Biz NGT-3D ve NGB-3D olarak adlandırılan 3D nematod yetiştirme sistemlerini inşa etmek basit bir yöntem mevcut. Bu standart 2D laboratuvar C. elegans kültür plakaları daha doğal Caenorhabditis elegans habitatlar daha benzer habitatlarda nematod fitness ve davranışları incelemek için kullanılabilir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Bu makalede
Özet
Özet
Caenorhabditis elegans gibi genetik model organizmaların kullanımı, son elli yılda biyolojide ufuk açıcı keşiflere yol açmıştır. C. elegans hakkında bildiklerimizin çoğu, normalde doğada yaşadıkları ortamları yansıtması gerekmeyen nematodların laboratuvarda yetiştirilmesiyle sınırlıdır. C. elegans'ın, solucanların doğada çürük meyvelerde ve vejetatif kompostta karşılaştıkları 3 boyutlu matrise daha çok benzeyen 3 boyutlu bir habitatta yetiştirilmesi, 2 boyutlu olarak gözlemlenmeyen yeni fenotipleri ve davranışları ortaya çıkarabilir. Ek olarak, 3D'deki deneyler, 2D'de gözlemlediğimiz fenotiplerin doğadaki solucan için nasıl alakalı olduğunu ele alabilir. Burada, C. elegans'ın normal olarak üç boyutta büyüdüğü ve çoğaldığı yeni bir yöntem sunulmaktadır. C. elegans'ın Nematod Büyüme Tüpü-3D'de (NGT-3D) yetiştirilmesi, C. elegans suşlarının üreme uygunluğunu veya 3D ortamda farklı koşulları ölçmemize izin verebilir. Ayrıca, mikroskobik analiz için C. elegans'ı 3D olarak yetiştirmek için Nematod Büyüme Şişesi-3D (NGB-3D) olarak adlandırılan yeni bir yöntem sunuyoruz. Bu yöntemler, bilim adamlarının C. elegans biyolojisini doğada karşılaştıkları ortamları daha fazla yansıtan koşullarda incelemelerine olanak tanır. Bunlar, laboratuvarda gözlemlediğimiz C. elegans'ın fizyolojisi ve davranışının altında yatan evrimsel önemi anlamamıza yardımcı olabilir.
Giriş
Nematod Caenorhabditis elegans'ın laboratuvarda incelenmesi, son elli yılda biyoloji alanında ufuk açıcı keşiflere yol açmıştır1. C. elegans, 1998'degenomu dizilenen ilk çok hücreli organizmaydı 2 ve bireysel genlerin bütün bir organizmanın gelişimine, fizyolojisine ve davranışına katkılarını anlamada paha biçilmez olmuştur. Bilim adamları şimdi bu genlerin organizmaların doğal ortamlarında hayatta kalmasına ve üreme sağlığına nasıl katkıda bulunabileceğini daha iyi anlamaya çalışıyorlar ve genetik düzeyde ekoloji ve evrim hakkında sorular soruyorlar3-5.
C. elegans bir kez daha bu....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1. NGT-3D ve NGB-3D Çözümler hazırlayın
- Aşağıdaki steril çözeltiler hazırlayın: 0,1454 M NaCl çözeltisi 1 L'lik, 1 M CaCl2, 1 M MgSO 4 ile 1 L 1 L lizojeni Broth (LB), KH 2, 1 M KPO 4 tampon (108.3 g, 1 L PO 4 ve K 2 35.6 g HPO 4 ve dolgu H2O 1 l). Bu çözümleri kullanarak NGM üretimi bir önceki protokolde 10 bulunabilir.
- 121 ° C, 15 dk Otoklav çözümler.
- Steril 5 mg / ml, kolesterol çözeltisi 50 ml hazırlayın. 50 ml'lik konik bir tüp içinde, kolesterol 0.25 g ve% 99.99 50 ml etanol karışımı ve iyice karıştırın. Otoklavlamayı....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
NGT-3D inşaat agar (Şekil 1A) boyunca aralıklı küçük bakteri kolonileri ile bir agar dolu test tüpünde sonuçlanan basit ve kolay bir protokoldür. Solucanlar serbestçe bakteri kolonileri bulma ve tüketen, ağar matriks boyunca taşıyabilirsiniz. C. elegans çoğaltmak ve NGT-3D normal büyüyebilir olmadığını teyit etmek, biz doğurganlık ve standart 2D NGM plakalar ile 3D larva gelişimi karşılaştırıldı. Göreceli yavru boyutu deneyde, yetişkin C. bakteri koloni.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Klasik nematod büyüme ortamı plakaları kullanılarak C. elegans laboratuvar ekimi sağlamıştır C. elegans araştırma önemli keşiflerinden yüzlerce önemliydi. Burada, daha doğru kendi doğal üç boyutlu habitatları yansıtan bir ortamda C. elegans yetiştirmek için yeni yöntemler sunuyoruz. Diğer yöntemler 3D 13 C. elegans gözlemlemek için kullanılmışsa da, bu katı 3 boyutlu matris solucanlar ekimi sağlayan ilk protokoldür. Burada gösterilen iki yöntem, NGT-3D ve NGB-3D, bilim adam.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.
Teşekkürler
Bu çalışma ile desteklenmiştir Yeni Araştırmacı Grant [2014R1A1A1005553] Liberal Kore Ulusal Araştırma Vakfı (UÇK) 'dan; ve Yonsei Üniversitesi Gelecek Lider Mücadelesi Grant [2015-22-0133] Liberal için
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| LB et suyu, Miller (Luria-Bertani) | Difco | 224620 | |
| Sodyum klorür | DAEJUNG | 7548-4400 | 58.44 MW |
| Agar, Granül | Difco | 214530 | |
| Pepton | Bacto | 211677 | |
| Kalsiyum klorür, dihidrat | Bio Basic | CD0050 | 2*H2O; 147.02 MW |
| Kolesterol Bio | Basic | CD0122 | 386.67 MW |
| Etil alkol | B& J | RP090-1 | %99,99; 46,07 MW |
| Magnezyum sülfat, susuz | Bio Basic | MN1988 | 120,37 MW |
| Potasyum fosfat, monobazik, susuz | Bio Basic | PB0445 | 136,09 MW |
| 2'-Deoksi-5-florouridin | Tokyo Kimya Endüstrisi | D2235 | 246,19 MW |
| Potasyum fosfat, dibazik, susuz | Bio Basic | PB0447 | 174,18 MW |
| Çok Amaçlı Test Tüpleri | Stockwell Scientific | ST.8570 | 8 ml |
| Test Tüpü Kapakları | Stockwell Scientific | ST.8575 | |
| Hücre Kültürü Şişesi | SPL Lifescience | 70125 | 25 cm2 |
| Research Stereo Mikroskop | Nikon | SMZ18 | |
| Yüksek Çözünürlüklü Renkli Kamera Kafası | Nikon | DS-Fi2 | |
| PC Tabanlı Kontrol Ünitesi | Nikon | DS-U3 | |
| NIS-Elements Temel Araştırma, Mikroskop Görüntüleme Yazılımı | Nikon | MQS32000 |
Kaynaklar
- Corsi, A. K., Wightman, B., Chalfie, M. A Transparent Window into Biology: A Primer on Caenorhabditis elegans. Genetics. 200 (2), 387-407 (2015).
- Consortium, C. E. S. Genome sequence of the nematode C. elegans: a platform for investigating biology. Science.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
