В этом исследовании, камера поток нано-Микрожидкостных был использован для визуализации и функционально характеризуют подергивания моторику Xylella fastidiosa, бактерии , которая вызывает болезнь Пирса в виноградной лозы.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Визуализация подергивания моторики и характеристика о роли
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Xylella fastidiosa является грамотрицательная , не жгутиковых бактерия , которая вызывает ряд экономически важных заболеваний растений. Подергивания моторика обеспечивает X. fastidiosa средство для передвижения на дальние расстояния внутри растений и колонизации, способствуя к патогенности в X. fastidiosa. подергивание моторика X. fastidiosa работает по типу IV ворсинок. Тип IV Пили из Xylella fastidiosa регулируются pilG, регулятор хемотаксиса в Пиль-CHP белков , кодирующих оперон, которые участвуют в пути передачи сигналов. Для выяснения роли pilG в подергивания моторики X. Были разработаны fastidiosa, А pilG дефицитных мутант Xf ΔpilG и комплементарной штамм XfΔpilG- С , содержащей нативный pilG. Микрожидком камеры интегрированы с системой записи изображения в заданный промежуток времени был использован для наблюдения подергивания моторику в XfΔpIlg, XfΔpilG- C и его штамм дикого типа. С помощью этой системы записи, она позволяет долгосрочные временные и пространственные наблюдения агрегации, миграцию отдельных клеток и популяций бактерий через подергивания моторики. X. fastidiosa дикого типа и дополняют друг друга штамм XfΔpilG- C показали типичные характеристики подергивания моторики непосредственно наблюдаемые в микрофлюидальных проточных камерах, тогда как мутант XfΔpliG выставлены подергивание дефицитный фенотип. Это исследование показывает , что pilG способствует подергивание моторики X. fastidiosa. Камера Микрожидкостных потока используется в качестве средства для наблюдения подергивания перистальтику.
Введение
Xylella fastidiosa является грамотрицательная не-жгутиковых, патогенный микроорганизм , который вызывает ряд экономически важных заболеваний сельскохозяйственных культур, в том числе болезни Пирса в виноградной лозы (Vitis винифера L.) 1,2, 3. Эта бактерия ограничена водопроводящие ксилемы судов. Заражение виноградной лозы вызывает закупорку сосудов ксилемы и приводит к водному стрессу и дефициту питательных веществ 3. Успешная колонизация зависит от способности бактерий , чтобы перейти от исходного места инфекции к остальной части растения 3. Подергивание моторику является средством жгутиков-независимого бактериальн....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
1. Периферийное Fringe Бактериального колонии
- Grow X. fastidiosa (Xf) Temecula дикого типа 22, pilG мутантом с делецией Xf ΔpliG ( с использованием ранее описанной стратегии удаления 23), и его комплементарный XfΔpliG -C ( с использованием ранее описанных хромосомный на основе стратегии генетической комплементации 24) на PD2 среда чашках с агаром 25 при 28 ° С в течение 5-7 дней.
- Автоклавы целлофан (1 х 1 см 2) в воде при температуре 121 ° С (249 ° F) в течение 15 мин. Возьмите одну часть целлофана, слить воду, касаясь одного угла целлофан....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Присутствие периферийной бахромы колонии указывающей тип IV пилей-опосредованной подергивание моторики, наблюдалась в колонии X. fastidiosa дикого типа и дополняют друг друга штамм Xf ΔpliG -C (Рисунок 1). Мутант XfΔpliG, однако, не проявляли бахромой по периметру колоний (Рисунок 1). Покадровый изображений бактериальных клеток в нано-Микрожидкостных проточных камерах показали , что подергивание моторики наблюдалось в .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
В данном исследовании мы характеризовали поведение движени X. fastidiosa PilG мутант Xf ΔpilG и его комплементарные штаммы XfΔpilG- C в новой конструкции с несколькими микро параллельно-нано-канал фл uidic камер. Недавно разработанная микро эт uidic камеры могут иметь до четырех параллельных камер с 100 мкм нано-канал шириной по сравнению с предыдущими конструкциями , только с одним 50 мкм широкий канал 18. Усовершенствованный шире нано-канал облегчает введение бак.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.
Благодарности
Это исследование было поддержано Департаментом сельского хозяйства Соединенных Штатов, Службы сельскохозяйственных исследований. Торговые наименования или коммерческие продукты, в данной публикации упоминаются исключительно с целью предоставления конкретной информации и не подразумевает рекомендацию или одобрение со стороны Соединенных Штатов департамента сельского хозяйства. Министерство сельского хозяйства США равные возможности и работодателем.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Biology materials | |||
| X. fastidiosa (Xf) Temecula wild type | Costa, H. S., et al., 2004 22 | ||
| >pilG делеционный мутант XfΔ pliG | Shi, X. Y., et al., 2007 26 | ||
| >pilG дополнительный штамм XfΔ pliG-C | Davis, M. J., et al. 1998 23 | ||
| >Physical materials and equipment | |||
| Disposable inoculating loops | VWR international, Radnor, PA | #22-363-607 | количественные процедуры, такие как бактериальный сбор |
| полидиметилсилоксана (PDMS) | Dow Corning Corporation | #0002709226 | Sylgard 184 силиконовые эластомерные комплекты |
| AmScope MD2000 цифровой фотоаппарат | AmScope, Ирвайн, CA | SE305R-AZ-E | Изображение, видеозапись и измерение |
| Трубки | линии Эджвуд, Нью-Йорк | Подключены к шприцу и микрофлюидной камере | |
| Пластиковые люэровские соединители | Эджвуд, Нью-Йорк | Подключены к шприцу и микрофлюидной камере | |
| Шприцевые насосы | Pico Plus, Harvard Apparatus, MA | #702209 | Скорость потока можно регулировать во время работы насоса. |
| Шприцы | газоплотные, Hemilton Company, Рино, NV | #1005 | Обеспечить проточный бульон |
| Инвертированный Olympus Микроскоп IMT-2 | Olympus | IMT-2 FLuoro PHase | Наблюдение и запись изображений |
| SPOT-RT цифровая камера | Diagnostic Instruments, Inc., MI | RT230 | Изображение, видеозапись и измерение |
| Микроскоп Затвор | The UNIBLITZ, US | #LS2T2 | Управление камерой |
| Микроскоп Система управления затвором | UNIBLITZ, US | VCM-D1 | VCM-D1 Одноканальный CE/UL/CSA Одобренный драйвер затвора |
| Программное обеспечение для обработки изображений MetaMorph Программное обеспечение для обработки изображений | Universal Imaging Corp., PA | Обработка изображений сверхвысокого разрешения в реальном времени |
Ссылки
- Purcell, A. H., Hopkins, D. L. Fastidious xylem-limited bacterial plant pathogens. Annu. Rev. Phytopathol. 34, 131-151 (1996).
- Purcell, A. H. Xylella fastidiosa, a regional problem or global threat. J. Plant Pathology. 79, 99-105 (1997).
- Hopkins, D. L.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
