الحقن تحت الشبكية هي التقنية الأكثر شيوعا لتوصيل العوامل العلاجية الكبيرة مثل البروتينات والنواقل الفيروسية إلى المستقبلات الضوئية وظهارة صبغة الشبكية. يتم وصف طريقة بديلة في الفئران تستهدف بنجاح الفضاء تحت الشبكية بأقل قدر من الضرر الجانبي وأوقات التعافي السريعة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
بديل والمصادق عليها طريقة حقن للوصول إلى الفضاء تحت الشبكية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
وقد استخدمت الحقن تحت الشبكية بنجاح في كل من البشر والقوارض لتقديم التدخلات العلاجية من البروتينات، العوامل الفيروسية، والخلايا إلى interphotoreceptor / حجرة تحت الشبكية التي لديها التعرض المباشر للخلايا مستقبلة للضوء والظهارة الصبغية الشبكية (RPE). وقد أظهرت الحقن تحت الشبكية من البلازمينوجين وكذلك التجارب قبل السريرية والسريرية الأخيرة السلامة و / أو فعالية لإيصال النواقل الفيروسية والخلايا الجذعية للأفراد المصابين بأمراض الشبكية المتقدمة. نماذج الماوس من مرض في شبكية العين، وراثي ولا سيما ضمور شبكية العين، ضرورية لاختبار هذه العلاجات. إجراء الحقن الأكثر شيوعا في القوارض هو استخدام transcorneal صغيرة أو شقوق transcleral مع نهج الأمامي لشبكية العين. مع هذا النهج، وإبرة حقن تخترق الشبكية العصبي الحسي تعطيل RPE الكامنة وعلى الإدراج يمكن بسهولة نيك العدسة، مما تسبب عتامة العدسة وانخفاض قيمة imagi موسعنانوغرام. الوصول إلى الفضاء تحت الشبكية عبر transcleral، نهج الخلفي يتجنب هذه المشاكل: الإبرة تعبر الصلبة حوالي 0.5 ملم من العصب البصري، دون تغلغل في شبكية العين والابتعاد عن تعطيل زجاجي. تقتصر الأضرار الجانبية لتلك المرتبطة بضع الصلبة التنسيق وآثار عابرة، المصلية انفصال الشبكية. بساطة الأسلوب يقلل من إصابة العين، تضمن إعادة المرتكز شبكية العين السريعة والانتعاش، ولديها نسبة الفشل منخفضة. والحد الأدنى من الضرر الذي يلحق بالشبكية وRPE يسمح للتقييم واضح لمدى فعالية والآثار المباشرة للعوامل علاجية أنفسهم. توضح هذه المخطوطة تقنية حقن تحت الشبكية الجديدة التي يمكن استخدامها لاستهداف ناقلات فيروسية، وكلاء الدوائية، والخلايا الجذعية أو خلايا الناجم الجذعية المحفزة (آي بي إس) إلى الفضاء تحت الشبكية في الفئران مع فعالية عالية، الحد الأدنى من الضرر، والانتعاش السريع.
المقدمة
الحقن تحت الشبكية هي الوسيلة الأساسية لتقديم وكلاء الخلوية والفيروسية لشبكية العين من الفئران لدراسة تأثيرها على المستقبلات الضوئية وRPE الكامنة 1،2. معظم البروتوكولات حقن تحت الشبكية في الفئران تستخدم transcorneal أو transcleral موقع الحقن والأمامي من خط الاستواء (الشكل 1). هذا النهج يمكن أن يؤدي إلى أضرار جانبية الأصيل الذي يشمل الخدش ويعكر الناتج من العدسة، وتعطل سلامة الجسم الزجاجي، والاختراق من الشبكية العصبي الحسي وقزحية العين، نزيف في شبكية العين والمفارز في شبكية العين كبيرة ودائمة وذمة تحت الشبكية 3-9. يجب التلاعب التجريبية التغلب على هذه الآثار من أجل تقييم آثار التدخلات العلاجية....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
الحيوانات: النوع البري C57BL / 6J الفئران ولدت في جامعة كاليفورنيا في لوس أنجلوس (UCLA). وكانت جميع الحيوانات بين 11-17 أسابيع من العمر، وشملت الذكور وإناث الفئران. وكانت جميع الفئران يضم مجموعة وصيانتها في ضوء دورة 0:12 / مظلمة مع بالمال وبالشهرة أيضا الغذاء والماء الإعلانية. أجريت جميع التجارب وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية من جامعة كاليفورنيا وجمعية البحوث في الرؤية وبيان العيون لاستخدام الحيوانات في العيون والبحوث الرؤية.
ملاحظة: جميع الأدوية وكلاء عن طريق الحقن هي الولايات المتحدة أدوية (USP) درجة.
1. إعداد الجر....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
الخلفي أجريت نهج الحقن تحت الشبكية transcleral في 31 عيون صحية من 16 الفئران نوع البرية مع حقن 0.3 ميكرولتر (ن = 18)، و 0.5 ميكرولتر (ن = 8) و 1.0 ميكرولتر (ن = 5) من 0.01٪ فلوريسئين. تم استبعاد عين واحدة من الحقن بسبب عتامة القرنية موجودة مسبقا التي حالت دون التحليل البنيوي والوظيفي. يتم تضمين كل عين حقن في هذا التقرير. لا انفصال الشبكية غير مقصودة، تم الكشف عن ثقوب الشبكية العصبي الحسي، أو تسرب في الجسم الزجاجي ولا كان أي دليل على الخدش عدسة، الا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
الحقن تحت الشبكية هي الأسلوب المفضل لتسليم ناقلات فيروسية ووقف العلاج المستمدة من خلية لمعالجة خلايا مستقبلة للضوء وRPE في كل من البحوث الأساسية والعلاج السريري. في المرضى، وعادة ما يتم الحقن تحت الشبكية مع بضع الصلبة الأمامي في مسطح بارس، واستئصال الزجاجية الخلفية الأساسية والاختراق من شبكية العين عن طريق الإبرة مع رؤية مباشرة. كما هو الحال مع معظم الإجراءات استئصال الزجاجية، ومن الشائع لتشكيل إعتام عدسة العين تحدث قبل الأوان ما لم تكن العين هي بالفعل pseudophakic. في الفئران، وت.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
لم يكن لدى أي من أصحاب البلاغ أي إفصاحات تجارية.
شكر وتقدير
نعرب عن امتناننا للدعم المقدم من كرسي هارولد وبولين برايس في طب العيون ومعهد جول شتاين للعيون إلى MBG ، منحة NEI الأساسية (EY00331-43) إلى SN. تم دعم البحث جزئيا من خلال هدية سخية من عائلة سكاريا إلى SN و MGB ، ومن منحة غير مقيدة من أبحاث الوقاية من العمى إلى قسم طب العيون. نشكر شارلوت ييي وانغ في مدرسة بيركلي للبصريات للحصول على صور OCT الأولية للحقن تحت الشبكية.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| هاميلتون موديل 62 RN SYR | هاميلتون | 87942 | حقنة × 1 |
| إبرة هاميلتون 33 جم ، 1.0 بوصة ، 20 درجة ، نقطة 3 (304 فولاذ مقاوم للصدأ) | إبر هاميلتون | 7803-05 | × 6 |
| مقص منحني فاناس | تيد بيلا ، INC. | 1347 | 5 مم شفرة |
| 22.5 درجة سكين الجراحة المجهرية | Wilson Ophthalmic Corp. | 91204 | |
| كيتاجيكت | فينيكس | NDC 57319-609-02 | مختبرات الكيتامين |
| Anased | Lloyd | NDC 61311-482-10 | زيلازين |
| فلورسين 10٪ AK-Fluor | Akorn | NDC 17478-253-10 | 100 مجم / مل |
| 0.9٪ محلول ملحي USP | Hospira | NDC 0409-4888-50 | 0.9٪ مرهم مضاد حيوي كلوريد الصوديوم |
| Akorn | NDC 17478-235-35 | العيون | |
| مضخة تعميم | Gaymar | TP-500 T / Pump | ف / ن 07999-000 |
| sd-OCT | Bioptigen | R-Series | كاميرا قاع العين التجارية |
| مختبرات أبحاث فينيكس | ملاقط | ||
| من النوع 3 | تيد بيلا ، INC. | 5385-3SU | |
| 2.5٪ فينيليفرين | باراجون BioTeck | NDC 42702-102-15 | |
| IMARIS8 | Bitplane | الإصدار 8.1.2 | |
| ImageJ | NIH | V1.8.0_77 | |
| Hypromellose 2.5٪ | ميثيل السليلوز | Goniovisc | AX0401 |
| (شطف) | Bausch & لومب | محلول ملحي | |
| مجهر | زايس | ستيمي 2000 | مجهر |
| مصدر الضوء | Fostec | P / N 20520 | مصدر الضوء |
المراجع
- Garoon, R. B., Stout, J. T. Update on ocular gene therapy and advances in treatment of inherited retinal diseases and exudative macular degeneration. Curr Opin Ophthalmol. 27 (3), 268-273 (2016).
- Pierce, E. A., Bennett, J.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
