신생아 쥐의 심근 경색, 심장 재생의 모델

요약

이 프로토콜은 출생 후 1일차 마우스의 좌심실에서 심근경색의 외과적 유도에 의한 재현성이 높은 심장 재생 모델을 설명합니다. 이 방법은 저체온 마취 유도와 좌측 전방 하행 관상 동맥 결찰을 포함합니다.

초록

관상 동맥 결찰에 의해 유도 된 심근 경색 심장 수선과 재생의 기전을 연구하고 치료제에 대한 새로운 타겟을 정의하는 수단으로 여러 동물 모델에서 이용되고있다. 수십 년 동안, 전체 심장 재생의 모델은 양서류와 물고기에 존재하지만, 포유 동물 상대는 사용할 수 없습니다. 마우스는 재생 기능을 가지고있는 동안 윈도우 생후 최근 발견은 심장 재생의 포유 동물 모델의 확립하게되었다. 신생아 마우스에서 포유류의 심장 재생의 수술 모델이 여기에 표시됩니다. 간단히, 출생 후 하루 1 (P1) 마우스는 이소 플루 란으로 마취 및 저체온증을 유도하는 얼음 패드에 배치됩니다. 흉부가 개방되어, 관상 동맥 (LAD)를 좌전 하행이 가시화되면, 봉합은 좌심실의 심근 허혈을 가하기 위해 LAD 주위에 배치된다. 수술은 10 ~ 15 분 소요됩니다. 관상 동맥된다 시각화정확한 봉합 배치 및 재현성이 매우 중요. 심근 경색 및 심장 기능 부전은 각각 트리 페닐 테트라 졸륨 클로라이드 (TTC) 염색 및 심장 초음파에 의해 확인된다. 전체 재생 이십일일 후 심근 경색은 조직 학적으로 확인됩니다. 이 프로토콜은 심근 경색 후 포유류 심장 재생 메커니즘을 규명하는 도구로 이용 될 수있다.

서론

심근 경색 (MI)는 전 세계적으로 사망의 주요 원인이며, 심부전 케이스 ^(1)의 약 1/3을 담당 남아있다. 경피적 중재 및 혈전 용해제의 사용의 지속적인 최적화의 출현은 MI, 심근 사망과 심근 수축성 손실 다음 재관류 증가되었지만, 그럼에도 불구하고 일어난다. 또한 후보자하지 않거나이 개입에서 혜택을 볼 수 없습니다 "노 옵션"환자의 다수가 남아있다. 이 환자들은 경색 치료의 메커니즘으로 형성과 해로운 심실 리모델링 흉터로 이어지는 사용하지 허혈가 계속 발생. 이러한 과정은 결국 예후가 안지오텐신 전환 효소 (ACE) 억제제 및 베타 차단제와 최적의 약물에도 불구하고 여전히 좋지 관리되는 심부전을 초래한다. 불행하게도, 심각하게 손상 좌심실 기능을 가진 환자의 1 년 사망률은 여전히​​ 남아있다26 ^%이 높은. 심장 이식은 심부전 환자의 최종 치료 옵션입니다. 그러나, 심장 이식에 대한 제한 기증자 풀이 대부분의 환자에 대한 실행 가능한 옵션하지 않습니다. 따라서, 심근 손상을 복구하는 신규 치료제의 발견은 심장 질환의 문제를 해결하는 가장 중요한 남아있다. 심장 손상의 신뢰할 수있는 동물 모델 따라서이 과정의 중요한 구성 요소로 필요합니다.

전통적인 교리는 성인 심근 세포가 분할 또는 손상된 ....

프로토콜

C57BL / 6, CD-1 IG-S 쥐의 번식 쌍은 찰스 강에서 구입 하였다. 본 연구에 사용 된 동물은 동물 관리에있는 캐나다 협의회의 지침에 따라 처리하고, 연구 프로토콜 웨스턴 대학, 런던, 캐나다에서 동물 사용 분과위원회에 의해 승인되었다.

1. 동물 관리

1. 출산이 완료되고 새끼가 처음 모유 공급 몇 시간 동안 자신의 어머니가되었습니다 후, CD-1 수양 어머니와 함께 다른 케이지에 배치합니다. CD-1의 어머니는 강한 육성 본능을 가진 조용한 표현형을 표시하고 부상당한 새끼 ^(15)를 잠식하는 낮은 경향이있다.

2. 수술

1. 밀폐 된 이소 플루 란 챔버에 강아지를 배치하여 마취를 유도 (약 100 % V / V의 이소 플루 란의 500 μL는 ^3cm 1,300 실을 발산 할 수). 이동 (약 30 초) 중단 될 때까지 실에서 마우스를 유지합니다.
2. 미주리 제거이소 플루 란 챔버에서 사용하고 젖은 얼음에 마우스를 배치하여 저체온 마취를 유도한다. 동상을 방지하기 위해, 멸균 수술 장갑 내부에 얼음을 배치 장갑 내에서 마우스를 싸서 얼음 장갑을 포함 또는 멸균 젖은 거즈에 마우스를 ....

결과

P1에서의 심근 경색 절차는 10에서 완료 할 수 있습니다 - 15 분 7.8 % (5 (64)의 밖으로 새끼)의 사망률이 있습니다. 수술 후, 마우스는 향후 5 내에서 저체온 마취에서 회복 - 20 분 (복구 시간은 체온 외과 의사의 마취 및 속도 동안 도달에 따라 다름). (비 - 재생성 심근과 비교) P7 새끼를 사용하는 경우, 냉각의 장기간이 무기력에 도달 할 필요가있다. P7 새끼는 훨씬 더 큰이며, 26.9 % (14 52 중 새끼)의 훨씬 더 높은 사망률의 결과로 심장 부상과 저체온증 모두 복구 많은 어려움이있다.

이전의 연구 결과는 ^{19 일} (8 ° C ~ 15 ° C 사이)에 가까운 10 ° C에서 저체온.......

토론

여기에 보여 수술 LAD 결찰 신생아 쥐에서 MI를 생산하는 신뢰할 수있는 방법이다. 이 모델은 포유류의 심장 재생을 연구하는있는 재현 모델과 연구자를 제공합니다. 관상 혈관의 시각화는 정확한 봉합 배치를 보장하고, 따라서 재현성을 보장하는이 방법의 핵심 구성 요소입니다. 성인 쥐 poikilothermic 기능을 갖고 있지 않지만, 체온 신생아 마우스 대사율 밀접 주위 온도와 관련된다. 또한, 신생아 쥐의 작은 크기는 표면 냉각에 의한 저체온 유도에 이상적이다. 수술 마우스 체온의 타이밍은이 절차를 복제 정확성에 매우 중요하며, 따라서주의 깊게 모니터링되어야한다. 결찰은 가능한 한 빨리 무기력에 도달 한 후 수술 성공을 확인, 심근 후 결찰의 창백 시각화 할 수있는 기회를 제공합니다.

무있다MI 유도을 확인하는 데 사용할 수 있습니다 ltiple 방법. 다음은 TTC 염색, 심장 초음파 검사 및 조직 학적 분석을 포함한다. TTC 염색, 재현성 및 신뢰성, 쉽게 높은 처리량.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
8-0 나일론 봉합	미세 수술 기구	8-0 나일론
11-0 나일론 봉합	Shanghai Pudong Medical Products Co Ltd	H1101
미세 가위	정밀 과학 도구	14058-09
소형 집게	미세 과학 도구	11063-07
마이크로 바늘 홀더	미세 과학 도구	12060-02
Zeiss Opmi 6s/S3 현미경	Zeiss	300002
Isoflurane	Baxter	CA2L9100
Isoflurane 챔버	Feng 실험실
비드 살균기	정밀 과학 도구	18000-45
2,3,5-트리페닐테트라올륨 클로라이드(TTC)	시그마	T8877
실체현미경 SteREO 발견. V8	Zeiss	435400
AxioVision 8.0	Zeiss
Axiocam Icc5	Zeiss	426554
열 패드	태양 광선	731A0-CN
멸균 장갑	VWR	414004-430
거즈 스폰지	Ducare	90212
얼음
초음파 이미징 시스템, Vevo2100	Visual Sonics	VEVO2100
초음파 변환기, 40MHz	Visual Sonics	MS400

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