여기서는 Willis의 마우스 서클을 분리하기 위한 재현 가능한 프로토콜을 설명합니다.
이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.
이 논문에서
요약
초록
윌리스 (COW)의 대뇌 동맥 원 (circulus 동맥 뇌종양) 또는 원은 뇌와 주변 구조에 혈액을 공급하는 광학 chiasma 및 시상 하부를 둘러싸는 순환 문합이다. 이는 대뇌 아밀로이드 혈관 병증 (CAA) -associated vasculopathies, 두개 내 죽상 경화증 및 두개 뇌 동맥류 등 여러 질병에 관여하고있다. 자신의 예방을위한 새로운 약물 표적의 식별을 위해 이러한 질병의 기초가되는 분자 메커니즘의 연구는 동물 모델을 필요로한다. 다른 사람들이 여기에 설명 된 CoW.The 방법 임의의 마우스 계통의 소 분리에 적합하며 (유전자, 단백질 생산의 발현을 선별하기위한 상당한 잠재력을 가지고 포함하는 뇌 - 혈관의 분리를 포함하는 반면 이러한 모델 중 일부는, 형질 전환 될 수있다 번역 후 단백질 수정 등 secretome 분석) 마우스 cerebro-의 대형 선박에 대한 연구혈관. 또한 절연 마우스 후각 동맥 위해 개발 기관 욕 시스템을 적용하여, 생체 외 연구에 사용될 수있다.
서론
또한 윌리스 (소), Willisor 윌리스 다각형의 루프의 원형으로 알려진 대뇌 동맥 원 (circulus 동맥 뇌종양은)) 먼저 그것은 시신경 chiasma 수 있습니다 시상 하부의 주위에있는 순환 문합 인 1664 년 토마스 윌리스에 의해 설명되었다 뇌와 주변 구조에 혈액을 공급하는 중앙 허브로 간주 될 수있다. 혈액 경동맥 및 척추 동맥을 통해 이러한 구성에 진입하며 내부 중간 및 후방 뇌동맥 통해 원 밖으로 흐른다. 이러한 동맥의 각각은 원호의 양측에 지점을 좌우되었다. 완전한 원을 동맥을 통신하는 기저, 포스트 소통하고, 전방 (그림 1과 그림 2). 유출 동맥 중 어느 하나에 장애가 혈류 위험함으로써 충분한 혈액이 (B)에 공급되도록 보장 경동맥 및 뇌동맥으로부터 원 입력 피 병합하여 최소화비. 이 구조는 내부 경동맥 폐색 심각한 질병에 부수적 혈류의 주요 경로로서 기능한다.
뇌 혈관 질환의 여러 유형의 소에서 자신의 기원을 가지고있다. 가장 일반적으로는 1, 2, 3이 질환으로 인한 혈관 확장에 관류 저하로 이어질 수있다. 대뇌 아밀로이드 혈관 병증 (CAA) -associated vas....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
프로토콜
모든 절차가 동물 실험에 대한 로컬 윤리위원회 (일드 프랑스 - 파리 -위원회 승인 4270)의 승인, 관리 및 실험 동물의 사용을위한 유럽 공동체 표준에 따라 수행 하였다.
1. 마취
- 펜토 바르 비탈을 치사량을 주입 성인 마우스에 복강 내 (27 게이지 바늘 및 주사기를 1ml) (1 밀리그램 / 10g 체중까지) 수술 전.
2. 선박 관류
참고 : 혈관 재관류 동안 눈에 수의사 연고를 적용 할 필요가 없습니다. 이 절차는 (5-10 분) 신속하고 동물의 죽음에 끝납니다. 발가락 핀치와 응답의 부족을 확인합니다.
- 홍채 가위를 사용하여, 바로 흉곽 아래, 복벽과 복막에 약 4cm 길이 절개를합니다.
- 연속 주 후 진동판에 작은 절개 (밀리미터 길이)를 확인하고전자 흉곽의 전체 길이를 따라 진동판의 절개은 흉강을 노출.
- 멀리 흉골을 들어 올리고 지혈과 흉골의 끝 부분을 고정; 목에 지혈을 배치합니다. 조심스럽게 심장으로 흉골을 연결하는 지방 조직을 잘라.
- 마음의 꼭대기에 좌심실을 통해 15 게이지 관류 바늘을 전달합니다.
- ....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
결과
PBS를 관류 마우스를 살해하고 프로토콜의 3.2 절에 설명 된대로 소는 격리됩니다. 해부가 제대로 수행 될 때, 소는 한 조각에서 와야 인해 혈관에 잔류 혈액의 부재로 약간 투명해야한다.
그림 2 : 분리 후 마우스 소. 10 cm 페트리 접시에서 암소의 (A) 개요. (B) 암소의 여러 가지의 세부 사항. MCA는 중간 대뇌 동맥를 들어, ACA 기저 동맥에 대한 전방 대뇌 동맥, BA를 들어, PCA 후부 대뇌 동맥과 우수한 뇌 동맥에 대한 SCA에 대해.
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
토론
우리는 윌리스의 원의 분리 여기를 재현 프로토콜을 설명합니다. 소를 포함하는 가장 일반적인 뇌 혈관 질환은 동맥 혈관의 벽에 영향을 모두 CAA 관련 vasculopathies, 두개 내 동맥 경화 및 두개 내 동맥류이다. 위험 인자로 잘 알려져 있지만, 이들 뇌 질환의 분자 기전은 잘 알려져 있지 남아 그 발생을 예측하기위한 특정한 생물학적 마커는 부족하다. 분자 변화를 거시적 인 관찰을 연결하는 형질 전환 마우스에서 소를 분리하는 방법에 상당한 관심이있다. 예를 들어, (호사카 등. (8)에 의해 설명 됨)는 특정 유전자가 녹아웃 된 마우스 모델에서 일관된 동맥류 유도 및 젖소를 분석함으로써, 치료 유전자에 의해 코딩되는 단백질을 대상 여부를 판단 할 수 있어야한다있을 두개 내 동맥류 및 / 또는 지주막 하 출혈을 방지한다. Obviou교활한,이 방법은 AD의 다양한 형질 전환 마우스 모델에서 CAA 관련 vasculopathies의 진행에서 특정 약물의 효과를 분석하기 위해 사용될 수있.......
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
공개 사항
저자는 공개할 것이 없습니다.
감사의 글
이 작품은 파리 VI 대학과 피에르 파브르 혁신 기금에 의해 지원되었다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 둘베코' s 인산염 완충 식염 | 수 시그마-알드리치 | D8537 | |
| Dumont #55 펜치 | 파인 사이언스 도구 | 11295-51 | |
| 경화 파인 아이리스 가위 | Fine Science Tools | 14090-11 | |
| 가위 - 스트레이트 / 샤프 / 샤프 16.5 cm | 파인 사이언스 도구 | 14002-16 | |
| Dumont #7b 펜치 | Fine Science Tools | 11270-20 | |
| 입체 줌 현미경 | Nikon | SMZ745T | |
| CellBIND 표면 60mm 배양 접시 | Corning | #3295 | |
| 연동 펌프 - MINIPULS 3 | Gilson | M312 | |
| Pentobarbital Sodique | Ceva Santé Animale | FR/V/2770465 1992 |
참고문헌
- Beckmann, N., et al. Age-dependent cerebrovascular abnormalities and blood flow disturbances in APP23 mice modeling Alzheimer's disease. J Neurosci. 23 (24), 8453-8459 (2003).
- Sadasivan, C., Fiorella, D. J., Woo, H. H., Lieber, B. B.
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재인쇄 및 허가
