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방법 논문

가속된 동맥 경화의 토끼 모델: 장 골 동맥 풍선 상해의 방법 론 적 관점

12.3K 조회수

⸱

DOI:

10.3791/55295

⸱

2017년 10월 3일

 ,  ,  ,  , 

* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

동맥 경화 증의 동물 모델 메커니즘을 이해 하 고 패 개발 또는 파열, 산업화 된 세계에서 죽음의 주요 원인이 방지 하기 위해 새로운 접근을 조사 하기 위해 필수적입니다. 이 프로토콜 풍선 부상과 콜레스테롤 풍부한 다이어트의 조합을 사용 하 여 토끼 장 골 동맥에 동맥 경 화성 플 라크를 유도.

초록

급성 관상 동맥 증후군 관상동맥 폐색 동맥 경 화성 플 라크 개발 및 파열에서에서 유래한 공업화 한 세계에서 사망의 주요 원인입니다. 뉴질랜드 화이트 (NZW) 토끼는 동맥 경화 증의 연구를 위한 동물 모델로 서 널리 사용 됩니다. 그들은 개발 atherogenic 다이어트; 먹 일 때 자연 스러운 병 변 그러나,이 4-8 개월의 긴 시간이 필요합니다. 더욱 강화 하 고 가속 atherogenesis, atherogenic 다이어트와 기계적 내 피 상해는 종종 사용 됩니다. 유도 하는 토끼의 동맥 경 화성 플 라크에 대 한 제시 절차 atherogenic 다이어트 먹이 NZW 토끼의 왼쪽된 장 골 동맥에 피를 방해 하는 풍선 카 테 터를 사용 합니다. 풍선 카 테 터로 인 한 이러한 기계적 손상 시간 종속 방식에서 neointimal 지질 축적을 시작 하는 염증 성 반응의 사슬을 유도 합니다. 동맥 경 화성 플 라크 풍선 부상 쇼 neointimal 두껍게 광범위 한 지질 침투와 높은 평활 근 셀 내용, 대 식 세포의 존재에 따라 거품 세포 파생. 이 기술은 간단 하 고, 재현 고 제어 길이 장 골 동맥 내 플 라크를 생성 한다. 모든 절차는 20-30 분 이내 완료 됩니다. 절차는 낮은 사망률과 안전 하며 또한 상당한 내 병 변 취득에 높은 성공. 풍선 카 테 터의 절차 2 주 이내에 동맥 경화 동맥 상해 결과 유도 한다. 질병 병리학을 조사를 위해이 모델을 사용할 수 있습니다 진단 이미징 새로운 치료 전략을 평가 하 고.

서론

취약 한 동맥 경 화성 플 라크의 파열1선진국 사망의 주요 원인 중 하나입니다. 지난 수 십년 동안 연구 패 진행에 관련 된 여러 분자 및 세포 메커니즘을 펼쳐는, 뿐만 아니라 질병 진행의 복잡 한 메커니즘을 해명 뿐만 아니라 새로운 테스트 노력 필요 아직도 계속 치료 접근 한다. 여러 동물 모델 연구는 동맥 경화를 제안 되었습니다. 유전자 조작, 콜레스테롤 먹이 또는 기계적 피 상해는 쥐, 토끼 또는 minipigs를 포함 하 여 동맥 경화의 가장 동물 모델에서 공유 하는 표준 전략. 이러한 가운데, NZW 토끼에 민감합니다 콜레스테롤 다이어트 동안 정상적인 쥐와 생쥐 마음이 크게 식이 콜레스테롤2,,34를 흡수 하지 않습니다. 토끼는 저절로 대동맥 병 변 세포 콜레스테롤 풍부한 다이어트5,6먹 일 때 일부 섬유 구성 요소와 함께 풍부한 개발. 그러나, 동맥 경 화성 plaquesby 콜레스테롤 다이어트 혼자6,

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프로토콜

이 실험 프로토콜 Cantonal 수의 사무실, Fribourg는 스위스 연방 수의 사무실, 스위스 (FR 2015/58)에 의해 승인 되었습니다.

참고: 남성 NZW 토끼 2.8 3.2 k g 사이 무게 사용 되었다. 동물 (12 h 빛 및 어두운 주기, ad libitum 물과 식량 제공) 기존의 조건 하에서 보관 되어 있었다. 풍선 노출 전에 동물 1 주 동안 그들은 정상적인 차 다이어트 지 루 했다에 대 한 acclimated 했다. 순응의 1 주 후 토끼 높은 지방 (8.6%)의 구성 하는 atherogenic 다이어트에 전환 했다 하 고 포화 지방산 205 mg/kg (1%) 콜레스테롤 다이어트 전체 연구 기간에 대 한. 왼쪽 장 골 동맥에서 풍선 손상 다이어트 개시 후 1 주 수행 및 동물 풍선 부상 4 주 또는 2 주 후 희생 되었다.

1. 수술 전 절차

  1. 유리 구슬 소독 기 또는 다른 적합 한 악기와 함께 사용 하기 전에 모든 수술 기구를 소독.
  2. 준비 풍선 카 테 터 어셈블리를 확인 하 고.
    1. 첨부 1 mL luer 잠금 주사기 luer 잠금 부분 풍선 카 테 터의 정상적인 염 분으로 가득합니다. 신중 하 게 덫을 놓은 공기의....

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결과

장 골 동맥의 풍선 부상 합병증 (그림 1) 없이 성공적으로 수행 되었다. 총 수술 시간 30 분 부상에 대 한 20에서 배열 했다 수행 하나의 장 골 동맥, 및 두 동맥에 대 한 35 ~ 45 분. 토끼 풍선 부상 후 1 시간 이내 복구. 모든 동물 상당한 체중 감소 없이 건강 한 나타났다. 아니 감염, 부 종 또는 동맥 혈전 증 발생 했습니다. 상처 영역 봉합 사이트에서 몇 가지 가벼운 섬유 증 외 정상적 이었다. Atherogenic 다이어트 먹이의 4 주, 다음 토끼 전시 콜레스테롤 혈 증 44 ±의 18 m m/l.

그림 2A, 그림 2E, 그리고 그림 2I 표시 오른쪽 손상 되지 않은 장 골 동맥 (풍선 부상 .......

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토론

토끼 장 골 동맥 경화 모델은 아 테 롬 연구에서 널리 이용 된다. 이 프로토콜은 토끼 빠르게 자발적인 병 변만 콜레스테롤 다이어트와 함께 개발에 비해 더 심각 하 고 고급 패 개발. 중요 한 것은, 동물 수술에서 신속 하 게 복구합니다.

Atherogenesis 위한 주요 자극은 endothelium 부상 하 고 혈관 벽26distends 풍선 카 테 터로 인 한 기계적 손상 이다. 이 이렇게 대 식 세포 신규 모집 및 지질 축적 때 hypercholestorolemic 다이어트, 혈관 평활 근 세포 이동과 확산, 향상 된 매트릭스와 관련 된 염증으로 특징 개장 응답 유도 합성, 고 시간 종속 패션15,16에 침략 neointima의 설립. 풍선 카 테 터 삽입 절차의 가장 중요 한 부분입니다. 강제로 삽입 풍선 피하기 위해 주의 .......

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공개 사항

저자 아무 경쟁 금융 관심사를 선언합니다.

감사의 글

이 작품은 스위스 국립 과학 재단 부여 150271에 의해 지원 되었다.

....

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
뉴질랜드 흰 토끼찰스 리버 연구소, 프랑스Cre:KBL(NZW)
콜레스테롤이 풍부한 다이어트Ssniff spezialdiä tenSsniff EF K 고지방 및 콜레스테롤
유리 구슬 살균기-Germinator 500VWR, Leicestershire, UK101326-488
Fogarty 풍선 색전절제술 카테터, 2 FrenchEdwards Lifesciences, Switzerland120602F일회용
전용 Luer Lock SyringeBecton, Dickinson and Company, USA309628
Thermopad Type 226Solis, Swiss AG397387
Buprenorphine- TemgesicReckitt Benckiser AG, Switzerland7.68042E+12
IsofluranePiramal Critical Care, Inc, Bethlehem, PA 180172667-46-7
마취 machine-combi-vet Base 마취 시스템Rothacher Medical GmbH, 스위스CV 30-301-A
Cardell touch 수의학 바이탈 사인 모니터Midmark, Ohio, USA8013-001
안과 연고-HumigelVirbac, France
동물 이발기Aesculap AG, GermanyGT420
소독제-베타딘 용액MundipharmaMedicalCompany, Switzerland14671-1203
Dumont #7 ForcepsFST Germany11274-20
중소형 마이크로가위Medline International, 스위스, Sà rlUC4337
미세혈관 클램프FST, 독일18051-28
파파베린ESCA 화학, 스위스RE 356 803
Vein PickHarvard Apparatus, Cambridge, UK72-4169일회용
Laboratorium Dr. G. Bichsel AG, 스위스1330055
Polysorb 5-0 봉합사Covidien AG, 스위스UL 202모노필라멘트
Sulfadoxine 및 Trimethoprim-TrimetazolWerner Stricker AG, 스위스Swissmedic Nr. 50'361
방부제-octeniseptSchü LKE & Mayr AG, 스위스GTIN: 4032651214068
인산염 완충 식염수Roth1058.1
이소부탄올-2-메틸부탄Sigma-Aldrich, 스위스M32631-1L
최적 절삭 온도 화합물-Tissue-TekVWR Chemicals, 벨기에25608-930
저온 유지 장치Leica, Glattbrugg, 스위스Leica CM1860 UV
유리 슬라이드- Superfrost PlusThermo Scientific4951PLUS4
Mayer's HaematoxylinSigma-Aldrich, SwitzerlandMHS32-1L
Eosin 0.5% aq.Sigma-Aldrich, 스위스HT110232-1L
오일 레드 OSigma-Aldrich, 스위스O0625-25G
α-평활근 액틴 항체Abcam, UK.ab7817
대식세포 클론 RAM11 항체DAKO, 스위스M063301
HoechstAbcam, 영국.ab145596
Goat polyclonal Secondary 항체 (Chromeo 546)Abcam, UK.ab60316
Alexa Fluor 488/547Abcam, 영국.
글리세르겔 장착 매체, 수성DAKO, 스위스C056330
Movat 펜타크롬 염색용 헤마톡실린Sigma-Aldrich, 스위스H3136-25G
Movat 펜타크롬 염색용 염화철Sigma-Aldrich, 스위스157740-100G
Movat 염색용 요오드Sigma-Aldrich, 스위스207772-100G
Movat 펜타크롬 염색용 요오드화 칼륨Sigma-Aldrich, 스위스60400-100G-F
Movat 염색용 알시안 블루Sigma-Aldrich, 스위스A5268-10G
Movat 펜타크롬 염색용 강암Sigma-Aldrich, 스위스320145-500ML
Movat 펜타크롬 염색용 브릴리언트 크로세인 MOOSigma-Aldrich, 스위스210757-50G
Movat 펜타크롬 염색 용 산 FuchsinSigma-Aldrich, 스위스F8129-50G
Movat 펜타크롬 염색 용 티오 황산나트륨 Sigma-Aldrich, 스위스72049-250G
Movat 펜타 크롬 염색 용 포스 포 텅스텐 산Sigma-Aldrich, 스위스79690-100G
Crocin Movat 펜타 크롬 용 크로신 염색Sigma-Aldrich, 스위스17304-5G
EUKITT for Movat 펜타크롬 염색Sigma-Aldrich, 스위스03989-100ML
: 염수

참고문헌

  1. Mozaffarian, D., et al. Heart disease and stroke statistics--2015 update: a report from the American Heart Association. Circulation. 131, e29-e322 (2015).
  2. Boone, L. R., Brooks, P. A., Niesen, M. I., Ness, G. C. Mechanism of resistance to dietary cholesterol. J Li....

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