이 원고는 실험실 쥐의 전립선 마이크로 해부 및 수술 거세에 대한 프로토콜을 설명합니다. 우리는 또한이 프로토콜에 의해 생성 된 대표적인 결과를 도시한다. 마지막으로, 우리는 장점과 이러한 프로토콜의 사용에 대해 설명합니다.
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이 논문에서
요약
초록
마우스 모델은 전립선암과 다른 질병을 연구하는 데 광범위하게 사용됩니다. 쥐는 전립선을 연구할 수 있는 훌륭한 모델이며 인간의 전립선 발달 및 질병 발견을 위한 대리물로 사용되어 왔습니다. 전립선 미세박리를 통해 다른 조직의 오염이 없는 상태에서 엽 특이적 전립선 해부학, 조직학 및 세포 특성을 일관되게 연구할 수 있습니다. 테스토스테론은 전립선 발달과 질병에 영향을 미칩니다. 안드로겐 박탈 요법은 전립선암 환자를 위한 일반적인 치료법이지만 많은 전립선 종양은 거세 저항성이 있습니다. 마우스 모델의 외과적 거세는 거세 저항성 및 전립선에 대한 호르몬 생물학의 다른 측면에 대한 연구를 가능하게 합니다. 이 절차는 테스토스테론 재도입 또는 전립선의 호르몬 재생과 결합할 수 있으며, 이는 전립선의 줄기 세포 계통을 연구하는 강력한 방법입니다. 전립선 미세 박리와 외과적 거세는 전립선 발달 및 질병에 대한 강력하고 일관된 연구를 위한 수많은 기회를 열어줍니다. 이 원고는 실험실 쥐의 전립선 미세 박리 및 외과적 거세에 대한 프로토콜을 설명합니다.
서론
전립선은 미국에서 남성 암의 가장 흔한 사이트입니다. 매년 전립선 암으로 진단됩니다 거의 220,000 남자, 약 27,000 남자는 질병 일에 굴복한다. 남성은 미국 1에서 전립선 암 진단 1 7 일생 위험이 있습니다. 양성 전립선 비대증 (BPH), 전립선의 연령과 관련된 비 암성 확대는 80 이상이 남성의 80 %에 영향을 미치는, 또한 광범위한 조건이다. 이와 같이, 전립선은 많은 연구의 초점이다.
마우스 모델은 3 전립선 질환을 연구하기 위해 널리 사용되어왔다. 전체 마우스 인간 전립선 선 (4)의 우수한 대표하지만, 유사성과 마우스 및 인간 전립선 해부학 생리학 (5) 사이의 차이가있다. 두 종에서 전립선은 요도를 둘러싸고, 방광의 기지에 위치해 있습니다. 인간의 전립선은 단일 보라입니다중앙, 전환, 주변 장치 및 전방 fibromuscular 기질 : 네 개의 구역으로 분할합니다. 전방, 복부 및 배면 측면 : 반대로 마우스 전립선 요도 주위의 상이한 위치에서 세 쌍의 돌출부로 구성된다. 세포 수준에서의 주된 차이점은 인체 내강의 셀 비율은 기저 세포가 1인지 : 1이지만 1 : 생쥐 6 4....
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프로토콜
이 프로토콜은 충족하고 존스 홉킨스 대학 기관 동물 관리 및 사용위원회가 설정 한 가이드 라인을 따른다.
1. 마우스 전립선을 마이크로 - 해부
- 이산화탄소 질식이나 기관 동물 관리 및 사용 지침서에 따라 다른 방법에 의해 승인 된 마우스를 안락사.
- 네 발 각을 통해 핀을 넣어 해부 보드에 부정사 위치에 마우스를 고정.
- 70 % 에탄올로 복부를 스프레이.
- 집게와 하복부의 피부를 잡고, 피부의 실수로 모든 장기를 절단하지 않도록주의 음경의 개방, 약 1cm의 전방을 복막 가위를 사용합니다.
- 복강을 노출, 하복부, 흉곽에 복부의 최대 양쪽에서 피부와 복막을 버려야.
- 방광 및 비뇨 기관을 식별하고 부드럽게 옆으로 지방과 다른 기관을 이동하여 그들을 노출.
- USING 포셉, 그립 요도 근처 기지에서 정관을하고, 그것을 멀리 눈물.
- 반대 정관으로 반복합니다.
- 동시에 방광과 복부 전립선 (방광의 기초 아래 약 1cm) 아래 요도를 통해 절단 가위를 사용하는 동안주의 깊게, 방광을 그립 집게를 사용하고 당기십시오.
주 : 방광이 인상되기 때문에, 전체 비뇨 기관 (함유 방광, 요도, 모든 전립선 돌출부 및 정낭의 단면....
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결과
여섯 전립선 로브는 전립선의 미세 절개를 통해 마우스 (그림 1)에서 제거되었습니다. 전체 비뇨 기관 (UGT)은 모든 전립선 로브 방광, 정낭, 요도 (도 1a)로 구성된다. 정관 요도에 부착하지만, 전립선 미세 해부 불필요하며, 따라서 요도 (도 1b 내지도 1c)를 절단하여 UGT의 제거 전에 분리 될 수있다. 비뇨 생식 기관이 함께 남아 한 번 복부 (그림 1D)에서 제거됩니다. 이 시점에서, 전립선은 UGT 로브 (도 1E)에 접근하기 위해 제거 될 필요가 지방 조직에 덮여 유지. 여섯 개의 돌출부 (복부, 전방 및 배면 측면 쌍) 방광 기지 요도 주변을 알 수있다. 순수 전립선 조직이어서 (도 1F) 상기 프로토콜 다음 제거 될 수있다. 이 로브 할 수있다추가 분석을 위해 적절한.......
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토론
전립선 마이크로 해부 엽 특정 실험과 마우스 전립선 분석 (그림 1)을 허용한다. 유전자 조작 마우스 모델에서 표현형은 다른 사람에 보이지 않는 하나의 엽에서 볼 수있다. 또한, 조직 학적 분석을 위해,이 프로토콜은 순수한 전립선 조직의 최대 양 단면에 존재하는 다른 비뇨 기관 조직없이 절편 염색 될 수 있다는 것을 보장한다. 마지막으로, 단일 세포 실험이 프로토콜은 거의 순수한 전립선 세포의 격리를 허용한다. 상피 세포 농축 키트는 더 기질 세포에서 전립선 세포를 정화 할 수 있습니다. 마이크로 해부에 제한은 해부 현미경을 통해 보는 동안 미세 집게를 사용하는 데 필요한 해부 현미경의 사용, 학습 곡선을 포함한다. 대안 적으로, 전립선 조직은 미세 해부 불필요한 만드는 UGT의 일부로 조직학을 위해 절단 될 수있다. 그러나, 전체 UGT를 절편의 단점은 것입니다다른 조직은 깨끗하지 만드는 부분에 존재한다. 또한, 단일 전립선 세포 집단을 생성하기위한 상기 돌출부는 오염을 방지하기 위해 UGT로부.......
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공개 사항
저자는 더 경쟁 재정적 이해 관계가 없음을 선언합니다.
감사의 글
이 원고의 수치 중 일부는 넉넉한 바트 O. 윌리엄스의 실험실에 의해 제공되었다. 저자는 U54CA143803, CA163124, CA093900, 및 CA143055는 국립 암 연구소 (National Cancer Institute)에 의해 부여 지원됩니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 수술 도구 | Roboz | 다양한 | |
| 포름알데히드 | 시그마 | F8775 | |
| OCT 매체 | VWR | 25608-930 | 드라이 아이스에 넣어 얼려야 하며, -80°C에서 보관해야 합니다; C |
| PBS | Life Technologies | 10010 | |
| Isoflurane | Johns Hopkins | 온라인 공급업체에서도 구매 | |
| Cautery Pen | Medline | ESCT002 | |
| Silk 봉합 | AD Surgical | M-S330R19 | |
| Surgical Wound | Clips Roboz | RS-9265 |
참고문헌
- Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer statistics. CA Cancer J Clin. 65 (1), 5-29 (2015).
- Roehrborn, C. G. Pathology of benign prostatic hyperplasia. Int J Impot Res. 20 (suppl 3), 11-18 (2008).
- Valkenburg, K. C., Williams, B. O.
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재인쇄 및 허가
