هنا ، يتم وصف طرق محسنة لإنشاء نماذج في الجسم الحي وفي المختبر للتنكس الدهني الكبدي وتحليل الأنماط الظاهرية الدهني والمعلمات الفسيولوجية ذات الصلة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
يعد إنشاء نظام من الإجراءات لتوصيف التنكس الدهني الكبدي نوعيا وكميا في الجسم الحي وفي المختبر أمرا مهما لدراسة التمثيل الغذائي في الكبد. هنا ، يتم وصف العديد من المقايسات لقياس النمط الظاهري ومعلمات التنكس الدهني الكبدي بشكل شامل في نماذج الفئران وخلايا الكبد.
من خلال الجمع بين الأساليب الفسيولوجية والنسيجية والكيميائية الحيوية ، يمكن استخدام هذا النظام لتقييم تقدم تنكس دهني كبدي. في الجسم الحي ، توفر قياسات وزن الجسم والرنين المغناطيسي النووي (NMR) فهما عاما للفئران بطريقة غير جراحية. يحدد تلطيخ الهيماتوكسيلين والإيوسين (H & E) وتلوين الزيت الأحمر O التشكل النسيجي وترسب الدهون في أنسجة الكبد في ظل ظروف الحمل الزائد للمغذيات ، مثل التغذية الغذائية عالية الدهون. بعد ذلك ، يتم عزل محتويات الدهون الكلية عن طريق استخراج الكلوروفورم / الميثانول ، والذي يتبعه تحليل كيميائي حيوي للدهون الثلاثية والكوليسترول. علاوة على ذلك ، يتم علاج خلايا الكبد الأولية للفئران بارتفاع الجلوكوز بالإضافة إلى الأنسولين لتحفيز تراكم الدهون ، وهو نموذج فعال في المختبر لتقليد ارتفاع السكر في الدم الناجم عن النظام الغذائي وفرط الأنسولين في الدم في الجسم الحي. بعد ذلك ، يتم قياس ترسب الدهون عن طريق تلطيخ الزيت الأحمر O واستخراج الكلوروفورم / الميثانول. يحدد تلطيخ الزيت الأحمر O الأنماط الظاهرية الدهنية الكبدية البديهية ، بينما يحدد تحليل استخراج الدهون المعلمات التي يمكن تحليلها إحصائيا. البروتوكولات الحالية تهم العلماء في مجالات أمراض الكبد الدهني ومقاومة الأنسولين ومرض السكري من النوع 2.
المقدمة
السمنة مشكلة صحية المزدهرة في البلدان المتقدمة والنامية. تم الإبلاغ عن أن تكون واحدة من شروط التعايش كثيرا ما يرتبط مع غير الكحولي مرض الكبد الدهني (NAFLD)، مع انتشار تتراوح بين 30 و 100 في المئة في المرضى الذين يعانون NAFLD 1. ويرجع ذلك إلى ارتباط قوي بين الكبد الدهني والسمنة، وتستخدم يعانون من السمنة المفرطة (ديو) نماذج الماوس التي يسببها النظام الغذائي على نطاق واسع لدراسة الآليات الجزيئية المعقدة المرتبطة تطوير NAFLD 2، 3، 4، 5، 6. تشحم الكبد هو أول مرحلة من NAFLD، وأنها يمكن أن تتطور إلى التهاب الكبد الدهني غير الكحولي (ناش)، تليف الكبد، وفي نهاية المطاف، سرطان الكبد 7. ولذلك، فإن الهدف العام من هذه الطريقة لتوليد الحيوانات والخلايا نماذج من الظروف steatotic الكبدية والعلاقات العامةبروتوكولات وإجراءات تفصيلية أوفيد لقياس الدهون كفاءة ودقة. هذه النماذج والقياسات هي مفيدة أيضا للتحقيق في الاضطرابات الأيضية الأخرى، مثل مقاومة الأنسولين وداء السكري من النوع 2.
كما تم تحديد السمنة لتكون واحدة من عوامل الخطر الرئيسية للNAFLD، ونسبة عالية من الدهون، ويستخدم عالية السكروز النظام الغذائي (HFHS) أن يقلد على النمط الغربي عالية من الدهون نظام غذائي للحث على السمنة في الفئران. وفي وقت لاحق، ودرجة تشحم الكبد يمكن تقييم باستخدام أساليب مختلفة. أولا، ووزن الجسم وتحليلها وتكوين هيئة من الرنين المغناطيسي النووي (NMR) تظهر تراكم الدهون خلال فترة الرضاعة. كتلة الدهون والكتلة الخالية من الدهن يمكن قياسها بطريقة غير الغازية وفي الوقت الحقيقي.
وبالإضافة إلى ذلك، يتم استخدام التصوير بالرنين المغناطيسي (MRI) لإظهار كل من الجسم كله، وتوزيع الكبد من الدهون. إشارة الرمادي لتحليل التصوير بالرنين المغناطيسي يمكن تحويلها إلى مقروءا الصورة الزائفة اللون، وشدةوالرمادي واللون هو-نصفي للقياس الكمي. توفر هذه التقنية مزايا فريدة لقياس تراكم الدهون في الحيوانات الحية. ثانيا، التحليل النسيجي للكبد هو الأسلوب الأكثر شيوعا لتحديد تشحم الكبد. يوفر الهيماتوكسيلين ويوزين (H & E) تلطيخ المعلومات النسيجية، مثل التشكل الكبدية وتسلل بلعم، في حين يظهر النفط الأحمر يا تلطيخ حجم وموضع من قطرات الدهون في خلايا الكبد. ثالثا، تحليل محتوى الدهون باستخدام استخراج الكلوروفورم / الميثانول هو القياس الدقيق وكمية من الدهون الكبدية. ويمكن قياس مجموع مستويات الدهون الثلاثية والكوليسترول مع أساليب الكيمياء الحيوية. الأهم من ذلك، تحليل استخلاص الدهون والزيوت الأحمر يا تلطيخ يمكن أن تستخدم أيضا في معالجة جينيا أو صيدلانيا تعامل خلايا الكبد.
وميزة هذا الأسلوب هو استخدامه من النهج الأمثل متعددة لتوليد نماذج steatotic الكبديةولتوصيف شامل الظواهر سواء في المجراة في المختبر. يمكن للنماذج DIO الماوس ألخص في علم الأمراض والتمثيل الغذائي الظواهر من مرض الكبد الدهني البشري. المعلمات الأيضية الأخرى في البشر يمكن تكرارها في هذا النموذج، وكذلك 8. توليد نموذج الكبدية steatotic ردا على ارتفاع نسبة الجلوكوز بالإضافة إلى الأنسولين هو فعالة ومفيدة، ويتغلب على الحد من عمل الماوس مكلفة وتستغرق وقتا طويلا. معا، وهذه الأساليب هي كافية وضرورية لدراسة الخلل الدهون الكبدية ومقاومة الأنسولين خلال الحمولة الزائدة من المغذيات.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تمت الموافقة على جميع البروتوكولات التجريبية الحيوان من قبل لجنة رعاية الحيوان واستخدام المؤسسية في معهد علوم التغذية والمعاهد شنغهاي للعلوم البيولوجية، الأكاديمية الصينية للعلوم (شنغهاي، الصين).
1. DIO ماوس نموذج
- التغذية HFHS
- تغذية الذكور البالغ من العمر ثمانية أسابيع C57BL / 6 الفئران مع HFHS التي تحتوي على 40 سعرة حرارية٪ من الدهون و 40 سعر حراري٪ سكروز. إيوائهم في 12 ساعة الظروف دورة الظلام الخفيفة.
- الحفاظ على الفئران في HFHS حالة اتباع نظام غذائي الرضاعة لمدة أربعة إلى ستة عشر أسبوعا. تحقق الأسبوعية وزن الجسم.
- تحليل تكوين الجسم وتحليل الصور الزائفة اللون
- تعرض الفئران لتحليل الجسم تكوين محلل.
- تأمين واعية، والفئران لا تخدير في أنبوب بلاستيكي في. قياس الدهون في الجسم كتلة، كتلة العجاف، والسوائل باستخدام نظام الرنين المغناطيسي النووي، كما هو موضح سابقا (2).
- مسح الجسم كله من كل فأر باستخدام نظام التصوير بالرنين المغناطيسي.
- تخدير الفئران مع 1٪ آفيرتين عن طريق الحقن داخل الصفاق (25 ميكرولتر / ز) وإجراء تحليل التصوير في أنابيب زجاجية المتخصصة.
ملاحظة: عملية التصوير يستمر لمدة ما يقرب من 0.5 ساعة لكل الماوس. عندما يتم الانتهاء من قياس، وعودة الفئران إلى قفص.
- تخدير الفئران مع 1٪ آفيرتين عن طريق الحقن داخل الصفاق (25 ميكرولتر / ز) وإجراء تحليل التصوير في أنابيب زجاجية المتخصصة.
- مسح أجسام كاملة من الفئران في ظهري، والمتوسطة، والطبقات البطنية. فحص الكبد في الاتجاه الرأسي. استخدام 0.55 T المغناطيس والمعلمات فعال التالية: K مساحة = 192 × 256 ميكرون، سمك الباب = 3 مم، TE = 14.8 مللي، TR = 400 مللي ثانية، FOVRead = 100 ملم، FOVPhase = 100 مم، وعدد من مسح = 8. المسح الضوئي باستخدام حالة المغناطيسية نفسها لجميع الفئات من الفئران.
- خريطة صورة رمادية على صورة شبه لون وفقا لشدة إشارة 9.
- تعرض الفئران لتحليل الجسم تكوين محلل.
- القتل الرحيم الماوس
- تعقيم dissectiأدوات نانوغرام، مثل ملقط ومقص.
- صب الأيزوفلورين كافية على منشفة ورقية، والسماح للالأيزوفلورين تتطاير في وعاء زجاجي. تأكد من أن الفئران يصرح باستخدامها من قبل الأيزوفلورين.
- إصلاح الفئران على طاولة العمليات. رش كل البطن مع 75٪ من الإيثانول، وجعل شق في الأدمة من عملية الخنجري باستخدام مقص، وتمزق الأدمة بالطول من خلال خط الوسط مع يد لفضح الصفاق.
- المشبك عملية الخنجري مع ملقط وقطع breadthwise البريتوني من خلال الجزء السفلي من الأضلاع لفضح الأحشاء.
- جمع الدم في أنابيب المغلفة EDTA من ثقب في القلب.
- قطع الحجاب الحاجز على طول الكبد وإزالة بعناية الكبد من enterocoelia باستخدام مقص غرامة. قطع ثلاث قطع من أنسجة الكبد للقياسات الدهون التالية: أ) 6 × 3 × 3 مم ل H & E تلطيخ، ب) 6 × 3 × 3 مم للنفط الأحمر يا تلطيخ، وج) 20-40 ملغ من الكبد لالكلوروفورم / استخراج الميثانول.
- H & E تلطيخ
- إصلاح الكبد في 4٪ مخزنة الفوسفات الفورمالين خلات عند 4 درجات مئوية خلال الليل ثم تضمين ذلك في شمع البارافين.
- قطع أقسام البارافين (5 ميكرون)، وجبل لهم على الشرائح الزجاجية لH & E تلطيخ، كما هو موضح سابقا 3، 10.
- النفط الأحمر يا تلطيخ
- إعداد ريجنت
- يعد حل العاملة النفط الأحمر O مع 10٪ من الفورمالين، 60٪ الأيزوبروبانول، الهيماتوكسيلين، والجلسرين هلام. حل 0.5 غرام من زيت أحمر يا مسحوق مع 100 مل من الأيزوبروبانول وتسخينها في C حمام 60 درجة لجعل 0.5٪ محلول المخزون.
- المخفف بالماء المقطر مزدوجة ([ده 2 O) في نسبة 3: 2 (3 مل من محلول المخزون و 2 مل من ده 2 O). تصفية حل العاملة واسمحوا الوقوف لمدة 10 دقيقة على الأقل في درجة حرارة الغرفة.
- تضمين الكبد في درجة الحرارة المثلى القطع (أكتوبر) مركب في ا ف بlastic مربع التضمين. تجميده عند -20 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. قطع عليه إلى أقسام 8 ميكرومتر في مشراح التجميد، تركيب الأنسجة على شريحة، ووضعه في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة.
- ضع منشفة ورقية في الجزء السفلي من حوض استحمام في تلطيخ وصب كمية صغيرة من 10٪ من الفورمالين لتبلل منشفة ورقية. ضع الشريحة في حوض تلطيخ وإصلاح الأجزاء المجمدة في أبخرة الفورمالدهايد لمدة 5 دقائق في 4 درجات مئوية.
- تراجع الشرائح في 60٪ الأيزوبروبانول في حوض تلطيخ لمدة 3 ق. التكرار مرة واحدة.
- إضافة بضع قطرات من محلول تعمل النفط الأحمر O إلى الشريحة لتغطية جميع الأنسجة واحتضان لمدة 15 دقيقة. حماية الأنسجة من الضوء في درجة حرارة الغرفة.
- شطف الشريحة في الجديد 60٪ الأيزوبروبانول في حوض تلطيخ لمدة 3 ق. كرر مرتين.
- شطف بلطف الشريحة من خلال الماء المقطر مرتين وإزالة المياه في جميع أنحاء الأنسجة. تأكد من عدم تجفيف الأنسجة.
- ضع الشريحة في الهيماتوكسيلين لمدة 1 دقيقة وشطف بلطف بماء الصنبور لمدة 5-10دقيقة. شطف بلطف الشريحة في الماء المقطر مرتين والحفاظ على ذلك في الماء المقطر حتى على استعداد لوضع على ساترة.
- تسخين هلام الجلسرين في الميكروويف ووضع عدة قطرات على رأس الأنسجة. وضع بلطف ساترة على رأس والحرص على عدم تشكيل فقاعات.
- مراقبة وصمة عار تحت المجهر والتقاط الصور المميزة باستخدام 20X 40X والأهداف.
- إعداد ريجنت
- قياس نسبة الدهون في الكبد
- وضع أنسجة الكبد تشريح في أنبوب جديد للطرد المركزي 2-مل البلاستيك. التجانس في 1 مل من برنامج تلفزيوني مع الخالط ونقل المحللة إلى أنبوب جديد زجاج 15 مل.
- إضافة 5 مل من الكلوروفورم / الميثانول (2: 1، ت / ت) حل، دوامة الخليط بقوة لمدة 1 دقيقة، واسمحوا الوقوف لمدة 2 ساعة على الجليد.
- أجهزة الطرد المركزي في 1650 x ج لمدة 10 دقيقة في 4 درجات مئوية. يجب فصل الخليط إلى 3 طبقات: الطبقة العليا والميثانول، والقرص البروتين المتوسطة، والكلوروفورم السفلي والدهون.
- تران SFER مرحلة القاع في أنبوبة زجاجية جديدة باستخدام الزجاج باستور الماصة. ليست هناك حاجة للحصول على كل قطرة من جزء السفلي. تعيين أنبوب جانبا على الجليد.
- إضافة 600 ميكرولتر من 4 مم MgCl 2 و 1.5 مل من الكلوروفورم إلى جزء طاف المتبقية في الأنبوب السابق ودوامة بقوة. احتضان على الجليد لمدة 30 دقيقة، وأجهزة الطرد المركزي في 1650 x ج لمدة 10 دقيقة على 4 درجات مئوية.
- الجمع بين مرحلة القاع مع أول أنبوب مرحلة القاع باستخدام الماصة باستور. تجاهل الطبقات العليا والمتوسطة.
- تتبخر الكلوروفورم تحت غاز النيتروجين في C حمام 37 درجة. غسل الجانبين من أنابيب الزجاج بدقة مع 200 ميكرولتر من 1٪ تريتون X-100 / الكلوروفورم (ت / ت). تتبخر تحت غاز النيتروجين. حل الدهون مع 200 ميكرولتر من ده 2 O ودوامة جيدا لجعل مستحلب النهائي.
- قياس إجمالي الدهون الثلاثية (TG) والكولسترول (TC) مستويات باستخدام الدهون الثلاثية أو الكوليسترول عدة وفقا لبروتوكول الشركة المصنعةXREF "> 3.
ملاحظة: القيم الدهون هي طبيعية لتلك التي تركيزات البروتين في جناسة الأولي، على النحو الذي يحدده البروتين الكمي 3.
2. الابتدائية ماوس الكبدية نموذج
- عزل خلايا الكبد الأولية الماوس
- تخدير كل فأر مع هيدرات كلورال 6٪ (10 ميكرولتر / ز البريتونى).
- عزل خلايا الكبد الأولية، كما هو موضح سابقا (10). تنمو الخلايا على coverslips الزجاج المغلفة الكولاجين في لوحة 6 جيدا للنفط الأحمر يا تلطيخ. لاستخراج الدهن، البذور الخلايا على 10 سم صحن الثقافة خلية 10.
- العلاج بالخلايا والنفط الأحمر يا تلطيخ
- استبدال المتوسطة مع 2 مل من المتوسط الجوع واحتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة. علاج مع 30 ملي الجلوكوز والأنسولين 100 نانومتر. احتضان في 37 درجة مئوية حاضنة الثقافة لمدة 24 ساعة.
- نضح في المتوسط. إضافة 2 مل من برنامج تلفزيوني ودوامة بلطف لشطف المتوسطة. التكرار مرة واحدة.
- إصلاح ساترة إلى الشريحة مع الشريط المطاطي. كشف الخلايا الملتصقة على السطح الخارجي. أداء تلطيخ النفط الأحمر يا كما هو موضح أعلاه (الخطوة 1.5).
ملاحظة: مستويات القاعدية من تراكم الدهون وحفز مع ارتفاع نسبة الجلوكوز بالإضافة إلى العلاج الأنسولين بعد التجويع المصل. وتصور قطرات الدهن بالزيت الأحمر يا تلطيخ.
- قياس نسبة الدهون
- علاج خلايا الكبد مع ارتفاع نسبة الجلوكوز بالإضافة إلى الأنسولين في نفسه شرط (الخطوة 2.2.1). إضافة 1 مل من برنامج تلفزيوني على كل طبق خلية ثقافة 10 سم. كشط الخلايا وحصادها في أنابيب الزجاج 15 مل الجديدة، والتي يتم نقل aliquots من 100 ميكرولتر إلى الطازج أنابيب 1.5 مل لتقدير البروتين.
- إضافة 4 مل من الكلوروفورم / ميثانول (2: 1، ت / ت) إلى 900 ميكرولتر المتبقية من الخلايا. يصوتن لالتقريبية 20 الصفافير ثم دوامة بقوة على إطلاق سراحالدهون في الخلايا. احتضان الخليط على الجليد لمدة 2 ساعة. تنفيذ عملية الاستخراج الدهون (الخطوة 1.6).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
كما هو مبين في الشكل 1A، تم زيادة وزن جسم الفأر إلى 45 ± 1.2 غرام بعد 16 أسبوعا من HFHS التغذية، وهو ما يقرب من 1.5 أضعاف أعلى من مجموعة التغذية الحمية تشاو. تكوين هيئة NMR تحليلات تظهر كتلة الدهون والكتلة الخالية من الدهن من الفئران يشار إلى (الشكل 1B). تم تحديد توزيعات الدهون في الجسم كله ومن الكبد عن طريق التصوير بالرنين المغناطيسي، وأظهرت الصور التمثيلية الزائفة اللون في العيش، والفئران واعية في الشكل 1...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
NAFLD هو عبارة عن سلسلة من أمراض الكبد التقدمية التي ترتبط مع متلازمة التمثيل الغذائي، والسمنة، ومقاومة الأنسولين، أو من النوع 2 من مرض السكري (T2DM) 11. السمة المميزة لNAFLD هو تنكس دهني، وتراكم الدهون في خلايا الكبد. هنا، يتم تقديم مجموعة متنوعة من الأساليب لتوصيف الظواهر والمعلمات من تشحم الكبد باستخدام الفئران ديو وخلايا الكبد الماوس الابتدائي. هذا الإجراء يمكن أن تكون مفيدة لتوضيح الآليات الجزيئية للNAFLD وغيرها من الأمراض الاستقلابية ذات الصلة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب تعلن أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.
التمويل: وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (رقم 81270930، 31471129، 31671224 و) ومئة وزنة البرنامج التابع للأكاديمية الصينية للعلوم (2013OHTP04) إلى YL
شكر وتقدير
نحن نقدر Feifei Zhang للمناقشات المفيدة. نحن ممتنون ل Jing Gao و Yixuan Sun للمساعدة الفنية و Zhengshuai Liu و Fengguang Ma للدراسات الحيوانية.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| مركب O.C.T | SAKURA | 4583 | |
| Oil Red O | Sigma | O0625-25G | |
| Infinity Triglycerides kit | Fisher & nbsp; مجموعة TR22421 | ||
| Fisher الكولاجين | العلمي TR13421 | ||
| النوع الأول ، ذيل الجرذ | Millipore | 08-115 | |
| DMEM (منخفض الجلوكوز) | Invitrogen | 11885-092 | |
| البنسلين / الستربتومايسين | Invitrogen | 15140-122 | |
| FBS | Invitrogen | 10099141 | |
| PBS | cellgro | R21-040-CVR | |
| HBSS | cellgro | 20-021-CV | |
| الأنسولين | TOCRIS Bioscience | 3435 | يذوب في PBS ، 1 ملي مولار للمخزون |
| الجلوكوز | سيجما | G8270-100G | |
| المجهر | أوليمبوس | BX53 | |
| مضخة التمعج | Longerpump | BT100-2J | |
| طبق ثقافة الخلية 10 سم | Corning | 420167 | |
| 6 آبار | اختبار Corning | 3516 | |
| BCA | Beyotime | P0010 | |
| تقنية الرنين المغناطيسي النووي | Niumag | MiniQMR23-060H-I | |
| حمية سوركوز عالية الدسم (HFHS) | الحميات البحثية | D12327 |
المراجع
- Angulo, P. Medical progress - Nonalcoholic fatty liver disease. New England Journal of Medicine. 346 (16), 1221-1231 (2002).
- Chen, X., et al. Hepatic ATF6 Increases Fatty Acid Oxidation to Attenuate Hepatic Steatosis in Mice through Peroxisome Proliferator-Activated Receptor Alpha. Diabetes. 65 (7), 1904-1915 (2016).
- Li, Y., et al. AMPK phosphorylates and inhibits SREBP activity to attenuate hepatic steatosis and atherosclerosis in diet-induced insulin-resistant mice. Cell Metab. 13 (4), 376-388 (2011).
- Li, Y., et al. Hepatic SIRT1 attenuates hepatic steatosis and controls energy balance in mice by inducing fibroblast growth factor 21. Gastroenterology. 146 (2), 539-549 (2014).
- Esau, C., et al. miR-122 regulation of lipid metabolism revealed by in vivo antisense targeting. Cell Metabolism. 3 (2), 87-98 (2006).
- Kanda, H., et al. MCP-1 contributes to macrophage infiltration into adipose tissue, insulin resistance, and hepatic steatosis in obesity. Journal of Clinical Investigation. 116 (6), 1494-1505 (2006).
- Cohen, J. C., Horton, J. D., Hobbs, H. H. Human fatty liver disease: old questions and new insights. Science. 332 (6037), 1519-1523 (2011).
- Hebbard, L., George, J. Animal models of nonalcoholic fatty liver disease. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 8 (1), 35-44 (2011).
- Chen, Y., et al. Highly effective inhibition of lung cancer growth and metastasis by systemic delivery of siRNA via multimodal mesoporous silica-based nanocarrier. Biomaterials. 35 (38), 10058-10069 (2014).
- Gong, Q., et al. Fibroblast growth factor 21 improves hepatic insulin sensitivity by inhibiting mammalian target of rapamycin complex 1 in mice. Hepatology. 64 (2), 425-438 (2016).
- Anstee, Q. M., Targher, G., Day, C. P. Progression of NAFLD to diabetes mellitus, cardiovascular disease or cirrhosis. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 10 (6), 330-344 (2013).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
