Poster Colonne dérivatisation en utilisant la réaction Colonnes flux chromatographie liquide haute performance

Summary

Un protocole pour l’utilisation de colonnes de chromatographie liquide à haute performance en flux réactionnel pour les méthodes utilisant la dérivation post-colonne (PCD) est présenté.

Abstract

Un protocole pour l’utilisation de colonnes de chromatographie liquide à haute performance en flux réactionnel pour les méthodes utilisant la dérivation post-colonne (PCD) est présenté. L’une des principales difficultés rencontrées dans l’adaptation des PCD aux systèmes et colonnes HPLC modernes est la nécessité de disposer de bobines réactionnelles de grand volume qui permettent le mélange des réactifs, puis la réaction de dérivatisation. Ce grand volume mort de colonne entraîne un élargissement de la bande, ce qui entraîne une perte de l’efficacité de séparation observée et de la détection de la sensibilité. Dans la dérivatisation post-colonne à flux réactionnel (RF-PCD), le(s) réactif(s) de dérivatisation sont pompés contre l’écoulement de la phase mobile dans un ou deux des orifices extérieurs de la colonne d’écoulement réactionnel où ils sont mélangés à l’effluent de la colonne à l’intérieur d’une fritte logée à l’intérieur du raccord d’extrémité de la colonne. Cette technique permet un mélange plus efficace de l’effluent de la colonne et du ou des réactifs de dérivatisation, ce qui signifie que le volume des boucles de réaction peut être minimisé, voire éliminé complètement. Il a été constaté que les méthodes PCD-RF sont plus performantes que les méthodes PCD conventionnelles en termes d’efficacité de séparation observée et de rapport signal/bruit. Un autre avantage des techniques RF-PCD est la possibilité de surveiller les effluents provenant du port central dans leur état sous-ivatisé. La RF-PCD a actuellement été testée sur une gamme relativement restreinte de réactions post-colonne, cependant, il n’y a actuellement aucune raison de suggérer que la RF-PCD ne pourrait pas être adaptée à une ou deux composantes existantes (tant que les deux réactifs sont ajoutés en même temps) réaction de dérivation post-colonne.

Introduction

Chromatographie haute performance liquide (HPLC) couplée à la colonne après dérivatisation (PCD) est un outil puissant qui est utile dans la résolution d'un certain nombre de questions dans le laboratoire d'analyse. Il peut être utilisé pour détecter des composés qui sont par ailleurs indétectable à la série de détecteurs disponibles ^1,2, augmenter le signal de l'analyte cible, ce qui permet aux limites inférieures de détection et la quantification ou de manière sélective ^05/03 dérivatiser un analyte cible, afin d'éviter les effets de matrice ^6. Les réactions PCD couramment utilisés comprennent la réaction des amines, ....

Protocol

Attention: S'il vous plaît se référer à des fiches de données de sécurité (FDS) pour tous les matériaux et réactifs avant utilisation (c. -à- FS pour le méthanol). Assurer l'utilisation de toutes les pratiques de sécurité appropriées lors de la manipulation des solvants et chromatographie liquide haute performance (HPLC) éluant. Veiller à l'utilisation appropriée des contrôles techniques de HPLC analytique équilibre et détecteur instrumentation, et d'assurer l'utilisation des équipements de protection individuelle (lunettes de sécurité, gants, blouse, pantalon de longueur, et des chaussures fermées).

Remarque: Ce protocole décrit 3 méthodes de flux de....

Results

La première méthode PCD qui a été adapté pour être utilisé par RF-PCD est la dérivatisation d'antioxydants en utilisant le radical 2,2-diphényl-1-picrylhydrazil (DPPH ^{•) 24.} Cette réaction a été introduit par Koleva et al. , ²⁵ et a été largement utilisée depuis. La détection repose sur la décoloration du DPPH ^• radicalaire en présence d'espèces réactives de l' oxygène, d' où la présence d'anti - oxydants se traduit par une diminution de l'absorbance observée. DPPH

Discussion

RF-PCD permet le mélange efficace du réactif de dérivatisation avec le post-colonne HPLC effluent sans l'utilisation de bobines de réaction, minimisant ainsi les effets de l'élargissement de bande et améliorer la performance de séparation. Méthodes RF-CPD ont également montré l'amélioration de la réponse du signal par rapport au procédé de détection. Camenzuli et al. ²⁸ a été le premier à signaler l'utilisation de colonnes de flux de réaction avec DPPH ^• pour la détection d.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Instrument HPLC	Série Agilent	1290 HPLC
Pompe(s) supplémentaire(s) pour le système de dérivatisation	Shimadzu	LC-20A
RF colum			PEEK non commercial
	Sigma Aldrich	Z227307
Bouchons			Fourni avec
coupe-tube PEEK	à colonne Sigma	Aldrich Z290882
Balance Balance			analytique à 4 points
Chronomètre			Equipement non scientifique Flacons
collecte Eluent	N’importe quel petit flacon à fond plat fera l’affaire, par exemple , Flacons HPLC
utilisé
Récipients pour la phase mobile et la (les) solution(s) de dérivatisationSigma	Aldrich	Z232211
Laboratoire général Verrerie			Flacons jaugés, pippettes, etc. La quantité et les volumes dépendront de la méthode de préparation de l’échantillon.
Méthanol	Sigma Aldrich	34860
DPPH	Sigma Aldrich	D9132
Acétate d’ammonium	Sigma Aldrich	17836
Ammoniac	Sigma Aldrich	320145	Acétonitrile corrosif
	Sigma Aldrich	34998
Fluorescamine	Sigma Aldrich	F9015
4- aminoantipyrène  ;	Acros Organics BVBA	AC103151000
Ferricyanure de potassium	AnalaR	B10204-30