미각은 유익한 물질에 대한 끌림과 독성 물질의 회피를 용이하게 하는 중요한 감각 과정입니다. 이 프로토콜은 주어진 화합물에 대한 초파리 미각 선호도를 결정하기 위한 간단한 섭취 분석을 설명합니다.
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이 논문에서
요약
초록
환경에 대한 후각과 미각적 인식은 동물의 생존에 필수적입니다. 이러한 케모센스의 가장 분명한 응용 분야는 좋은 식품 공급원과 잠재적으로 위험한 식품 공급원을 구별할 수 있는 것입니다. Gustation은 뉴런 표면에서 발현되는 미각 수용체를 통해 신호를 보낼 수 있는 화합물과의 물리적 접촉을 필요로 합니다. 곤충의 경우 이러한 미각 뉴런이 동물의 몸 전체에 위치할 수 있어 미각이 다양한 행동에서 중요한 역할을 할 수 있습니다. 곤충은 일반적으로 설탕이 함유된 화합물을 선호하지만 쓴 맛이 나는 것으로 간주되는 화합물은 피합니다. 미각의 기본적인 생물학적 중요성을 감안할 때, 이 감각 양식의 기저에 있는 분자 메커니즘을 이해하는 데 지대한 관심이 있습니다. 우리는 주어진 맛 화합물에 대한 동물의 선호도를 반영하는 성인 Drosophila 맛 분석을 설명합니다. 이 분석은 원하는 용해성 화합물에 대한 미각 선호도를 조사하기 위해 모든 유전적 배경을 가진 동물에 적용할 수 있습니다.
서론
동물 불리한 조건에서 떨어져 유리한 조건을 구별하는 chemosensation를 사용합니다. 이 인식은, 최고의 음식 소스를 결정하는 독성 물질을 피하거나 가장 짝짓기 파트너 일을 결정하는 등의 것들에 대한 중요 할 수 있습니다. 후각의 감각과 미각 감각 : Chemosensation은 종종 두 개의 감각 구성 요소로 나누어 져 있습니다. 이러한 감각의 주요 구별되는 특징은 후각 (냄새) 맛보기 (맛) 비 휘발성 기판과 물리적 접촉을 필요로하는 동안 주위의 가스 화학 환경을 샘플링하는 데 사용되는 것입니다. 두 감각 양식을 처리하고 적절한 매력적인 또는 척력이 동작을 생성하기 위해 뇌에서 디코딩되는 신경 반응을 자극한다. 이 감각은 동물의 생존을위한 따라서 중요합니다.
초파리 비행 열매는 이해에 사용하기 위해 인기가 성장을 계속하고 모델 생물이다곤충은 냄새와 맛을 감지하는 방법을 보내고. 초파리 때문에, 분자 세포, 행동 경로의 해부에 사용할 유전 도구의 재산에 다른 모델 시스템에 비해 엄청난 장점을 제공한다. 지난 15 년 동안 작업은 특정 세포 정체성, 신경 수용체를 특성화하고, 냄새와 맛 모두에 관여하는 메커니즘을 신호에 특히 쓸모있다. 지금, 초파리 유전학의....
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프로토콜
1. 기아
- 표준 플라이 유리 병의 하단에 18.2 MΩ 물 목화 공을 포화에 의해 기아 튜브를 비행 준비합니다. 다르게는, 유사 바이알 내의 각도 18.2 MΩ 물 장소 여과지의 작은 조각을 포화.
- 준비된 유리 병에 파리를 추가 한 후 CO 2 패드 ~ 100 동물의 세트로 파리를 수집합니다.
참고 : 최상의 결과 미만 5 일 이전입니다 동물 얻을 수있다. 그러나, 동물의 실제 나이는 시간에 기본 맛의 변화를 결정하는 변수로 실험을 제어 할 수있다. - 유리 병 폐쇄 확보하기 위해 목화 공 또는 거품 스토퍼를 사용합니다. 환경 제어 배양기에서 그들의 편에서 튜브를 놓습니다. 25 ° C의 온도, 70 % 이상의 습도를 유지한다. 24 시간 동안 그대로 튜브를 남겨주세요.
2. 맛 선호도 분석
- 같은 날 A의 분석에 대한 모든 tastants 준비의 테스트.
참고 : 실험 질문에 따라 달라집니다 사용되는 정확한 tastants이 요구된다. 다음은이 프로토콜에서 사용되는 예제 tastants 있습니다. 최적화를위한 부 (4)를 참조하십시오.- 100 밀리미터 자당 용액 10 μL, 붉은 식용 색소의 13 ....
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결과
맛을 선호 분석에서 몇 가지 전형적인 결과는 다음과 같습니다. 대부분의 실험에서 복부 색상의 강도에 약간의 변화는 (그림 1) 볼 수 있습니다. 강한 또는 약한 여부 복부의 모든 색상이 양의 섭취로 간주됩니다. 잠재적 인 편견을 제한하기 위해 연구자들은 실험 조건에있는 동안 블라인드 동물을 득점하는 것은 그러므로 것이 좋습니다.
환경 분석의 결과에 영향을 미치지 않는 식품 염료의 농도를 선택하는 것도 중요하다. 각종 식용 색소 농도를 사용의 결과의 일례는도 2에 도시 푸른 식품 색소의 양이 변화하는 동안,이 실시 예에서, 적색 식품 색소의 양이 1.3 %로 유지 하였다. 0.6 %, 1 % 및 1.3 %. 각각의 염료는 분석에서 참가자의 높은 비율을 보장 5mM의 자당을 첨가 하였다. 맛의 prefe.......
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토론
우리는 초파리 취향 우선 순위를 결정하기위한 단순하지만 효율적인 프로토콜을 설명 하였다. 이 분석의 버전은 정기적으로 맛 화합물 (쓴맛, 단맛, 신맛, 짠맛, 감칠맛과) 다른 특성을 지각에 미각 수용체 (GRS)의 기여를 결정하기 위해 실험에 사용된다. 초파리 게놈 대체 접합 8,9에 의해 68 식별 미각 수용체를 인코딩 약 60 유전자가 포함되어 있습니다. 그러나, 이러한 이온 성 글루타메이트 수용체와 TRP 채널과 같은 다른 단백질은 맛 10-13에 중요한 역할을하는 것으로 입증되었다. 따라서, 곤충의 맛의 차별적 전력의 광범위한 다양성이있다. 또한, 냄새 수용체는 달리, 맛 수용체는 모든 비행 위에 위치 세포에서 발현된다. 다른 맛 수용체를 발현하는 신경 세포의 조합을 포함 Sensilla는 labellum, 다리, 날개에 14 산란관 찾을 수 있습니다. 이와 같이,초파리는 구애와 계란 누워 포함 영양 인수 이후.......
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공개 사항
저자는 경쟁하는 금전적 이해관계가 없음을 선언합니다.
감사의 글
이 원고를 비판적으로 읽고 이 프로토콜을 준비하는 동안 유용한 제안을 해 주신 Tessier 연구실 구성원에게 감사드립니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 블루 식용 색소 (물, 프로필렌 글리콜, FD & C 블루 1 및 레드 40, 프로필 파라벤) | McCormick | N / A | |
| Cryo / Freezer Boxes w / o | Dividers Fisher | 03-395-455 | |
| Dumont # 5 Forceps | Fine Science Tools | 11251-20 | |
| 빙하 아세트산 | Fisher | BP2401-500 | |
| Leica S6 E 스테레오 줌 0.63X-4.0X 현미경 | W. Nuhsbaum, Inc. | ||
| 페트리 접시(100mm x 15mm) | BD Falcon | 351029 | 철저히 세척 및 건조하면 재사용 가능 |
| Quick-Snap Microtubes | Alkali Scientific Inc. | C3017 | |
| 빨간 식용 색소 (물, 프로필렌 글리콜, FD& C Reds 40 및 3, 프로필파라벤) | McCormick | N/A | |
| 자당 | IBI Scientific | IB37160 |
참고문헌
- Herrero, P. Fruit fly behavior in response to chemosensory signals. Peptides. 38 (2), 228-237 (2012).
- Vosshall, L. B., Stocker, R. F. Molecular architecture of smell and taste in Drosophila. Annu Rev Neurosci. 30, 505-533 (2007).
- Harris, D. T., Kallman, B. R., Mullane....
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재인쇄 및 허가
