하이 브리 도마 기술에 의해 쥐 단일 클론 항체의 생성

Pamela Holzlöhner; Katja Hanack

doi:10.3791/54832

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방법 논문

하이 브리 도마 기술에 의해 쥐 단일 클론 항체의 생성

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DOI:

10.3791/54832

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2017년 1월 2일

Pamela Holzlöhner¹ , Katja Hanack¹

¹Department of Biochemistry and Biology, University of Potsdam

이 논문에서

요약

하이브리도마 기술을 기반으로 한 단클론 항체 생성을 위해 최적화된 프로토콜이 제시됩니다. 마우스는 면역접합체로 면역되었습니다. 비장 세포는 PEG와 전기 충격에 의해 불멸의 골수종 세포와 융합되었습니다. 항체 생산 하이브리도마 세포는 HAT 및 항원 특이적 ELISA 스크리닝에 의해 선택되었습니다.

초록

단클론 항체는 보편적인 결합 분자이며 생물 의학 및 연구에 널리 사용됩니다. 그럼에도 불구하고 이러한 결합 분자의 생성은 복잡한 취급과 대안의 부족으로 인해 시간이 많이 걸리고 힘들다. 이 프로토콜의 목적은 하이브리도마 기술을 사용하여 단클론 항체 생성을 위한 하나의 표준 방법을 제공하는 것입니다. 이 기술은 두 단계를 결합합니다. 1단계는 동물에 대한 적절한 면역이고, 2단계는 B 림프구와 불멸의 골수종 세포를 융합하여 항체 분자 생성과 불멸성과 같은 부모 기능을 모두 가진 하이브리드를 생성하는 것입니다. 생성된 하이브리도마 세포를 재복제하고 희석하여 배양 상등액에서 원하는 단클론 항체를 분비하는 안정적인 단클론 세포 배양을 수득했습니다. 상등액은 항원 특이성에 대해 효소 결합 면역흡착 분석법(ELISA)에서 테스트되었습니다. 적절한 세포 클론을 선택한 후, 원하는 항체 분자를 대량으로 생산하기 위해 세포를 대량 배양으로 전환했습니다. 항체의 정제는 친화성 크로마토그래피에 의해 일상적으로 수행됩니다. 정제 후 항체 분자를 특성화하고 최종 테스트 응용 분야에 대해 검증할 수 있습니다. 전체 프로세스는 8개월에서 12개월의 개발 기간이 소요되며 항체가 원하는 테스트 시스템에서 작동하지 않을 위험이 높습니다.

서론

이 프로토콜에 제시된 하이 브리 도마 기술은 처음 쾰러와 1975 년 밀스타인 ^(1)에 의해 설명하고, 몇 가지 기술적 인 개선을 제외하고 주요 절차는 지난 40 년 ² 동안 크게 변경되지 않았습니다. 이 프로토콜의 목적은보다 적절한 면역화 전략, 모노클로 날 항체의 생성 표준 방법 및 검증 방법 (ELISA)에 대한 예를 설명한다.

항체는 놀라운 도구 질병 모니터링 및 처리 ^3에 대한 진단 및 치료 옵션뿐만 아니라 이러한 유세포 자기 세포 분류, 또는 면역 같은 기술적 접근법 광범위한 기여한다. 원하는 목표에 대한 단일 클론 항체의 상용화는 항체 또는 항체 관련 제품 ^(4)의 거의 셀 수없이 많은 수량 24 개 이상의 서로 다른 웹 데이터베이스의 존재에 의해 설명된다. 2015에서,ntibody 분자 인해 적절한 검증 및 상업적으로 이용 가능한 항체의 특성에 심각한 문제로 국제 논의 ^5-7의 일부.

표적 항원에 특이적인 항체를 찾기 어렵고 고가 일 수 있고, 종종, 이들은 친 화성 또는 특이성은 필요 없다. 항체를 생성하는 것은 아직 시간이 많이 걸리는이며, 수도 더 나은 하나를 구입하는 ....