تشمل المشكلات في معالجة العينات البيولوجية لمراقبة الفحص المجهري الإلكتروني المسح الضوئي انهيار الخلية ومعالجة العينات من البيئات الدقيقة الرطبة وتدمير الخلايا. يتم تجميع وتفصيل بروتوكولات منخفضة التكلفة وسريعة نسبيا مناسبة لإعداد عينات صعبة مثل النسيج الإنشائي الزهري ، والخراجات الفطرية ، والفطريات (Agaricales) وتفصيلها.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
مسح بروتوكولات المجهر الإلكتروني الماسح (SEM) لإشكالية النبات، طلائعيات بيضية، وعينات الفطرية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
وتشمل المشاكل المشتركة في تجهيز العينات البيولوجية لالملاحظات مع المجهر الإلكتروني الماسح (SEM) انهيار الخلية، ومعالجة عينات من microenvironments الرطب وتدمير الخلايا. باستخدام الأنسجة الشباب الأزهار، الخراجات طلائعيات بيضية، وجراثيم الفطريات (غاريقونيات) كأمثلة، بروتوكولات محددة لمعالجة عينات الحساسة موصوفة هنا أن التغلب على بعض التحديات الرئيسية في معالجة عينة لالتقاط الصور تحت SEM.
الخلايا الإنشائية نباتية ثابتة مع القوات المسلحة الأنغولية (-الفورمالين الخل من الكحول) ومعالجتها مع نقطة مجفف الحرجة (CPD) لم يظهر انهارت الجدران الخلوية أو أجهزة مشوهة. هذه النتائج هي حاسمة لإعادة إعمار تنمية الأزهار. إجراءات مماثلة على أساس وثيقة البرنامج القطري لعينات من microenvironments الرطبة، مثل الخراجات طلائعيات بيضية الثابتة غلوتارالدهيد، هو الأمثل لاختبار النمو المتفاوت للخصائص التشخيصية (على سبيل المثال، العمود الفقري الكيس) على أنواع مختلفة من سوbstrates. وتجنب تدمير خلايا ممرضة تعلق على جراثيم الفطريات بعد الإماهة، والجفاف، ومعاملة CPD، خطوة مهمة لمزيد من الدراسات الفنية لهذه الخلايا.
البروتوكولات بالتفصيل هنا تمثل منخفضة التكلفة وبدائل سريعة لاقتناء صور ذات نوعية جيدة لإعادة بناء عمليات النمو ودراسة الخصائص التشخيصية.
المقدمة
في علم الأحياء، وقد تم تمديد استخدام المجهر الإلكتروني الماسح (SEM) للدراسات التطور الهيكلي، مورفولوجيا المقارن، تطوير الجهاز، وتوصيف السكان أو الأنواع 1. مع عرض ثنائي الأبعاد للهياكل مجهرية، مجالات مثل micromorphology والنظاميات استفادت من التقدم تقنية ووزارة شؤون المرأة منذ النصف الثاني من القرن التاسع 20. على سبيل المثال، فإن إدخال منهجية تفل طلاء في 1970s الملاحظات الممكنة من المواد الحساسة مثل قمم تبادل لاطلاق النار والزهور تعزيز التصوير من الأنسجة غير موصل 2 و 3. يستخدم SEM الالكترونات طرد من سطح العينة لإنتاج التضاريس في بيئة عا....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
ملاحظة: يتضمن هذا البروتوكول ستة أقسام رئيسية، ثلاثة المكرسة للكائنات محددة (الأقسام 1-3)، وثلاث واصفا إجراءات مشتركة بين جميع (4-6). النجمة (*) تشير إلى الخطوات تعديلها من قبل المجربون.
1. دراسات الدول النامية وتشكلت بالكامل هياكل النبات
- جمع والتثبيت
- إذا تم جمع المواد النباتية في مكان اللواتي لا يحصلن على خزانة الدخان، وإدخال وتزج المواد في 70٪ من الإيثانول في أنابي....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
الأزهار التنمية وتثبيت للوضع وتشكلت بالكامل هياكل النبات
باستخدام بروتوكول FAA-CPD الموصوفة هنا، الأنسجة النباتية شابة وناضجة وثابتة على النحو الأمثل والمجففة للتصوير ووزارة شؤون المرأة. عمليات مثل التنمية الأزهار يمكن بناؤها بسبب عدم تشويه التضاريس وشكل براعم من قبل خلية تقلص (أرقام 1B، 1D، 4A-و). الهياكل ذات أشكال معقدة يمكن تغطيته.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
وفيما يتعلق البروتوكولات ووزارة شؤون المرأة القياسية، والإجراءات المعروضة هنا تشمل سريعة نسبيا، وسهلة لمتابعة، ومنهجيات منخفضة التكلفة. اعتمادا على كمية من العينات وعلى سهولة المعالجة، فإنه يأخذ 4-5 أيام للحصول على صور ذات جودة جيدة. بما في ذلك احتياطات السلامة الكافية لجنة السكان والتنمية والتشغيل ووزارة شؤون المرأة، وإجراءات سهلة في التعامل معها. ينبغي أن تؤخذ بحذر خاص مع الفورمالين وغلوتارالدهيد (انظر الخطوات 1.1.1 إلى 1.1.3 و2.1.5 من البروتوكول). هناك بعض الخطوات التي، إذا لزم.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
وقد لقي هذا المشروع بتمويل من البحث والابتكار برنامج الاتحاد الأوروبي أفق 2020 بموجب اتفاقية منحة رقم 634429. ويعكس هذا المنشور وجهات النظر فقط للمؤلف، والمفوضية الأوروبية لا يمكن أن يكون مسؤولا عن أي استخدام التي يمكن أن تكون مصنوعة من المعلومات الواردة فيه. ونحن نعترف أيضا المساهمة المالية التي قدمها ريال حديقة النباتية، CSIC. ريال عن امتنانه للاتحاد الأوروبي [إيتن-SAPRO-238550] لدعم أبحاثها في الرمية. نحن نريد أيضا أن أشكر فرانسيسكو كالونج لليرجى تقديم الصور herculanea Phellorinia وباء. بيويو لتجهيز العينات (الشكل 5). وقد تم نقل كل الصور من قبل الخدمة ووزارة شؤون المرأة في ريال حديقة النباتية، CSIC في مدريد....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| حمض الخليك | لا يوجد مورد | تهيج الجلد ، تهيج العين | |
| بذرة الألومنيوم | تيد بيلا ، Inc. | 16221 | www.tedpella.com |
| أنابيب الطرد المركزي | لا يوجد مورد | ||
| مجفف النقطة | الحرجة Polaron Quatum Technologies | CPD7501 | |
| D- (+) -Glucose | Merck | 1،083،421،000 | |
| شريط بيع على الوجهين | لا يوجد مورد | ||
| للإيثانول المطلق | لا يوجد مورد محدد | ||
| أجار بكتريولوجي أوروبي | Conda | 1800.00 | www.condalab.com |
| ورق ترشيح | لا يوجد مورد | ||
| ملقط | لا يوجد مورد | ||
| فورمالين 4٪ | لا يوجد مورد | ضار ، سمية حادة ، حساسية الجلد ، مسرطنة. زلات غطاء زجاجي قابل للاشتعال | |
| لا يوجد مورد | |||
| محدد حاوية زجاجية محكمة الغلق ؛ | لا يوجد مورد | ||
| Glutaraldehyde 25٪ DC 253857.1611 (ل) | ديسماديل ش.ل. | 3336 | www.dismadel.com |
| الببتون الفطري | Conda | 1922.00 | إبر www.condalab.com |
| لا يوجد مورد | |||
| لأطباق بتري | لا يوجد مورد | ||
| حاويات بلاستيكية | لا يوجد مورد | ||
| حامل عينة مع غطاء ؛ لمجفف النقطة الحرجة ؛ | تيد بيلا ، إنك. | 4591 | |
| مشارط | لا يوجد مورد | ||
| مسح المجهر الإلكتروني | برنامج هيتاشي | S3000N | |
| لحل SEM | |||
| أ: NaH2< / sub>PO4< / sub> | |||
| الحل ب: Na 2< / sub>HPO4< / sub> | |||
| حاملو العينة | لا يوجد مورد | ||
| Sputter coater | Balzers | SCD 004 | |
| Stereomicscope | لا يوجد مورد | ||
| شبكات مجهر إلكتروني نقل (TEM) | المجهر الإلكتروني | G200 (شبكة مربعة) | www.emsdiassum.com |
| ملاقط | لا يوجد مورد محدد |
المراجع
- Endress, P. K., Baas, P., Gregory, M. Systematic plant morphology and anatomy: 50 years of progress. Taxon. 49 (3), 401-434 (2000).
- Falk, R. H., Gifford, E. M., Cutter, E. G. Scanning electron microscopy of developing plant organs. Science. 168 (3938), 1471-1474 (1970).
- Damblon, F. Sputte....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
