דגם שבץ טרומבוטיים בהתבסס על היפוקסיה-איסכמיה מוחית חולפת

Summary

מודלים של שבץ טרומבואמבולי הם כלים חיוניים לאופטימיזציה של הטיפול בתיעול מחדש. כאן אנו מדווחים על מודל שבץ מוחי פקקתי המבוסס על עלבון מוחי היפוקסי-איסכמי חולף (tHI), המעורר פקקת ואוטם, ומגיב בחיוב לפיברינוליזה בתיווך מפעיל פלסמינוגן רקמות (tPA) בחלון טיפולי הדומה לאלו בחולי שבץ מוחי.

Abstract

מחקר שבץ סבל עיכובים רבים בתרגום טיפולי נוירו לתוך פרקטיקה קלינית. לעומת זאת, הטיפול בעולם האמיתי (thrombolysis tPA) לעתים רחוקות מייצר יתרונות בדגמים ניסיוניים המבוסס על חסימה מכאני, אשר שולטים מחקר פרה-קליני שבץ. פיצול זה בין הספסל והמיטה מרמז על הצורך להעסיק דגמי tPA מגיבים במחקר פרה-קליני שבץ. לשם כך, מודל שבץ טרומבוטיים פשוט וtPA-reactive הוא המציא ושתואר כאן. מודל זה מורכב מחסימה הזמנית של עורק תרדמה המשותף חד-צדדי ואספקה ​​של חמצן 7.5% באמצעות מסכת פנים בעכברים בוגרים למשך 30 דקות, תוך שמירה על הטמפרטורה רקטלית של בעלי החיים ב37.5 ± 0.5 מעלות צלזיוס. למרות קשירה הפיכה של עורק תרדמה חד-צדדי או היפוקסיה כל מודחקת זרימת דם במוח רק זמני, השילוב של שניהם העלבונות שנגרם נמשך גירעונות reperfusion, הפיברין ותצהיר של טסיות דם, וinfar הגדולct בשטח המסופק עורק המוח האמצעי. חשוב לציין, הזרקה של רקומביננטי tPA ברמה של 0.5, 1, או 4 שעות שלאחר תי (10 מ"ג / קילוגרם) וריד זנב סיפק הפחתה של גודל שיעור תמותה ואוטם תלוי זמן. מודל השבץ חדש זו הוא פשוט ויכול להיות טופל בכל מעבדות להשוות את תוצאות ניסוי. יתר על כן, זה גורם פקקת ללא craniectomy או החדרת תסחיפים מראש יצר. בהתחשב ביתרונות הייחודיים אלה, מודל תי הוא תוספת שימושית לרפרטואר של מחקר פרה-קליני שבץ.

Introduction

Thrombolysis וrecanalization הוא הטיפול היעיל ביותר של שבץ איסכמי חריף בפרקטיקה קלינית ^1. ובכל זאת, רוב המחקר פרה-קליני neuroprotection בוצע במודל חולף מכונאי חסימה (חסימת intraluminal תפר האמצע מוחית עורק) שמייצר התאוששות מהירה של זרימת דם במוח על הסרת החסימה של כלי הדם ומראה לא מעט על מנת יתרונות על ידי thrombolysis tPA. זה כבר הציע כי הבחירה המפוקפקת של דגמי שבץ תרמה, לפחות בהחלק, לקושי בתרגום טיפול נוירו לחולי ^2,3. לפיכך, יש שיחת הגדלת להעסקת דגמי שבץ תרומבואמבוליים tPA מגיבים במחקר פרה-קליני, אך מודלים כאלה צריכים גם בעיות טכניות (ראה דיון) ^4-7. כאן אנו מתארים מודל שבץ טרומבוטיים חדש המבוסס....

Protocol

פרוטוקול זה אושר על ידי הוועדה המוסדית הטיפול בבעלי חיים והשימוש (IACUC) מאוניברסיטת אמורי ועוקב המכונים הלאומי לבריאות קו מנחה לטיפול ושימוש בחי מעבדה.

1. התקנה

1. הכן את המיטה כירורגית על כרית החימום מחוברת עם משאבת חום על 37 מעלות צלזיוס במשך לפחות 15 דקות לפני הניתוח. מניחים גליל צוואר באמצעות החבית של 3 מיליליטר מזרק על מיטת הניתוחים. הכן את גז ההרדמה עם isoflurane 2% באוויר רפואי.
2. הכן מלקחיים autoclaved, מספריים, מחזיק....

Results

הדמיה ניגוד רבב לייזר דו-ממדית (LSCI) ¹⁶ שימשה כדי להשוות את השינויים בזרימת דם במוח (CBF) על ידי חסימת 30 דקות חולפות תרדמה חד-צדדית (tCCAO), חשיפת 30 דקות להיפוקסיה (חמצן 7.5%), ו -30 דקות חד-צדדית תרדמה קשירה תחת היפוקסיה (תי). ניסוי זה גילה כי tCCAO תחת normoxia דיכא את CBF על חצי הכדור התרדמה ligated ל~ 50% מהערך הבסיסי, שהתאושש במהירות למעל 85% לאחר שחרורו של חסימת עורק התרדמה (R באיור 2 א). חשיפה להיפוקסיה המערכתית לבד מופחתת CBF לכ -75% מהערך הב.......

Discussion

שבץ הוא בעיה בריאותית משמעותית של גידול משמעות לכל חברה עם אוכלוסייה מזדקנת. בעולם, שבץ הוא הגורם מוביל השני של מוות עם 5.9 מיליון אירועים משוערים קטלניים בשנת 2010, שווה ערך ל 11.1% מכל מקרי המוות ^18. שבץ הוא גם הגורם מוביל השלישי של שנות חיים מותאמות לנכות (DALYs) איבד ברחבי העולם בשינה 2010, עולה מהעמדה החמישית בשינה 1990 ^19. נתונים אפידמיולוגיים אלה מדגישים את הצורך של טיפולים יעילים יותר של שבץ חריף (איסכמי). עם זאת, למרות מחקר אינטנסיבי בטיפול נוירו פרה.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
עכברים זכרים בוגרים	צ'ארלס ריבר	C57BL/6	גיל 10-13 שבועות (22-30 גרם)
מערכת הרדמה לבעלי חיים במעבדה ניידת	VetEquip		901807 הרדמה
מיכל אוויר רפואי (דחוס) Airgas		UN1002	הרדמה
Isoflurane	Piramal Healthcare	NDC 66794-013-25	הרדמה
מעבדה מרובת תחנות מערכת הרדמה לבעלי חיים מערכת היפוקסיה
V703501 כירורגית7.5% O2 מאוזן על ידי 92.5% N2 מיכל	Airgas	UN1956	מערכת היפוקסיה
בקר טמפרטורה עם מנורת חימום	קול פארמר	בקרי טמפרטורה	EW-89000-10
בדיקה רקטלית	קול פארמר	בקרי טמפרטורה	NCI-00141PG
ניתוח מיקרוסקופ	אולימפוס	מערך כירורגי	SZ40
משאבת חום עם כרית חימום	Gaymar	מערך כירורגי	TP700
מלקחיים מעוקלים עדינים (משוננים)	FST	11370-31	מכשיר כירורגי
מלקחיים מעוקלים עדינים (חלקים)	FST	11373-12	מכשיר כירורגי
מספריים מיקרו	FST	15000-03	מכשיר כירורגי
מחזיקי מחט מיקרו	FST	12060-01	מכשיר כירורגי
Halsted-Mosquito המוסטטים	FST	13008-12	מכשיר כירורגי
5-0 תפר משי	מכשירי הרווארד	624143	ציוד כירורגי
4-0 תפר מונופילמנט ניילון	LOOK	766B	ציוד כירורגי
דבק רקמות	מעבדות אבוט	NC9855218	ציוד כירורגי
משחה וטרינרית Puralube	פישר	NC0138063	מניעת יובש בעיניים
צילום זרימת דם MoorFLPI-2	Moor	780-nm	הדמיית ניגודיות כתמי לייזר
מניטול	סיגמא	M4125	in vivo TTC
2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC)	Sigma	T8877	in vivo TTC
Vibratome	Stoelting	51425	קטע מוח עבור in vivo TTC
מיקרוסקופ דיגיטלי	Dino-Lite	AM2111	הדמיית מוח שלם
תרכובת O.C.T	Sakura Finetek	4583
עז אנטי-ארנב Alexa Fluro 488	Invitrogen	A11008	אימונוהיסטוכימיה
Cryostat	Vibratome	ultrapro 5000	קטע מוח עבור IHC
אוונס כחול	Sigma	E2129	זיהוי כלי דם מיקרוטום
מיקרוטום	אלקטרונים מדעי	5000	מדור מוח להיסטולוגיה
אברטין (2, 2, 2-טריברומו-אתנול)	Sigma	T48402	המתת חסד
מיקרוסקופ פלואורסצנטי	אולימפוס	DP73
מלוקסיקם SR	ZooPharm		NSAID משככי כאבים