.
  2. В конце шага 4.1.4 поместите внутренние органы обратно в брюшную полость.
  3. Закройте разрез, как описано в пункте 4.2.7.

6. Послеоперационный уход и мониторинг

  1. После завершения хирургической процедуры поместите мышь в зону восстановления. Он состоит из клетки, размещенной на грелке и выстланной плоской бумажной подстилкой для поддержания нормальной температуры тела.
  2. Обеспечьте питательную поддержку, чтобы избежать послеоперационной гипогликемии, с помощью увлажненного корма, помещенного на дно клетки. Для этой цели используют стандартные диетические гранулы грызунов, замоченные в воде до размягчения.
  3. Обеспечьте флюидную поддержку увлажненной пищей и обеспечьте водой в неограниченном количестве.
  4. Используйте бупренофин в качестве обезболивания (0,05 – 0,1 мг/кг) два раза в день в течение 2 дней после операции. В течение всего эксперимента наблюдайте за мышами на предмет появления возможных признаков инфекции, включая выделение жидкости или гноя из раны, или физического ухудшения, характеризующегося снижением груминг-поведения и уровня активности, снижением аппетита и потерей массы тела.

7. Оценка успешного PDL и сбора поджелудочной железы хвоста PDL и поджелудочной железы ложного хвоста

  1. Усыпляйте мышей при вывихе шейки матки.
  2. Повторно побрейте область живота, чтобы избежать переноса шерсти.
  3. Откройте кожу живота и мышечный слой и удалите большой участок кожи и мышц, чтобы получить хороший доступ к поджелудочной железе.
  4. С помощью стерильного пинцета или тампона желудок втягивается вверх, обнажая селезенку и долю селезенки (хвостовую область) поджелудочной железы.
  5. Аккуратно вытяните двенадцатиперстную кишку и часть верхней тощей кишки, чтобы обнажить гастродуоденальную долю (область головки) поджелудочной железы.
    Примечание: Перевязанная часть поджелудочной железы PDL в настоящее время уменьшилась в размерах и стала почти прозрачной, так что островки видны в виде маленьких белых точек. Головная часть поджелудочной железы имеет непрозрачный розовый цвет, и можно наблюдать отчетливые экзокринные лобули.
  6. С помощью стерильных ножниц отделите перевязанную хвостовую часть поджелудочной железы от селезенки, разрезав вдоль селезенки. Разрежьте отколовшуюся соединительную ткань, соединяющую хвостовую область поджелудочной железы с внутренними органами.
  7. Разрежьте область хвоста PDL прямо перед лигацией, исключив из заготовленной ткани лигатуру и непосредственно прилегающую к ней ткань.
  8. Чтобы изолировать фиктивную ткань хвоста, выполните шаги с 7.1 по 7.5. С помощью стерильных ножниц отделяют хвостовую область бутафорской поджелудочной железы от селезенки путем разреза вдоль селезенки. Изолируйте хвостовую область, разрезав область шейки поджелудочной железы и разрезав соединительную ткань, соединяющую хвостовую поджелудочную железу с внутренними органами
    Примечание: И хвост, и головная часть бутафорированной поджелудочной железы имеют непрозрачный розовый цвет, чтобы изолировать обе части отдельно, разрежьте поджелудочную железу в области шеи.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

PDL вызывает атрофию ацинусов и воспаление, но не влияет на массу тела и гликемию

У 8-недельных самцов мышей линии BALB/c перевязывают проток, через который экзокринные ферменты выводятся из хвоста поджелудочной железы, при этом головка органа, расположенная рядом с желудком и двенадцатиперстной кишкой, остается незатронутой. Самцам мышей BALB/c того же возраста, пола и веса проводят имитирующую (шам) операцию, которая повторяет все этапы частичного лигирования протока, за иск...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

В настоящем исследовании мы подробно описываем методологию, лежащую в основе PDL, модели травмы мышей для изучения неогенеза бета-клеток, а также пролиферации и трансдифференцировки небета-клеток поджелудочной железы. Неоднозначность данных о PDL в разных лабораториях стимулирует потребность в стандартизированном протоколе хирургии PDL.

Важнейшие шаги в протоколе PDL включают отбор здоровых, молодых мышей для хирургического вмешательства. Предпочтительно использовать мышей-самцов, поскольку не...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Авторы выражают признательность всем коллегам, которые сделали эту работу возможной; Анн Демарре (Ann Demarré), Веерле Лаурисенсу (Veerle Laurysens), Яну де Йонге (Jan De Jonge) и Эрику Куартье (Erik Quartier) за техническую помощь. Финансовую поддержку оказали Исследовательский совет VUB, Институт содействия инновациям в науке и технике во Фландрии (IWT), Консорциум бета-клеточной биологии (BCBC), Фонд научных исследований Фландрии (FWO), Diabetes Onderzoek Nederland (DON) и Межуниверситетский полюс притяжения (IAP).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Расходные материалы для участка подготовки 
Hibiscrub Regent Medical5601IE5F11Хлоргексидин диглукон
КетаминCevaBE-V202526анестезия
Rompun(2%) (Ксилазин)BayerBE-V041815анестезия
DuratearsAlcon34335-8мазь для глаз
Бритвенные
принадлежности для хирургической области 
Leica Операционный микроскопLeica10446320
Стерилизатор горячих шариковFine Science Tools (FST)18000-45
автоклавные хирургические инструментыFine Science Tools (FST)
Рециркуляционная водяная грелкаGaymar Industries, Inc.TP702
Клейкое полотенцеБАРЬЕР706500-07
ОП-лентаБАРЬЕР381035-00
Stella 3/5 Compresse de gaze (Стерильный)Lohmann& Rauscher International35968
Mini Plasco 0,9% раствор NaClB.BRAUN3521680
6-0 проленовый шовный материалEthicon8706H
4-0 полигликолевый шовный материалEthiconSL-607
Расходные материалы для зоны
Бумажное постельное белье (бумажное полотенце)
VetergesicecuPharBE-V342955
Материалы для анализа
Taqman Ngn3Интегрированные технологии ДНКMm.PT.56a.33574796.gs
Taqman CycloA праймерИнтегрированные технологии ДНКMm.PT.39a.2.gs
антителом к расщепленной каспазе 3 (D175)Клеточная сигнализация5A1E
против мышей/крыс Ki-67 антителоeBioscience14-5698-82
моноклональный антиактин альфа-Гладкие мышцы-Cy3 (мышь)Sigma085K4889
антикрысиный цитокератин 19 DSHB
моноклональная мышь анти-BrdUDakoM0744
HoechstSigma33342
восстановления

Ссылки

  1. Shaw, J. E., Sicree, R. A. Global estimates of the prevalence of diabetes for. Diabetes Res Clin Pract. 87, 4-14 (2010).
  2. Danaei, G., et al. National, regional, and global trends in fasting plasma glucose and diabetes prevalence since 1980: systematic analysis of health examination surveys and epidemiological studies with 370 country-years and 2·7 million participants. Lancet. 378, 31-40 (2011).
  3. Borowiak, M., Melton, D. A. How to make beta cells. Current opinion in Cell Biology. 21, 727-732 (2009).
  4. Gradwohl, G., Dierich, A., LeMeur, M., Guillemot, F. neurogenin3 is required for the development of the four endocrine cell lineages of the pancreas. Proc Natl Acad Sci U S A. 97, 1607-1611 (2000).
  5. Gu, G., Dubauskaite, J., Melton, D. A. Direct evidence for the pancreatic lineage: NGN3+ cells are islet progenitors and are distinct from duct progenitors. Development. 129, 2447-2457 (2002).
  6. Dor, Y., Brown, J., Martinez, O. I., Melton, D. A. Adult pancreatic beta-cells are formed by self-duplication rather than stem-cell differentiation. Nature. 429, 41-46 (2004).
  7. Teta, M., Rankin, M. M., Long, S. Y., Stein, G. M., Kushner, J. A. Growth and regeneration of adult beta cells does not involve specialized progenitors. Dev Cell. 12, 817-826 (2007).
  8. Bonner-Weir, S. Perspective: Postnatal pancreatic beta cell growth. Endocrinology. 141, 1926-1929 (2000).
  9. Brennand, K., Huangfu, D., Melton, D. All beta cells contribute equally to islet growth and maintenance. PLoS Biol. 5, e163(2007).
  10. Salpeter, S. J., Klein, A. M., Huangfu, D., Grimsby, J., Dor, Y. Glucose and aging control the quiescence period that follows pancreatic beta cell replication. Development. 137, 3205-3213 (2010).
  11. Xu, X., et al. Beta cells can be generated from endogenous progenitors in injured adult mouse pancreas. Cell. 132, 197-207 (2008).
  12. Wang, R. N., Kloppel, G., Bouwens, L. Duct- to islet-cell differentiation and islet growth in the pancreas of duct-ligated adult rats. Diabetologia. 38, 1405-1411 (1995).
  13. Yasuda, H., et al. Cytokine expression and induction of acinar cell apoptosis after pancreatic duct ligation in mice. Journal of interferon, & cytokine research : the official journal of the International Society for Interferon and Cytokine Research. 19, 637-644 (1999).
  14. Van Gassen, N., et al. Macrophage dynamics are regulated by local macrophage proliferation and monocyte recruitment in injured pancreas. European journal of immunology. , (2015).
  15. Van de Casteele, M., et al. Neurogenin 3+ cells contribute to beta-cell neogenesis and proliferation in injured adult mouse pancreas. Cell Death Dis. 4, e523(2013).
  16. Xiao, X., et al. No evidence for beta cell neogenesis in murine adult pancreas. The Journal of clinical investigation. 123, 2207-2217 (2013).
  17. Ackermann Misfeldt, A., Costa, R. H., Gannon, M. Beta-cell proliferation, but not neogenesis, following 60% partial pancreatectomy is impaired in the absence of FoxM1. Diabetes. 57, 3069-3077 (2008).
  18. Lee, C. S., De Leon, D. D., Kaestner, K. H., Stoffers, D. A. Regeneration of pancreatic islets after partial pancreatectomy in mice does not involve the reactivation of neurogenin-3. Diabetes. 55, 269-272 (2006).
  19. Bonner-Weir, S., Sharma, A. Pancreatic stem cells. The Journal of pathology. 197, 519-526 (2002).
  20. Nir, T., Melton, D. A., Dor, Y. Recovery from diabetes in mice by beta cell regeneration. The Journal of clinical investigation. 117, 2553-2561 (2007).
  21. Bouwens, L., Rooman, I. Regulation of pancreatic beta-cell mass. Physiol Rev. 85, 1255-1270 (2005).
  22. Wang, S., et al. Neurog3 gene dosage regulates allocation of endocrine and exocrine cell fates in the developing mouse pancreas. Developmental biology. 339, 26-37 (2010).
  23. Pan, F. C., et al. Spatiotemporal patterns of multipotentiality in Ptf1a-expressing cells during pancreas organogenesis and injury-induced facultative restoration. Development. 140, 751-764 (2013).
  24. Kopp, J. L., et al. Sox9+ ductal cells are multipotent progenitors throughout development but do not produce new endocrine cells in the normal or injured adult pancreas. Development. 138, 653-665 (2011).
  25. Wang, S., et al. Sustained Neurog3 expression in hormone-expressing islet cells is required for endocrine maturation and function. Proc Natl Acad Sci U S A. 106, 9715-9720 (2009).
  26. Kopinke, D., et al. Lineage tracing reveals the dynamic contribution of Hes1+ cells to the developing and adult pancreas. Development. 138, 431-441 (2011).
  27. Rankin, M. M., et al. beta-Cells are not generated in pancreatic duct ligation-induced injury in adult mice. Diabetes. 62, 1634-1645 (2013).
  28. Solar, M., et al. Pancreatic exocrine duct cells give rise to insulin-producing beta cells during embryogenesis but not after birth. Dev Cell. 17, 849-860 (2009).
  29. Furuyama, K., et al. Continuous cell supply from a Sox9-expressing progenitor zone in adult liver, exocrine pancreas and intestine. Nat Genet. 43, 34-41 (2011).
  30. Van de Casteele, M., et al. Partial duct ligation: beta-cell proliferation and beyond. Diabetes. 63, 2567-2577 (2014).
  31. Zhang, J., Rouse, R. L. Histopathology and pathogenesis of caerulein-, duct ligation-, and arginine-induced acute pancreatitis in Sprague-Dawley rats and C57BL6 mice. Histology and histopathology. 29, 1135-1152 (2014).
  32. Martinez-Romero, C., et al. The epigenetic regulators Bmi1 and Ring1B are differentially regulated in pancreatitis and pancreatic ductal adenocarcinoma. The Journal of pathology. 219, 205-213 (2009).
  33. Prevot, P. P., et al. Role of the ductal transcription factors HNF6 and Sox9 in pancreatic acinar-to-ductal metaplasia. Gut. 61, 1723-1732 (2012).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Больше статей

Частичное лигирование протокалигирование панкреатического протокапролиферация бета-клетокэндокринные клетки-предшественникиремоделирование тканейиммуногистохимический анализОТ-ПЦРсрединная лапаротомияхирургические узлыатрофия ацинусов
Хирургическое Травма поджелудочной железы мыши через перевязка панкреатического протока в качестве модели для эндокринной и экзокринной перепрограммирования и распространения
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.