الانطباع علم الخلايا من منطقة ممسحة غطاء

ملخص

قمنا بجمع الخلايا وتلطيخها وتصويرها من ملتحمة هامش الجفن الداخلي للبشر. من خلال توصيف مورفولوجيا الخلية ونشاط التمثيل الغذائي ، قد تعزز هذه الطريقة فهمنا لجفاف العين والدور الذي قد يلعبه الاحتكاك بين أسطح العين في إدراك الانزعاج العيني.

الملخص

يوجد عدد قليل من التقارير حول التشريح الخلوي لمنطقة ممسحة الجفن (LW) في الجفن الداخلي وتقرير واحد فقط يستخدم الأساليب الخلوية. تم وصف تحسين طريقة جمع الخلايا وتلطيخها وتصويرها من منطقة LW باستخدام علم خلايا الانطباع (IC) في هذه الدراسة. يتم جمع الخلايا من السطح الداخلي للجفن العلوي للبشر باستخدام أغشية بولي تترافلورو إيثيلين محبة للماء (PTFE) ، وتلطيخها بالأصباغ الخلوية للكشف عن وجود خلايا الكأس والميوسين ونواة الخلايا ودرجات مختلفة من التقرن المسبق وشبه القرني. تظهر الأصباغ الكيميائية المناعية نشاط إسترازاز الخلايا وأغشية الخلايا المعرضة للخطر باستخدام مجهر ليزر المسح الضوئي متحد البؤر. يتم التقاط ما يصل إلى 100 صورة رقمية مجهرية لكل عينة وخياطتها في صورة عالية الدقة وواسعة النطاق لامتداد IC بأكمله. نظهر حساسية أعلى ل IC مما تم الإبلاغ عنه من قبل ، وهو مناسب لتحديد الأشكال الخلوية والنشاط الأيضي في منطقة LW. على حد علمنا ، هذه هي المرة الأولى التي يتم فيها استخدام هذا الاختيار من الأصباغ الفلورية لتصوير أغشية LW IC. سيكون هذا البروتوكول فعالا في الدراسات المستقبلية للكشف عن تفاصيل غير موثقة لمنطقة LW ، مثل تقييم الخصائص الخلوية لمرتدي العدسات اللاصقة أو المرضى الذين يعانون من جفاف العين أو اعتلال ظهارة ممسحة الجفن.

المقدمة

الجفن العلوي البشري ينفذ حوالي 10،000 يومض كل يوم ^1، مع مجرد 1 - المنطقة الملتحمة 2 مم الضيقة معارضة العالم العين. بسبب حركة المسح له خلال طرفة، وقد أطلق على هذا الجزء من هامش غطاء "غطاء ممسحة" المنطقة ^2. ومن المفترض أن يتم زيادة الاحتكاك في هذه المنطقة خلال الوميض المعتاد، وذلك بسبب الغطاء محو أنحاء العالم. هذا قد لعب دورا هاما في راحة العين. يضعون العدسات اللاصقة في تجربة معينة عدم الراحة في العين وهذا هو واحد من الأسباب الرئيسية لوقف عدسة ارتداء ^3. عندما يتم وضع العدسات اللاصقة على العين، وقد تبين أن معامل الاحتكاك بين المواد العدسة وسطح العين لتغيير ^4. هناك أدلة تشير إلى أن أعراض ....

البروتوكول

الأخلاق بيان: قبل جمع الخلايا من المواد البشرية، عن علم ويجب الحصول على موافقة الأخلاق.

1. إعداد وصمة عار

ملاحظة: تعد وصمة عار في يوم من التجربة.

1. إضافة 5 ميكرولتر إيثيديوم (أو 4 ميكرومتر) و 5 ميكرولتر Calcein AM (أو 4 ميكرومتر) إلى 2.5 مل الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) في 15 مل أنبوب الطرد المركزي. مزج. التفاف في رقائق الألومنيوم لحمايتها من ضوء وتخزينها في RT حتى الاستخدام.

النتائج

غشاء خلية ثقافة امتدت على مدى حامل البلاستيك هو أداة ملائمة لجمع يده من الخلايا الظهارية من الملتحمة غطاء ممسحة. هذا الأسلوب يلغي الحاجة إلى أدوات إضافية معقمة تستخدم عادة لإعداد والتعامل مع الأغشية IC الشكل 1 يصور IC للمنطقة ممسحة غطاء باستخدام إدراج الثقافة الخلية. نحن الأمثل بروتوكولين تلطيخ المختلفة التي تكمل بعضها البعض لتوصيف الخلايا الظهارية من منطقة ممسحة غطاء بطريقة الرواية. الأصباغ immunocytochemical الفلورسنت تكشف النشاط.......

المناقشة

يتم تنفيذ الخلايا الانطباع عادة على الملتحمة الصلبية، وذلك باستخدام الأغشية استر السليلوز مختلطة. يتم قطع العينات إلى حجم من صفائح المواد السائبة، تعقيم، تطبيق وإزالتها من على سطح الملتحمة باستخدام ملقط. باستخدام نفس المواد الغشاء، تم تصميم جهاز IC التي تسيطر عليها مكبس مؤخرا لتتناسب مع هندسة سطح الملتحمة الصلبية، والحفاظ على ضغط ثابت بين تطبيقات ^13. هذه الأساليب غير فعالة للضيق، غطاء منحني بارز ممسحة المنطقة (انظر الشكل 1). بالإضافة إلى ذلك، السليلوز م.......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
ألسيان بلو ، 1٪ في 3٪ حمض الخليك	سيجما	B8438-250ML
هيماتوكسيلين ، جيل 1	سيجما	GHS116-500 مل
صبغة بابانيكولاو ، OG-6	Sigma	HT40116-500 مل
صبغة Papanicolaou ، EA	Sigma	HT40232-1L
Live / Dead Live / Dead Toleranceity Kit	Life Technologies	L-3224	يحتوي على أحجار الإيثيديوم homodimer-1 والكالسيين AM
الألكايين (0.5٪ بروباراكايين هيدروكلوريد)	Alcon
Millicell Cell Culture Insert, 12 & nbsp; مم ، PTFE محب للماء ، 0.4 & nbsp ؛ ومايكرو. م	EMD Millipore	PICM01250
أطباق زجاجية ذات قاع زجاجي مقاس 35 مم	MatTek Corporation	P35G-0-20-C