Сканирующей электронной микроскопии (SEM) Протоколы для Проблемной завода, оомицет и грибковые Образцы

M. Angélica Bello; Yolanda Ruiz-León; J. Vladimir Sandoval-Sierra; Svetlana Rezinciuc; Javier Diéguez-Uribeondo

doi:10.3791/55031

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Сканирующей электронной микроскопии (SEM) Протоколы для Проблемной завода, оомицет и грибковые Образцы

30K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/55031

⸱

3 февраля 2017 г.

M. Angélica Bello¹ , Yolanda Ruiz-León² , J. Vladimir Sandoval-Sierra³ , Svetlana Rezinciuc⁴ , Javier Diéguez-Uribeondo³

¹Biodiversity and Conservation Department, Real Jardín Botánico, CSIC, ²Research Support Unit, Real Jardín Botánico, CSIC, ³Mycology Department, Real Jardín Botánico, CSIC, ⁴Division of Glycoscience, AlbaNova University Center, Royal Institute of Technology (KTH)

В этой статье

Краткое содержание

Проблемы при обработке биологических образцов для наблюдения с помощью сканирующей электронной микроскопии включают коллапс клеток, обработку образцов из влажного микроокружения и разрушение клеток. Здесь собраны и подробно описаны недорогие и относительно быстрые протоколы, подходящие для подготовки сложных образцов, таких как цветочные меристемы, цисты оомицетов и грибы (Agaricales).

Аннотация

Общие проблемы при обработке биологических образцов для наблюдений с помощью сканирующего электронного микроскопа (SEM), включают коллапс клеток, обработка образцов из влажных микросреды и разрушение клеток. Использование молодых цветочных тканей, оомицет цисты, и спор грибов (Agaricales) в качестве примеров, конкретные протоколы для обработки тонких образцов, описанных здесь, которые необходимо преодолеть некоторые из основных проблем в лечении образца для захвата изображения при SEM.

Цветочные меристемы, скрепленные FAA (формалин-уксусный-спирт) и обрабатывается с точкой сушильную Critical (CPD) не проявляла разрушилась клеточные стенки или искаженное органы. Эти результаты имеют решающее значение для реконструкции цветочного развития. Подобная CPD-основанная обработка образцов из влажных микросреды, таких как глутаральдегида фиксированные оомицет кист, является оптимальным для проверки дифференциального роста диагностических характеристик (например, киста) шипами на различных типах суbstrates. Уничтожение трофоцитов прикрепленных к спор грибов удалось избежать после регидратации, обезвоживания и лечения CPD, что является важным шагом для дальнейшего функциональных исследований этих клеток.

Подробно изложенные здесь протоколы представляют собой недорогие и быстрые альтернативы для приобретения качественных изображений, чтобы восстановить процессы роста и изучения диагностических характеристик.

Введение

В биологии, использование сканирующей электронной микроскопии (SEM) была распространена на изучение структурной эволюции, сравнительной морфологии, развития органов, а также характеристика популяций или видов ^1. Благодаря двухмерном виде микроскопических структур, таких областях, как микроморфологией и систематики прибыль от SEM техники достижений , начиная со второй половины 20 - ^го века. Например, введение методики покрыти распылением в 1970 - е годы стало возможным наблюдения деликатных материалов , таких как стрелять верхушках и цветов путем более широкого томографию непроводящих тканей ^{^2,}