Un modelo murino de Grupo B<em&gt; Streptococcus</em&gt; Colonización vaginal

Resumen

El objetivo de este protocolo es imitar grupo humano Streptococcus B (GBS) la colonización vaginal en un modelo murino. Este método se puede utilizar para investigar respuestas inmunes del huésped y factores bacterianos que contribuyen a la persistencia vaginal GBS, así como para poner a prueba estrategias terapéuticas.

Resumen

Streptococcus agalactiae (Streptococcus del grupo B, GBS), es un Gram-positivo, colonizador asintomática del tracto gastrointestinal humano y el tracto vaginal de 10 a 30% de los adultos. En individuos inmunocomprometidos, incluyendo los recién nacidos, mujeres embarazadas y ancianos, GBS puede cambiar a un patógeno invasivo que causa la sepsis, artritis, neumonía y meningitis. Debido a que el GBS es un patógeno bacteriano líder de los recién nacidos, la profilaxis actual se compone de detección final de la gestación para la colonización vaginal por EGB y el tratamiento con antibióticos periparto posterior de las madres GBS-positivas. carga vaginal abundante GBS es un factor de riesgo tanto para la enfermedad neonatal y la colonización. Por desgracia, poco se sabe acerca del anfitrión y los factores bacterianos que favorecer o permitir la colonización por GBS vaginal. Este protocolo describe una técnica para establecer persistente colonización vaginal GBS utilizando un β-estradiol solo pre-tratamiento y toma de muestras diariamente para determinar loa bacterianare. Aún más detalles métodos para administrar terapias o reactivos de interés adicionales y para recoger el líquido de lavado vaginal y los tejidos del tracto reproductivo. Este modelo de ratón será favorecer la comprensión de la interacción GBS-host dentro del ambiente vaginal, lo que conducirá a posibles dianas terapéuticas para controlar la colonización vaginal de la madre durante el embarazo y para prevenir la transmisión al recién nacido vulnerable. También será de interés para aumentar nuestra comprensión de las interacciones generales bacteriana en host en el tracto vaginal femenino.

Introducción

Streptococcus agalactiae, Streptococcus del grupo B (GBS), es una bacteria encapsulada, Gram-positiva que con frecuencia se aísla de los intestinos y el tracto genitourinario de adultos sanos. En la década de 1970, GBS surgió como el agente principal de mortalidad neonatal infecciosa, con más de 7.000 casos de la enfermedad neonatal por año ^1. La aparición temprana de la enfermedad por EGB (EOD) se produce en las primeras horas o días de vida, surge como neumonía o dificultad respiratoria, y con frecuencia se desarrolla en la sepsis, mientras que la enfermedad de aparición tardía (LOD) sobreviene después de varios meses y se presenta con ....

Protocolo

Todos los animales de trabajo fue aprobado por la Oficina de Cuidado de Animales de Laboratorio de la Universidad Estatal de San Diego y lleva a cabo bajo las normas veterinarias aceptados. Los ratones hembra, edad 8 - 16 semanas, se utilizaron para el desarrollo de este método.

1. Preparación y la inyección intraperitoneal de β-estradiol

1. Medir β-estradiol (0,5 mg / ratón) en un peso de papel mientras que use el equipo de protección personal (EPP) apropiado. PRECAUCIÓN: β-estradiol puede ser absorbido por la piel y las mucosas.
2. Transferencia β-estradiol a un tubo cónico de 15 ml y agitar hasta que todos los grumos se elim....

Resultados

Durante el desarrollo de este modelo, se hicieron varias observaciones acerca de los factores que afectan a la duración de la colonización vaginal por EGB. Para determinar cómo etapa estral en impactos de inoculación bacteriana GBS persistencia, los ratones se llevaron a cabo en el día de la inoculación a través de líquido de lavado vaginal. La Figura 1 ilustra las cuatro etapas del ciclo estral de ratón, como se determina por mojado de montaje en el líquido de lavado va.......

Discusión

Para promover el avance de la comprensión de las interacciones con el GBS tanto el anfitrión y otros microbios en el contexto del huésped, se requiere un modelo animal. Este trabajo describe los aspectos técnicos del establecimiento de la colonización vaginal por EGB en ratones. Este protocolo logra> 90% colonización de ratones sin el uso de anestésicos para inocular bacterias o para recoger muestras de frotis, inmunes supresores para permitir la colonización, pre-lavado vaginal, o aditivos para espesar el inóculo. P.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Aceite de sésamo	Sigma Aldrich	S3547-250ML
β-Estradiol	Sigma Aldrich	E8875-1G	PRECAUCIÓN: Use el EPP adecuado. El estradiol puede absorberse a través de la piel y las superficies mucosas.
200 μ l Puntas de pipeta de carga de gel	USA Scientific	1252-0610
Hisopos uretrogenitales, estériles, de alginato de calcio	Puritan	25-801 A 50
CHROMagar StrepB	DRG International	SB282
Todd Hewitt Caldo	Hardy Diagnostics	7161C
18 G, agujas de 1,5 pulgadas	BD	305199
26 G, agujas de 0,5 pulgadas	BD	305111
Jeringas de 10 ml	BD 309604
Jeringas de 1 ml	BD	309659
0,45 μ m Filtros de jeringa PVDF	Whatman	6900-2504
Solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco 1x	Corning	21-031-CV