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방법 논문

ADSC 매 이식은 확장 식도 내시경 점막하 절개 후 협착을 방지하는

8.4K 조회수

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DOI:

10.3791/55018

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2017년 2월 10일

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이 논문에서

요약

이 연구는 내시경 지방 조직 유래 기질 세포 (ADSC)의 성공적인 방법을보고하는 돼지 모델의 확장 내시경 점막하 절제술 (ESD) 후 식도 협착 방지를위한 - 시트 이식.

초록

지난 몇 년 동안, 세포 시트의 구조는 특히 재건 수술 절차, 재생 의학에서 폭 넓은 관심을 촉발하고있다. 다양한 생체 물질과 지방 조직 유래 기질 세포 (ADSCs)를 조합 한 다양한 기술의 개발은 뼈, 연골, 그리고 쥐, 돼지, 인간 ADSCs에서 지방 조직과 같은 조직 공학적 대체, 수많은 종류의 건설을 주도하고있다. 확장 식도 내시경 점막하 절제술 (ESD)은 식도 협착 형성 할 책임이있다. 협착 방지를 사용할 수없는 효율적인 치료와 함께 도전 남아있다. 이전의 연구는 송곳니 모델과 인간 점막 세포 시트를 이식 효과를보고 하였다. ADSCs는 중간 엽과 비 중간 엽 계통에 항 염증, 지방의 면역 변조 효과, 혈관 신생 유도 및 분화 능력을 기인한다. 이 원래의 연구는 내시경 TRA 설명ADSC의 조직 공학적 구조의 nsplantation은 돼지 모델에서 식도 협착을 방지합니다. ADSC 구조는 종이지지 막 서로에 계층이 동종 ADSC 시트로 구성되었다. ADSCs는 프로브 기반 공 초점 레이저 endomicroscopy (pCLE) 모니터링을 허용하는 PKH67의 형광으로 표지 하였다. 이식 당일 5 cm 식도 협착을 유발하는 것으로 알려져 헤미 둘레 ESD 수행 하였다. 동물은 즉시 내시경 4 ADSC 구조로 이식되었다. ADSC 구조의 완전한 접착 부드러운 적용 10 분 후에 얻어졌다. 동물은 모든 동물이 성공적으로 이식 날 (28)에 희생되었다. 이식은 양의 pCLE 평가와 함께 3 일에 확인되었다. 이식 된 동물에 비해 대조군의 주요 섬유 성 조직 개발 빈번한 소화 문제, 및 감소 된 체중 증가와 심한 협착을 개발 하였다. allogeni 우리의 모델에서, 이식C 이중 세포 시트로 구성 ADSCs는 확장 된 ESD 후 성공적으로 강하게 하부 식도 협착 속도와 관련된했다.

서론

피상적 식도 종양 관리 새로운 내시경 기술의 발달로 변경되었다. 요즘, 내시경 절제술은 제 치료제이다. 사실상, 종양은 동일한 결과 1, 2, 3과 수술보다 낮은 이환율 및 사망률과 연관된다. 내시경 점막 절제술 (EMR) 및 내시경 적 점막하 절제술 (ESD)는 가장 널리 사용되는 기술이다. 확장 된 표면 종양의 경우, ESD가 바람직하다. EMR에 비해 ESD 관계없이 병변의 크기, 일괄 resectioning 욕실 수, 4, 5, 6을 형성. ESD의 주요 지연 합병증은 일반적으로 절제 후 1 2 주 사이에 발생하는 식도 협착 형성된다. 최근 발표 된 연구는 협착 형성이 상관된다 보여절제의 크기입니다. 일본 내시경 학회 ESD들이 사건의 90 % 이상에 협착 개발과 관련된 심각한 공급 문제와 삶의 질에 큰 저하에 대한 책임 때문에 식도 주위의 ¾보다 큰 크기를 피하는 것이 좋습니다.

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프로토콜

모든 동물은 동물 연구 윤리위원회 (농업의 프랑스 교육부의 지침)에 따라 처리 하였다. 이 프로토콜은 파리 데카르트 대학에서 동물 실험과 승인 지역 윤리위원회의 승인을받은 (등록 번호 MESR 2035.02을, 학부 의학 파리 데카르트, 파리, 프랑스의).

1. ADSC 문화 및 라벨링

  1. 민간 기관에서 확인 ADSCs를 얻습니다. 37 ° C, 5 %, 10 % 태아 송아지 혈청과 1 % 항생제 (페니실린과 스트렙토 마이신)를 포함한 알파 최소 필수 매체와 CO 2의 문화 동종 ADSCs.
  2. 표준 셀 확장 절차 (37 ° C와 5 % CO 2)를 사용하여 동물 당 약 24 × 10 6 ADSCs를 얻습니다. 표준 트립신 용액 (a T150 접시 10 ㎖)를 사용하여 수확 ADSCs. 혈구와 셀 계산을 수행합니다.
  3. 전지이다 PKH67 염색 홍보를 사용하여 이식 전날 라벨을 수행ocedure 후술.
    주 : 염색 과정의 목적은 이식 후 세포의 추적을 허용하는 것이다.
    1. 2 × 10 6 ADSCs 레이블을하기 위해, 용액 A를 준비하고 해결 B (희석제 C 1 mL를 PKH67의 4 μL) (100 희석제 C의 μL 2 × 10....

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결과

ADSCs 및 ADSC 시트를 획득하는 절차의 문화는도 1에 도시된다. 도 2는 용지지지 막상에서 서로 적층 된 두 ADSC 시트로 이루어지는 그래프트의 구조를 나타낸다. ADSCs는 이전에 pCLE와 생체 이식 모니터링 수 있도록 PKH67의 형광으로 표지 하였다. 그림 3은 5 cm 및 헤미 - 원주 식도 흉터의 결과로, 확장 된 식도 내시경 점막하 박리의 여러 단계를 보여줍니다. 도 4는 내시경 이식 절차를 나타낸다. 이식은 부드러운 응용 프로그램의 10 분 후에 모든 동물에 대한 성공했습니다. 도 5는 이식 절차의 성공 여부를 확인하는 일 3 포지티브 pCLE 평가를 나타낸다.

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토론

이 돼지 모델에서, ADSC 시트 이식 기술적 성공 및 생체 pCLE 평가 셀 생착 모니터링시켰다. 임상 내시경, 방사선 학적, 조직 학적 평가는 확장 된 ESD 후 식도 협착 예방에 내시경 ADSC 시트의 효과를 보여 주었다.

인디고 카민 염료를 함유하는 시트 ADSC 글리세롤 용액의 내시경 이식 재생 의학에 혁신적인 방법이다. Ohki 등. 제 내시경 이식 절차를 설명했다. 이들 연구에서, 세포 시트 구조는지지 막 10, 11, 19로 사용 폴리 비닐 디 플루오 라이드의 얇은 시트 상에 적층 구강 점막 상피 세포 시트로 구성 하였다. 지원 막은 내시경 집게로 파악 조심스럽게 궤양 침대에 배치했다. CEL1- 시트 부착 부드러운 응용 프로그램의 10 분 후에 얻었다. 이 절차는.......

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공개 사항

저자는 공개 아무것도 없어.

감사의 글

이 연구는 Avenir 재단(Fondation de l'Avenir, 255 rue de Vaugirard, 75719 Paris cedex 15, Paris, France)의 지원과 자금 지원을 받았습니다. 이 연구는 알랭 카르팡티에 재단(Alain Carpentier Foundation)의 생물 외과 연구 연구소(Laboratory of Biosurgical Research) 수의학 팀의 귀중한 도움이 없었다면 결코 수행되지 못했을 것입니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
투명 엔도스코픽 캡 Q180 호환Olympus Optical Co
GIF-Q180 위내시경 Olympus Optical Co
비디오스코프 시스템 Exera II Olympus Optical Co
주사 바늘 18 GOlympus Optical Co
전기수술 유닛 ERBE ICC 350 ERBE 기술
인디고 카르민 1%Life
내시경 하이브리드 나이프Life
Minisonde Z pCLE 녹색 프로브Mauna Kea 기술프로브 사용법을 배워야 합니다. 조작은 어려울 수 있습니다.
소 태아 혈청Sigma Aldrich12105C
TrypsinSigma AldrichT146
알파 최소 필수 배지Thermo Fisher22561-021
인산염 완충 식염수Thermo Fisher10010-023
PKH67 염료 키트Sigma AldrichMini67-KT
12-well 온도 반응형 셀 배양 접시Upcell Thermo Scientific174900시딩 30분 전에 4 mL 표준 중간 배양으로 웰을 느껴보세요
. Esomeprazole 40 mg Biogaran
Moprhine sulfate 50 mg/mLLavoisier
Amoxicilline 1 gBiogaran
케타민 250 mg/5 mLPanpharma
프로포폴 10 mg/mLFresenius
소수성 종이까르푸
세포

참고문헌

  1. Ono, S., Fujishiro, M., et al. Long-term outcomes of endoscopic submucosal dissection for superficial esophageal squamous cell neoplasms. Gastrointestinal endoscopy. 70 (5), 860-866 (2009).
  2. Pech, O., May, A., et al.

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재인쇄 및 허가

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