Abstract
Извлечение отолитам (ушные кости) из рыбы, которые имеют очень толстые черепа может занять много трудной и очень много времени. Обычная практика делает поперечный вертикальный разрез на верхней части черепа с рукой или электрической пилы может привести к повреждению отолитные, если не выполнена правильно. Осетровые (осетровые) являются одной семьи , в частности, имеют очень большой и толстый череп. Новый лабораторный метод в полость мозга с брюшной стороны рыбы разоблачить отолитам было легче, чем другие отолитовых методов экстракции, найденных в литературе. Методы, рассмотренные в литературе предназначены для поля и являются более эффективными при обработке большого количества рыбы быстро. Тем не менее, этот новый метод был разработан, чтобы быть более подходящим для лабораторных условиях, когда время не прижимает и успешное извлечение из каждого образца имеет решающее значение. Успех поиска и удаления отолитам с помощью этой техники очень высока и не поставить под угрозу SСТРУКТУРА каким-либо образом. Этот альтернативный метод применим к другим подобным видов рыб для извлечения отолитов.
Introduction
Осетр (осетровые) населения по всему миру сокращается на протяжении более ста лет из - за воздействий , включая потери среды обитания, фрагментации населения и чрезмерной эксплуатации таким образом, что многие группы населения защищены государственными и федеральными законами 1,2. Органов управления на всей территории США и мира определили осетра в качестве целевых видов для восстановления и восстановления 1. Характеристики населения (рост, набор, диета) большинства популяций осетровых рыб были изучены , чтобы лучше понять основные биологии и истории жизни характеристики 1. Из охраняемого статуса большинства популяций осетровых рыб, оценка возраста трудно в небольших популяциях, находящихся под угрозой, где нет никаких оснований не жертва или вреда физическим лицам.
Извлечение костных структур с целью оценки возраста и анализа роста была общая методика 3 .The Использование секций плавника лучей , чтобы определить возраст Sturgeна стала практическим несмертельны метод, но проверка техники была ограничена и возраст может быть очень трудно расшифровать у пожилых людей (> 15 лет) 4. Исследователи , оценивающие использование нескольких костных структур в осетра для их использования при проверке возраста в Персидском заливе осетра (Acipenser oxyrinchus desoti) 5, атлантический осетр (A. O. Oxyrinchus) 6, белуга (А. transmontanus) 7, и озеро осетра (А. fluvescens) 8 пришел к выводу , что первый луч маргинальной Грудной плавник при условии , что наиболее точный возраст , но пришли к выводу , это инвазивные процедуры , чтобы быть вредным для более крупных особей. В настоящее время существует разработка с использованием отолитов показателей формы различать североамериканских видов осетровых рыб с очень высокой скоростью успеха 9. Более подробная информация о процессе удаления отолит с дорсальной поперечным разрезом у основания черепа является общим отолитовая экстраМетод фикция встречается по всей литературе и ясно подробно на Секор и др. (1991) 10. Тем не менее, этот метод трудно реализовать на осетровых рыб, которые имеют очень толстые черепа с отолитам, которые являются малыми и деликатным и будет иметь тенденцию ломаться. Дальнейший обзор литературы не показывает никакой другой подробную методологию процесса отолитового удаления для осетровых рыб. Целью данной работы было подробно альтернативный метод извлечения отолитам из осетрины, войдя в полость мозга с брюшной стороны.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Важное примечание: Из-за охранный статус всех видов осетровых рыб в Соединенных Штатах, позволяет приобретать и обрабатывать рыбы были получены до лабораторных процедур. Все образцы были приобретены у источников рыбоводных послеубойную в силу естественных причин и утилизировать следующие стандартные процедуры.
1. Изготовление образцов
- Перед тем как любые надрезы лежал осетра тушу на бок и с помощью измерительной ленты , чтобы измерить общую длину от морды до кончика хвоста до с точностью до 1 мм. (Рисунок 1А)
- Взвесьте осетра туши на тарированный шкале с точностью до 1 г. Оценка туши для любых внешних тегов или меток и записи.
2. отолитам Extraction
- Выполнить вертикальный разрез с большим филе ножом между основанием черепа и первым спинным щитком через тело , чтобы отделить голову от тела (Фиг.1В). После удаления головы, Tuр - н головы , так что рот лицевой стороной вверх (рис 1C).
- Удалите мягкие ткани полости рта и жабры, используя филе нож , чтобы разрезать вдоль вентральной стороны черепа (рис 1D). Сделайте надрез с электрической пилой от кончика морды до основания черепа полностью рассекают головку (рис 1E). Отделите две половинки вручную выставить полость мозга (рис 2A).
- Удаляют мозгового вещества (красный прямоугольник слева) с щипцами для просмотра полукружных каналов (красный прямоугольник справа) в полости мозга (рис 2В).
- Удалить полукруглый хрящ канал из полости мозга с пинцетом (рис 2С). Тщательно прокол полукруглый хрящ канал с кончиком пинцета и удалить отолит (рисунок 2D). Удалите отолит (жесткий костлявые структуры внутри хряща) пинцетом из полукруглого канала хряща (рис 2E)
- Повторите шаги 2.3 - 2.4, чтобы удалить отолит из другой половины черепа.
- Dip отолиты в 92% этаноле в течение 5 секунд, чтобы удалить хрящ. Место Отолиты в открытом сцинтилляционный флакон 25 мл, чтобы высохнуть в течение 24 часов.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Размер взрослых осетровых рыб по всему миру значительно варьируется, но расположение отолитов соответствует. Было обнаружено , что использование острым ножом филе , чтобы удалить мягкие ткани полости рта легко показано на рис 1D. Электрическая пила кости предпочтительным инструментом для боковой разрез , чтобы обнажить полость мозга на рисунке 1E. Тем не менее, внимание к рассекает средней линии черепа требуется иначе Отолиты может быть подавлено во время этого процесса. Если этот процесс выполняется правильно , то полость мозга будет подвергаться воздействию равномерно без повреждения отолитах , как показано на рисунке 2А. Дело в мозг легко удаляется с помощью щипцов , как на фигуре 2В , и нахождение полукруглый хрящ канала , который содержит отолитные легко найти у основания полости мозга , как показано на фиг.2С. Хрящ находится в полукруглом канале является EASILY удалены из отолитом с парой щипцов , как показано на рис 2D.
Эта процедура успешно показывает удаление осетровой отолитом и является предварительным шагом в более количественного анализа истории жизни рыбы. Результат успех можно измерить путем удаления отолитом, не нарушая структуру. Определение возраста и роста ставок являются два показателя, которые могут быть оценены с использованием удаленных отолитам. Анализ формы для видовой дифференциации является еще измеримые метрики, которые могут быть разработаны с отолитах.
Рисунок 1. Размещение Sturgeon Carcass для отолитов удаления. (A) осетровая туша Боковой Вид для измерения и взвешивания, (B) Вертикальная Разрез Отделить Sturgeon голову от Бо ау, (C) Флип Head , чтобы посмотреть рот и вентральной стороне головы, (D) мягких тканей удаляется , чтобы разоблачить вентральной стороне черепа, (E) Боковые Разрез от вершины рыла до основания черепа Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы увидеть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 2. Внутренний Исследование мозга полости для удаления Отолиты. (A) Brain Полость Exposed после того, как головка разлуке, (Б) мозговое вещество Удалены к Expose полукруглых каналов, (C) Полукруглый канал хрящей, (D) отолитам осмотрено и Удалены из полукруглых каналов хрящей, (E) тупорылый осётр отолитом54316 / 54316fig2large.jpg "целевых =" _blank "> Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Обзор альтернативного способа извлечения отолитам из осетрины тушек был подробно описан. Важно отметить, что особое внимание необходимо уделить боковой размещения надрез по средней линии черепа, чтобы рассекают череп равномерно, чтобы гарантировать никакого вреда отолитах во время диссекции. Если надрез не достаточно глубоко, чтобы полностью рассекают череп будет очень трудно раскрыть полость мозга, где расположение отолитах четко виден. С опытом, общая методика является относительно простым и приводит к высоким процентом отолитах были обнаружены нетронутыми. Этот новый метод дает исследований альтернативный способ извлечения отолитам для целей, отличных осетровых рыб, которые могут быть трудно с использованием стандартных методов экстракции отолитов видов.
Ограничения этого метода являются применимость к лабораторной установке не для использования в полевых условиях. Время, необходимое для подготовки каркаса не способствует образцов, собранныхв области своевременно. Еще одной проблемой является использование на осетровых видов рыб, которые, как правило, находящихся под защитой государства или федерального закона из-за снижения численности населения.
Очень трудно получить разрешение на проведение такого рода оценки за счет ущерба для лиц, которые необходимы, чтобы держать население в живых. Однако, когда мертвые образцы доступны через естественных причин этот метод обеспечивает удобный способ собрать больше информации, чем будет доступна в противном случае.
Важно отметить значимость этого метода, чтобы успешно удалить отолитам из осетрины, используя этот альтернативный метод. Существующие методы удаления отолитам из спинной части головы все еще полезны и полезны, но не применимо для осетровых рыб. Используя эту новую технику, чтобы подвергать полость мозга также дает доступ и применимость к другим областям нервной функции и морфологии мозга. Этот новый метод может быть полезнымиспользовать на других видов рыб с очень толстыми стенками черепа или где имеется ограниченное количество рыбы, чтобы использовать для отолитового добычи.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Особая благодарность St. Regis Mohawk экологического отдела, Велака Национальный Рыбный питомник рыбы и исследовательское подразделение службы дикой природы, Университет Южного Иллинойса, США Рыба и рыбохозяйственный центр северо-востоке Службы охраны дикой природы, Стерлинг Икра, Калифорнийский университет в Дэвисе, Garrison Дам Национальный Рыба инкубатором, мишки Bluff Национальные рыбные инкубатором и США служба рыбы и дичи Панама Сити Офис рыболовства ресурсов для их помощи подачи осетра для данного проекта. Эта статья Вклад 2013 из USGS Научный центр Great Lakes.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Measuring Board | Metric meter stick is preferred | ||
| Weighing scale | |||
| Filleting Knife | |||
| Scalpel | |||
| Forceps | |||
| Sample vials | 25 ml scintillation vials work well |
References
- Auer, N. A. Conservation. Sturgeons and Paddlefish of North America. LeBreton, G. T. O., Beamish, F. W. H., McKinley, R. S. 27, Kluwer Academic Publishers. 252-276 (2004).
- Sturgeon Specialists Group, sturgeon conservation. IUCN (International Union for the Conservation of Nature). , Source: www.iucn.org (2008).
- Campana, S. E. Accuracy, precision and quality control in age determination, including a review of the use and abuse of age validation methods). Journal of Fish Biology. 59, 197-242 (2001).
- Bruch, R. M., Campana, S. E., Davis-Foust, S. L., Hansen, M. J., Janssen, J. Lake Sturgeon age validation using bomb radiocarbon and known-age fish. Transactions of the American Fisheries Society. 138, 361-372 (2009).
- Baremore, I. E., Rosati, J. D. A validated, minimally deleterious method for ageing sturgeon. Fishery Bulletin. 112, 274-282 (2014).
- Stevensen, J. T., Secor, D. H. Age determination and growth of Hudson River Atlantic sturgeon, Acipenser oxyrhynchus. Fishery Bulletin. 97, 153-166 (1999).
- Brennan, J. S., Cailliet, G. M. Comparative age-determination techniques for white sturgeon in California. Transactions of the American Fishery Society. 118, 296-310 (1989).
- Rossiter, A., Noakes, D. L. G., Beamish, F. W. H. Validation of age estimation for the lake sturgeon. Transactions of the American Fisheries Society. 124, 777-781 (1995).
- Chalupnicki, M. A., Dittman, D. E. North American Sturgeon Otolith Morphology. Copeia. , 260-266 (2016).
- Secor, D. H., Dean, J. M., Laban, E. H. Manual for otolith removal and preparation for microstructural examination. , Barach Press. Columbia, South Carolina. (1991).
