Nous décrivons ici trois protocoles différents pour l'enquête in vitro de la conjugaison, la transduction et la transformation naturelle de Staphylococcus aureus.
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Article de méthode
Méthodologie de l'étude du transfert horizontal de gènes dans
* These authors contributed equally
Dans cet article
Résumé
Résumé
Une caractéristique importante de la principale pathogène humain opportuniste Staphylococcus aureus est son extraordinaire capacité à acquérir rapidement une résistance aux antibiotiques. Les études génomiques révèlent que S. aureus comporte de nombreux gènes de virulence et de résistance situées dans des éléments génétiques mobiles, ce qui suggère que le transfert horizontal de gènes (HGT) joue un rôle essentiel dans l' évolution de S. aureus. Cependant, une description complète et détaillée de la méthodologie utilisée pour étudier HGT à S. aureus qui manque encore, en particulier en ce qui concerne la transformation naturelle, qui a été récemment rapporté dans cette bactérie. Ce travail décrit trois protocoles qui sont utiles pour l'enquête in vitro de HGT à S. aureus: la conjugaison, la transduction du phage, et la transformation naturelle. Dans ce but, le gène cfr (chloramphénicol / résistance à la florfénicol), qui confère aux phénicols, Lincosamides, oxazolidinones, pleuromutilines et la streptogramine A (PhLOPSA) -résistance phénotype a été utilisé. Comprendre les mécanismes par lesquels S. aureus transfère le matériel génétique à d' autres souches est essentielle pour comprendre l'acquisition rapide de la résistance et aide à clarifier les modes de diffusion déclarés dans les programmes de surveillance ou pour prévoir en outre le mode d' étalement dans le futur.
Introduction
Staphylococcus aureus est une bactérie à Gram positif commensal qui habite naturellement la cavité de la peau et du nez des êtres humains et des animaux. Cette espèce bactérienne est la principale cause des infections nosocomiales dans les hôpitaux et les établissements de santé. De plus, sa capacité à développer une résistance aux différents composés antimicrobiens a fait de la gestion des infections causées par cette bactérie dans une préoccupation mondiale.
Deux principales voies impliquées dans la propagation des phénotypes de résistance sont connus: la diffusion clonale de génotypes résistants et la diffusion des déterminant....
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Protocole
NOTE: Les souches et les matériaux utilisés dans ce travail sont énumérés dans le tableau 1 et la Table des matières, respectivement. Dans les expériences de transmission, N315 et COL cfr dérivés -positif ont été utilisés en tant que donneurs du gène cfr (N315-45 et COL-45). Ces souches ont été obtenues précédemment par conjugaison, en utilisant comme donneur souche Staphylococcus epidermidis un cfr clinique (ST2), suivant le protocole de conjugaison standard (voir ci - dessous). Cette souche nourrissait le gène cfr sur un plasmide pSCFS7-like 7.
1. Co....
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Résultats
Les résultats représentés ici ont été publiées précédemment (adapté de la référence 7 avec la permission de l'éditeur). Nous avons étudié les voies de transmission potentielles du gène cfr, ce qui provoque une faible résistance au niveau du linézolide et l'expression du phénotype de résistance PhLOPSA 14, 15 dans les souches de S. aureus, en étudiant trois mécanismes de HGT.
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Discussion
Ce travail décrit les trois méthodes principales pour étudier la HGT des déterminants génétiques de S. aureus. Bien que la transduction et la conjugaison ont été étudiés depuis des décennies, l'existence de la transformation naturelle a été récemment reconnue 2. Ainsi, S. aureus est équipé de tous les trois principaux modes de HGT, et de tester chacun d'entre eux est nécessaire pour clarifier les voies de diffusion possibles des déterminants génétiques. Le but de c.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Remerciements
Ce travail a été en partie soutenu par la Takeda Science Foundation, la contribution académique de Pfizer et la bourse postdoctorale JSPS pour les chercheurs étrangers (FC).
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Bouillon de Soja Tryptique (TSB) ; | Becton Dickinson ; | ||
| perfusion cerveau-cœur (BHI) | Becton Dickinson ; | ||
| Bouillon nutritif n ° 2 | Oxoid | CM0067 | |
| Gélose au sang de mouton | Eiken Chemical Co., Ltd. | E-MR96 | Gélose de soja tryptique ajoutée avec 5 % (v/v) de sang de mouton selon le fabricant. |
| Poudre d’agar | Wako Pure Chemical Industries | 010-08725 | |
| Citrate de sodium (citrate trisodique dihydraté) | Wako Pure Chemical Industries | 191-01785 | |
| Ester de cellulose maillé 0,45 &mu ; L HAWG filtre | Merck Milipore | HAWG 02500 | |
| QIAfilter Plasmide Kit Midi | QIAGEN | 12243 |
Références
- Lindsay, J. A. Genomic variation and evolution of Staphylococcus aureus. IJMM. 300, 98-103 (2010).
- Morikawa, K., et al. Expression of a cryptic secondary sigma factor gene unveils natural competence for DNA transformation in Staphyloco....
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Réimpressions et autorisations
