Возрастное увеличение жесткости хрусталика глаза связано с пресбиопией. Этот протокол описывает простой и экономичный метод измерения жесткости линз мыши. Хрусталик мыши, как и человеческие, с возрастом становятся жестче. Этот метод является точным и может быть адаптирован для линз более крупных животных.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Последовательное применение покровные стекла для оценки сжимающей Жесткость объектива мыши: Штамм и Морфометрические анализы
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Хрусталик глаза является прозрачным органом, который преломляет и фокусирует свет, чтобы сформировать четкое изображение на сетчатке. У людей, ресничные мышцы сокращаются, чтобы деформировать линзу, что приводит к увеличению оптической мощности на объективе, чтобы сосредоточиться на близлежащих объектах, процесс, известный как жилье. Возрастные изменения в жесткости линзы были связаны с пресбиопии, уменьшение способности объектива для размещения, и, соответственно, необходимость в очках для чтения. Даже если мышь линзы не учитывают или разрабатывать пресбиопии, мышиные модели может обеспечить неоценимый генетический инструмент для понимания патологии хрусталика, а также ускоренное старение наблюдается у мышей позволяет исследовать возрастных изменений в хрусталике. Этот протокол демонстрирует простой, точный и экономически эффективный метод определения жесткости объектива мыши, используя покровные стекла для применения последовательно увеличивая сжимающие нагрузки на объектив. Типичные данные подтверждают, что мыши линзы становятся более жесткими с возрастом, какчеловеческие линзы. Этот метод хорошо воспроизводим и потенциально могут быть расширены для механического тестирования линзы от более крупных животных.
Введение
Хрусталик — это прозрачный и аваскулярный орган в передней камере глаза, который отвечает за тонкую фокусировку света на сетчатке. Прозрачная базальная мембрана, называемая капсулой хрусталика, окружает массу удлиненных волоконных клеток, покрытых передним монослоем эпителиальных клеток1,2. Пожизненный рост хрусталика зависит от непрерывной пролиферации и дифференцировки эпителиальных клеток на экваторе хрусталика в новые волоконные клетки, которые концентрически добавляются к предыдущим поколениям волоконных клеток2. Со временем клетки волокон хрусталика подвергаются уплотнению, в результате чего в центре хрусталика образуется жесткий центр, на....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все процедуры на животных были проведены в соответствии с рекомендациями в Руководстве по уходу и использованию лабораторных животных Национальных институтов здравоохранения и в соответствии с утвержденным протоколом по уходу и использованию комитета Institutional животного происхождения в Скриппса научно-исследовательского института.
1. Объектив Вскрытие
- Эвтаназии мышей в соответствии с рекомендациями, содержащимися в Национальных Институтов Здоровья "Руководство по уходу и использованию лабораторных животных", а также утвержденных протоколов использования учреждением животных.
- Вылущивать глаз от мышей с использовани....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Измеряли жесткость и размеры 2-, 4- и 8-месячных линз мыши. Мыши были у всех животных дикого типа на чистом фоне C57BL6 штамма, полученного из Питомника TSRI животных, и каждая линза была загружена с 1 до 10 покровные. Осевые и экваториальные штаммы были рассчитаны в зависимости от приложенной нагрузки путем измерения осевого и экваториального диаметра линзы после добавления каждого покровное, а затем нормализации каждого изменения диаметра к соответствующему ненагруженном диаметра. Восе.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Есть несколько ключевых соображений при использовании этого метода для измерения жесткости объектива. Во-первых, покровные применяются к линзе при слегка косо (8 - 8,5 °) по отношению к нижней части камеры (Q). Это будет применяться очень небольшой составляющей нагрузки экваториально, а не в осевом направлении. Тем не менее, эта экваториальная нагрузка считается пренебрежимо малым , поскольку грех θ ≈ 0,1 19. Если этот способ приспособлен для больших объективов, угол покровные к нижней части камеры должны был.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не имеют ничего раскрывать.
Благодарности
Эта работа была поддержана грантом R01 EY017724 Национального института глаза (VMF) и грантом Национального института артрита, скелетно-мышечных и кожных заболеваний K99 AR066534 (DSG).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Прямые щипцы с тонким наконечником | Fine Scientific Tools | 11252-40 | |
| Ножницы для микродиссекции, прямой край | Fine Scientific Tools | 15000-00 | |
| Изогнутые щипцы | Fine Scientific Tools | 11272-40 | |
| Захватывающие щипцы | Hammacher | HSC 702-93 | Дополнительная |
| чашка для вскрытия | Fisher Scientific | 12565154 | |
| Чашка Петри 60 мм | Fisher Scientific | 0875713A | |
| 1x фосфатно-солевой буферный раствор (PBS) | Life Technologies | 14190 | |
| 18 x 18 мм стеклянные покровные стекла | Fisher Scientific | 12-542A | |
| Измерительная камера с углублениями для удержания линз | Изготовлено на заказ (см. <сильный>Рисунок 1) | ||
| Прямоугольное зеркало | Edmund Optics | 45-591 | |
| Источник света | Schott/Fostec | 8375 | |
| Микроскоп с подсветкой | Olympus | SZX-ILLD100 | С фототрубкой SZ-PT |
| Цифровой фотоаппарат | Nikon | Coolpix 990 |
Ссылки
- Lovicu, F. J., Robinson, M. L. Development of the ocular lens. , Cambridge University Press. (2004).
- Piatigorsky, J. Lens differentiation in vertebrates. A review of cellular and molecular features. Differentiation. 19 (3), 134-153 (1981).
- Glasser, A.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
