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방법 논문

안구 약의 약동학 연구에서 토끼 눈의 사용

31.2K 조회수

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DOI:

10.3791/53878

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2016년 7월 23일

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이 논문에서

요약

토끼는 안구 주사 약물의 약동학을 연구하는 데 널리 사용됩니다. 토끼 눈을 사용하여 안구 내 약물의 약동학 연구를 수행하는 방법을 설명합니다.

초록

자신의 전신 흡수를 최소화하면서 약물 투여의 안내 경로, 치료 약물의 높은 농도의 전달을 가능하게한다. 몇몇 약물은 전방 또는 유리체 내로 투여되고, 주사 안내 다양한​​ 안구 질환의 치료에 효과적이었다. 동물이 다른 포유 동물에 비해 취급이 용이하고 경제적이기 때문에 가토 널리 안과 연구에 사용되었고, 토끼 눈의 크기는 사람의 눈의 그것과 유사하다. 30 G 바늘을 사용하여, 약물은 토끼 눈의 전방 내 강내 공간으로 주입 될 수있다. 안구는 분석까지 동결되고, 방수, 유리체, 망막 / 맥락막으로 나눌 수 있습니다. 유리체 망막 / 맥락막 샘플을 균질화하고 분석하기 전에 가용화 할 수있다. 그리고, 면역 각 구획에서 인공 약물의 농도를 측정하기 위해 수행 될 수있다. 적절한 약물 동력 학적 모델 일 수있다이러한 반감기 및 약물의 최대 농도 등 여러 가지 파라미터를 계산하는 데 사용된다. 토끼의 눈은 안구 내 약물의 약동학 적 연구를위한 좋은 모델이 될 수 있습니다.

서론

안구 내 약물 전달의 출현 전에 안구 질환에 대한 의학적 치료의 주된 관심사는 약물이 눈에 침투 할 수있는 효율이었다. 혈액 - 눈 장벽은 눈에 확산, 마약 등 많은 물질을 방지 할 수 있습니다. 따라서, 치료 수준 위에있는 약물의 농도는 쉽게 얻을 수 없다. 약물의 치료 적 농도는 눈 4,5-에서 달성 될 수 있도록 전방 내 강내 주사를 포함하는 안구 내 약물 투여 방법은 수 직접 혈액 - 안구 장벽을 우회 1-3.

따라서, 유리체 강내 약물 전달은 여러 가지 안구 질환 5,6 치료의 인기있는 방법이되고있다. 예를 들어, 강내 주사 널리 연령 관련 황반 변성, 당뇨병 성 망막증, 망막 정맥 폐색, 및 안구 감염 7-10 행한다. 특히, 이후항 -VEGF 약물의 도입은, 강내 주사 주파수는 현저히 망막 질환의 치료에 증가했다. 따라서, 약물 치료의 효능 및 안전성을 평가하기 위해 이러한 약물의 약동학 안압을 이해하는 것이 중요하다.

약물의 안내 행정부가 안구 내 약물 농도를 모니터링 안구 질환에 대한 약물 치료에 중요한 돌파구로 간주되지만 기술적으로 요구하고있다. 인간의 눈은 방수 (약 20....

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프로토콜

우리의 프로토콜은이 프로토콜에 제시된 동물 절차 및 동물 관리 방법을 모두 승인 분당 서울 대학교 병원의 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)의 지침을 따릅니다. IACUC는 실험 동물의 관리 및 사용 (2011)에 대한 안내서의 제 8 판을 완전히 준수에 있습니다. 모든 절차는 동물에서 안과 및 비전 연구에서 동물의 사용을위한 비전 및 안과 정책 연구 협회의 가이드 라인을 준수하여 수행 하였다. 개별 케이지는 토끼를 주택에 사용 하였다. 추가 수술이나 준비이 실험을 수행하기 전에 (즉, 살균)이 필요하지 않을 수 있습니다.

토끼 눈에 약 1. 안구 내 주사

  1. tiletamine 염산염과 zolazepam의 혼합물의 근육 내 주사로 1.5 kg 무게 건강한 뉴질랜드 흰 토끼를 마취염산염 (15 ㎎ / ㎏)와 자일 라진 하이드로 클로라이드 (/ kg 5 mg)을 얻었다. 수술법 (깜박임) 반사를 모니터링하거나 귀 핀치에 의해 마취를 확인합니다.
    참고 : 안압 약이 눈 안료에 결합하면 결합의 정도는 약물의 안구 약물 동태의 수정을 유도 할 수 있습니다. 예를 들어, 착색 된 토끼의 유리체 수성 체액에서 안료 결합 약물의 반감기를 증가 알비노 토끼 (14)이 비교 될 수있....

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결과

무균 기법 가토 관심 약물의 체내 주사를 실시하는 데 사용되는 방법은도 1에 도시되어있다. 처리 된 눈 예약 된 시간에 적출하고 -80 ℃에서 보관한다. 그림 2에서 입증 된 바와 같이 분석, 세 개의 구획, 수성 유머, 유리체, 망막 / 맥락막를 들어, 냉동 토끼 눈에서 분리된다. 구획의 샘플은 ELISA에 대 한 준비가되어 있습니다. 이차 항체와 함께 배양 한 결과, 광학 농도가 강내 주사 후 여러 시점에서 수집 된 세 개의 구획으로부터 표준 곡선에 대한 관심과 샘플의 약물의 공지 농도를 함유하는 96- 웰 플레이트에서 측정된다 (도 3). 표준 곡선 (보충도 1)로부터 산출되는 농도 데이터는 pharmacokine에 장착 될 수있다TIC 모델 및 약동학 적 파라미터가 피팅 된 선 (도 4)로부터 결정될 수있다. <.......

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토론

다양한 안과 질환 치료를 위해 항혈관 내피 성장 인자(VEGF) 제제와 같은 안내 약물의 사용이 증가함에 따라 안내 주사 후 약물의 조직 분포 및 제거에 대한 지식이 중요합니다. 안내 약물의 약동학을 이해하는 것은 약물의 효능과 안전성을 이해하고, 약물의 최적 용량을 결정하고, 전신 또는 안내 합병증을 최소화하는 데 중요합니다. 그러나 인간의 안내 약물에 대한 상세한 약동학 연구는 안전성 문제로 인해 제한적이며 적절한 동물 모델이 필요합니다.

토끼 시스템은 안내 약물의 전방내, 유리체강내 및 망막내 약동학을 연구하는 데 사용되는 잘 확립된 모델입니다16,21,31-33. 토끼는 다루기 쉽고 실험에 사용할 수 있습니다. 또한 토끼를 사용한 동물 연구는 원숭이와 같은 더 큰 동물을 사용하는 동물 연구에 비해 매우 경제적입니다. 약동학 연구의 경우, 이 시스템을 사용하면 동일한 토끼의 수성, 전체 유리체, 망막 및 혈청을 서로 다른 토끼의 서로 다른 시점에서 동시에.......

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공개 사항

저자는 공개할 이해 상충이 없습니다.

감사의 글

동물실험에 기술적인 도움을 주신 박지현 선생님과 박지연님께 감사드립니다. 본 연구는 분당서울대학교 병원연구기금(연구비번호: 제14-2014-022호)과 서울시 국립과학기술연구회의 융합사업사업(CCP-13-02-KIST)의 지원금으로 이루어졌다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
ZoletilVirbac Laboratories, Carros Cedex, 프랑스
자일라진 염산염 포트 닷지 연구소, 포트 닷지, IA
프로파라카인 염산염 (알카인)알콘 연구소, 포트 워스, 텍사스
페닐 에프린 염산염 및 트로피카 아미드Santen Pharmaceutical, Co., Osaka, Japan
재조합 인간 VEGF 165R & D systems293-VE-050
Carboate-Bicarbonate bufferSIGMAC3041-50CAP
Nunc Microwell 96F(뚜껑 포함) Nunclon D SiThermo SCIENTIFIC16700896 웰 플레이트
소 혈청 알부민(BSA) 25g(Net)BOVOGENBSA025
인산염 완충 식염수(PBS) pH 7.4(1x), 500mlgibco10010-023
Sheep anti-Human IgG 2차 항체, HRP 접합체Thermo SCIENTIFICPA1-28652
염소 항인간 IgG Fc(HRP)abcamab97225
염소 항-인간 IgG, Fab'2 보조 항체, HRP 결합Thermo SCIENTIFICPA1-85183
CelLytic MT  세포 용해 시약SIGMAC3228-50ML용해 버퍼
100 메스 블레이드nopa 기구BLADE #15
100 메스 블레이드nopa 기구BLADE #10
Feather 수술용 칼날 스테인리스 스틸FEATHER11
1-StepTM TMB-블로팅 기질 용액, 250mlThermo SCIENTIFIC34018
안정적인 과산화물 기질 버퍼 (10x), 100 mlThermo Scientific34062
Softmax ProMolecular Devicesv.5.4.1소프트웨어로 표준 곡선
생성 SAAM II Saam Institute, Seattle, WA약동학 모델링을 위한 소프트웨어
Phoenix WinNonlinPharsight, Cary, NCv. 6.3약동학 모델링을 위한 소프트웨어
Avastin (bevacizumab)Genentech

참고문헌

  1. Urtti, A. Challenges and obstacles of ocular pharmacokinetics and drug delivery. Adv Drug Deliv Rev. 58, 1131-1135 (2006).
  2. Geroski, D. H., Edelhauser, H. F. Drug delivery for posterior segment eye disease. Invest Ophthalmol Vis Sci. 41, 961-964 (2000).....

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