Viabilità imaging cellulare su scaffold non trasparenti - con l&#39;esempio di un romanzo a maglia Titanium Implant

Gauri Tendulkar; Phillip Grau; Patrick Ziegler; Alfred Buck, Sr.; Alfred Buck, Jr.; Andreas Badke; Hans-Peter Kaps; Sabrina Ehnert; Andreas K. Nussler

doi:10.3791/54537

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Articolo metodologico

Viabilità imaging cellulare su scaffold non trasparenti - con l'esempio di un romanzo a maglia Titanium Implant

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DOI:

10.3791/54537

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7 settembre 2016

Gauri Tendulkar¹ , Phillip Grau¹ , Patrick Ziegler¹^,² , Alfred Buck, Sr.³ , Alfred Buck, Jr.³ , Andreas Badke¹^,² , Hans-Peter Kaps¹^,² , Sabrina Ehnert¹ , Andreas K. Nussler¹

¹Siegfried Weller Institute for Trauma Research at the BG Trauma Center, Eberhard Karls Universität Tübingen, ²Department of Orthopaedics, BG Trauma-Center, ³Buck GmbH and Co.KG

In questo articolo

Sommario

Qui presentiamo una tecnica di imaging fluoroforo base per rilevare la vitalità cellulare su uno scaffold di titanio non trasparente nonché per rilevare intravedere le impurità dell'impalcatura. Questo protocollo risolve i l'inconveniente di immaginare interazioni cellula-cellula o cellula-metallo su impalcature non trasparenti.

Abstract

La degenerazione del disco intervertebrale e l'ernia del disco sono una delle principali cause di lombalgia. La deplezione della matrice extracellulare, che culmina nell'estrusione del nucleo polposo (NP), porta alla distruzione del disco intervertebrale. I trattamenti chirurgici attualmente disponibili riducono il dolore ma non ripristinano la funzionalità meccanica della colonna vertebrale. Al fine di preservare le caratteristiche meccaniche della colonna vertebrale, la sostituzione totale del disco o del nucleo divenne quindi un ampio interesse. Tuttavia, questa era dell'artroplastica è ancora in uno stato immaturo, poiché nessuno dei prodotti esistenti è stato valutato clinicamente.

Questo studio intende testare la biocompatibilità di un nuovo impianto di nucleo costituito da fili di titanio lavorati a maglia. Nonostante tutti i vantaggi meccanici, il materiale ha i suoi limiti per l'analisi ottica convenzionale in quanto l'impianto risultante non è trasparente. Qui presentiamo una strategia che descrive la visualizzazione in vitro, il tracciamento e i test di vitalità delle cellule osteocondro-progenitrici sullo scaffold. Questo protocollo può essere utilizzato per visualizzare l'efficienza del protocollo di pulizia e per studiare la biocompatibilità di questi e altri scaffold non trasparenti. Inoltre, questo protocollo può essere utilizzato per mostrare il modello di aderenza delle cellule, nonché la vitalità cellulare e i tassi di proliferazione su/nell'impalcatura. Questo test di biocompatibilità in vitro fornisce uno strumento propizio per analizzare l'interazione cellula-materiale in scaffold non trasparenti e opachi.

Introduzione

mal di schiena cronico è una malattia multifattoriale. L'interesse per una opzione di trattamento minimamente invasivo per la malattia degenerativa del disco è cresciuta dal 1950. Fino ad oggi, multi-segmentale fusione della colonna vertebrale è il trattamento più utilizzato. Poiché questo metodo porta spesso a limitazioni nella mobilità del segmento interessato ^1,2, esplorazione del periodo artroplastica diventato un grande interesse. Avanzamenti significativi nella sostituzione totale sostituzione del disco e il nucleo è diventata una valida alternativa per il trattamento di mal di schiena cronico ^1. Nonostante gli enormi progressi, nessun....