Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Диссекция и культура мышей эмбриональной почки

11.7K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/55715

⸱

17 мая 2017 г.

 , 
1Department of Neuroscience, Uppsala University, 2Department of Organismal Biology, Evolutionary Biology Center, Uppsala University

В этой статье

Краткое содержание

Этот протокол описывает метод выделения и культивирования метанефрических зачатков из эмбрионов мыши.

Аннотация

Цель этого протокола - описать метод вскрытия, выделения и культивирования метанефрических рудиментов мыши.

Во время развития почки млекопитающих две ткани-предшественники, уретеровая почка и метанефрическая мезенхима, общаются и взаимно индуцируют клеточные механизмы, чтобы в конечном итоге сформировать систему сбора и нефроны почки. Поскольку эмбрионы млекопитающих растут внутриутробно и поэтому недоступны для наблюдателя, была разработана культура органов. С помощью этого метода можно изучать эпителиально-мезенхимальные взаимодействия и клеточное поведение во время органогенеза почек. Кроме того, можно исследовать происхождение врожденных пороков развития почек и урогенитального тракта. После тщательного вскрытия метанефрические рудименты переносятся на фильтр, который плавает на питательной среде и может храниться в инкубаторе для культивирования клеток в течение нескольких дней. Однако необходимо знать, что условияИскусственно и может влиять на обмен веществ в ткани. Кроме того, проникновение испытываемых веществ может быть ограничено из-за внеклеточного матрикса и базальной мембраны, присутствующих в эксплантате.

Одним из главных преимуществ органной культуры является то, что экспериментатор может получить прямой доступ к органу. Эта технология дешевая, простая и допускает большое количество модификаций, таких как добавление биологически активных веществ, изучение генетических вариантов и применение передовых методов визуализации.

Введение

Почка млекопитающего происходит от двух первичных структур мезодермального происхождения: трубчатой эпителиальной мочеточниковой почки и метанефрической мезенхимы. Во время нефрогенеза мочеточниковая почка проникает в метанефрическую мезенхиму и разветвляется, образуя систему сбора. Метанефрическая мезенхима дает начало эпителиальным элементам нефронов. Эти процессы происходят точно по времени и пространственно координируются и инициируются взаимными индуктивными механизмами. Оба компонента ткани взаимодействуют друг с другом и влияют на морфогенез клеток.

В 1920-х годах именно Бойден выполнил in vivo обструкцию мезонефрического протока у курицы, предоставив первое указание на индуктивные взаимодействия, поскольку отделенная нефрическая бластема не может дифференцироваться1. Примерно в это же время были опубликованы первые успешные попытки культивировать куриные зачатки нефрии в висячей капле. Впоследствии была разработана органная культура для изучения тканевых взаимодействий в органогенезе млекопитающих. В 1950-х годах Гробштейн разработал метод, с помощью которого метанефрические рудименты можно культивировать на фильтре. Этот метод был модифицирован Саксеном, который поместил фильтр на экран типа Троуэлла в культуре dish1. С годами появилось множество модификаций и применений для органной культуры. Описанный здесь метод основан на технике Саксена, но является упрощенным, так как фильтры свободно плавают на среде, а диаметр питательной лунки лишь незначительно превышает диаметр фильтра, ограничивая нежелательное движение фильтра.

Культура целых органов - это классический, дешевый и простой, но мощный инструмент для исследования клеточных процессов и межклеточной коммуникации во время органогенеза. Культура органов позволяет проводить лечение биологическими агентами, такими как факторы роста, антитела, антисмысловые олигонуклеотиды, вирусы и пептиды, а также фармацевтическими соединениями и другими химическими веществами. Кроме того, функция генов может быть изучена с использованием эксплантов, полученных от генетически модифицированных мышей, или с использованием технологии индуцируемой инактивации генов, такой как система Cre-loxP. Это позволяет изучать генетические мутации, которые вызывают эмбриональную летальность до развития почки. Культивирование органов также может быть объединено с флуоресцентным мечением для отслеживания функции гена или линии и современными методами визуализации, которые позволяют осуществлять мониторинг поведения клеток в режиме реального времени2.

В конкретном примере, представленном здесь, было исследовано влияние передачи сигналов EphrinB2-активированного Eph-рецептора на морфологию ветвления мочеточниковой почки. Морфология мышей с двойным нокаутом EphA4/EphB2 предполагала несколько серьезных дефектов в развитии почек, которые были обнаружены уже на 11-й день эмбрионального развития (E11) и включали зачаток мочеточника, мочеточник и общий нефриальный проток3. Передача сигналов через рецепторы Eph требует кластеризации димера лиганд-рецептора dimer4. Для чрезмерной активации передачи сигналов Eph рудименты почек из эмбрионов мышей E11.5 культивировали в присутствии кластеризованного рекомбинантного EphrinB2-Fc. EphrinB2 является известным лигандом для рецептора EphA4, который экспрессируется в мочеточниковом зачатке tips3.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Мышей поддерживали в соответствии с законодательством Швеции и законодательством Европейского Союза (2010/63 / ЕС). Все процедуры были выполнены в соответствии с указаниями Шведского комитета по этике (разрешения C79 / 9, C248 / 11 и C135 / 14). Процедуры в Гейдельбергском университете по животным предметам были одобрены Regierungspräsidium Karlsruhe и сотрудниками отдела охраны животных в Гейдельбергском университете.

1. Подготовка реагентов и материалов для культуры

ПРИМЕЧАНИЕ. Используйте ламинарный вытяжной колпак, чтобы свести к минимуму загрязнение.

  1. В день диссекции один только Fc-кластер докомплекса или рекомбинантный химерный белок эфрина сливают с Fc человека путем его смешивания с антителами против козьего антитела Fc человека при молярном соотношении 1: 5 в стерильном физиологическом растворе с фосфатным буфером (PBS). Инкубировать в течение 1 ч при 37 ° С. 5 .
  2. Подготовить культуральную среду путем добавления модифицированной Дульбекко среды Игла: питательныйСмесь F-12 (DMEM / F12) с 1% пенициллина / стрептомицина (об. / Об.), 1% глутамина (об. / Об.), 1% инсулинтрансрин-селена (об. / Об.), Трансферрин и 1,5 мкг / мл амфотерицина.
    ПРИМЕЧАНИЕ: 10 мл среды достаточно для 16 эмбрионов.
  3. Добавить кластерный рекомбинантный раствор эфрина в конечной концентрации 20 мкг / мл в культуральную среду. Используйте кластерный человеческий Fc в качестве контроля.
  4. Приготовьте культуральные планшеты, добавив 500 мкл культуральной среды в каждую лунку стерильной 4-луночной планшеты с бесстолбным плоским дном из полистирола.
  5. Используя стерильные щипцы, аккуратно поместите один поликарбонатный мембранный фильтр с размером пор 5 мкм на лунку сверху среды. Перенесите подготовленную пластину в инкубатор (37 ° C / 5% CO 2 ). Убедитесь, что фильтр остается сухим на верхней поверхности и плавает.
    ПРИМЕЧАНИЕ. Один фильтр достаточно для двух почек анлагена.
  6. Используя лезвие бритвы, разрежьте приблизительно 30 наконечников пипетки (объем: 100 мкл) приблизительноY 1 мм от наконечника, чтобы получить более широкое отверстие. Поместите наконечники обратно в стойку для пипеток.

2. Пресечение метанефрических рудиментов на E11.5

  1. Пожертвуйте беременную мышей с задержкой в ​​E11.5 путем вывиха шейки матки (или используя метод, одобренный местным комитетом по этике).
  2. Удалите матку и эмбрионы, как описано Брауном и соавторами 6 . С этого момента вперед, работа под микроскопом рассечения.
  3. Используя щипцы для часовщика № 5, разрежьте эмбрион прямо под передними ногами. Используйте свежие чашки Петри для каждого эмбриона. Удалите ноги и хвост эмбриона. Для этого возьмите ткань, которую нужно удалить, с помощью одной пары пинцет-часовщиков № 5 и используйте концы второй пары для разрезания.
  4. Чтобы удалить массу вентрального органа, используйте кончики пары пинцет для бокового открытия стенки тела эмбриона в рострально-каудальном направлении.
    1. Вырезать поверхностно, параллельно tОн спинной аорты. Для ориентации используйте заполненную кровью и, следовательно, видимую дорсальную аорту. Тщательно отделите брюшную часть стенки тела от дорсальной части, используя кончики закрытых щипцов и переверните эмбрион. Вырезать стенку тела латерально в направлении от рострального к каудальному и использовать спинную аорту для ориентации, как и для предыдущей стороны.
  5. Как только брюшная стенка тела была отделена от спинного тела, возьмите ее одной парой щипцов и осторожно потяните, чтобы удалить ее, вместе с массой органа.
    ПРИМЕЧАНИЕ: метанефрический анлаген обычно остается прикрепленным к дорсальной стенке тела. Это овальные, ~ 200 мкм длинные структуры, расположенные на уровне задних конечностей.
  6. Держите спинной корпус тела с одной парой щипцов, с вентральной стороной вверх. Используя другую пару щипцов, захватите дорсальную аорту у ее рострального конца и осторожно отделите дорсальную аорту от дорсальной стенки тела.
    ПРИМЕЧАНИЕ. Обе метанефрические почки обычно остаются прикрепленнымиНа спинной аорте.
  7. Используя одну пару щипцов, отрежьте рострально к почковому анлагену, чтобы удалить аорту. Затем аккуратно отделите два почек анлагена, используя кончики щипцов.
  8. Тщательно очистите ненужную ткань от почек, используя кончики щипцов. Будьте осторожны, чтобы не повредить мезенхиму, так как повреждение может привести к неудовлетворительному росту и исключению эксплантата из дальнейшего анализа.
  9. Перенесите почечный анлаген отдельно с помощью пипетки микролитра и широко открытого наконечника пипетки в 10 мкл PBS к фильтру из поликарбонатной мембраны в 4-луночном планшете.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Из-за поверхностного натяжения эксплантат будет покрыт тонким слоем среды. Одного фильтра достаточно для двух почек-анлагена.
    1. Поместите каждый из двух почек anlagen в центре каждой соответствующей половины фильтра. Перенесите пластину обратно в инкубатор при 37 ° C / 5% CO 2 . Оставить планшет в инкубаторе до метанефрического рудникаИмплантаты со следующего эмбриона готовы для размещения на фильтре.
  10. Повторите шаги 2.3-2.9.1 для каждого эмбриона.
    ПРИМЕЧАНИЕ. При некоторой практике процедура вскрытия займет примерно 5 минут на эмбрион.
  11. Инкубируйте почечный анлаген в течение 3 дней при 37 ° C / 5% CO 2 .

3. Приготовление реагентов для фиксации и окрашивания

  1. Для приготовления 4% параформальдегида (PFA) в PBS без кальция и магния (мас. / Об.) Растворяют PFA при 60 ° C в PBS, непрерывно помешивая. Остудите до комнатной температуры и используйте бумажный фильтр для удаления оставшихся частиц. Алиготе и держать при 4 ° C для немедленного использования или замораживания для длительного хранения.
    ВНИМАНИЕ: PFA токсичен. Надевайте средства индивидуальной защиты, указанные в местных нормах безопасности, и работайте в вытяжном шкафу. Откажитесь от отходов в соответствии с установленными правилами и использованием специально предназначенных контейнеров для отходов.
  2. Для приготовления раствора для проницаемости разбавляют Triton X-100В PBS без кальция и магния до 0,3% (об. / Об.).
  3. Для приготовления блокирующего раствора добавьте 5% (об. / Об.) Козьей сыворотки и 0,1% Triton X-100 в PBS без кальция и магния. Добавляют азид натрия до конечной концентрации 0,02% (мас. / Об.). Хранить при температуре 4 ° C.
    Осторожно: азид натрия токсичен. Обрабатывать азид натрия в соответствии с местными правилами безопасности и охраны окружающей среды.
    ПРИМЕЧАНИЕ. При использовании антител для окрашивания используйте 5% сыворотки от вида, из которого было получено вторичное антитело, чтобы получить блокирующий раствор.
  4. Разбавьте биотинилированный Dolichorus biflorus agglutinin 1: 200 в блокирующем растворе. Разбавляют Alexa488-конъюгированный стрептавидин 1: 200 в блокирующем растворе.
  5. Для приготовления готовой к употреблению среды для вливания (см. Таблицу материалов) добавьте 0,1 г водорастворимого мукоадгезивного материала на основе поливинилового спирта к 25% (вес / объем) глицерина в 0,1 М Трис-HCl (pH 8,5) , Нагревают до 50 ° С при непрерывном перемешивании в течение 1 часа, охлаждают и доводят рН до 8,0-8,5, используя 1M NaOH. Избегайте более высоких концентраций NaOH. Добавить 100 мкг / мл N-пропилгаллата и тимеросал до конечной концентрации 0,02% (мас. / Об.). Перемешивают в течение 30 мин при комнатной температуре.
    ОСТОРОЖНО: Тимеросал токсичен. Обращайтесь с ним в соответствии с местными правилами техники безопасности и охраны окружающей среды.
    1. Заполните среду для заливки в пробирки по 50 мл, установите баланс ротора и центрифугируйте при 3200 xg и комнатную температуру на 10 мин. Декантируйте прозрачный раствор в 15 мл пробирки и выбросьте гранулу. Аликвоту и хранить при температуре -20 ° С в течение нескольких недель. После оттаивания держите раствор при 4 ° C. Теплый до ~ 30 ° C непосредственно перед использованием.
  6. Подготовьте столько же стеклянных горок, сколько будут установлены фильтры с эксплантами. Для этого приклейте два небольших покровных стекла размером 18 x 18 мм с обеих сторон стеклянного слайда, используя мгновенный клей. Оставьте пространство на 15 мм для фильтра между ними.

4. Фиксация и окрашивание

  1. После периода культивирования 3Дней в пробирке (div), удалите пластины из инкубатора и тщательно аспирируйте культуральную среду из каждой лунки с помощью микропипетки. Не прикасайтесь к фильтру и держите его в направлении стенки колодца.
  2. Добавить 500 мкл 4% PFA / PBS в каждую лунку. Фильтры будут плавать на фиксаторе. С помощью микропипетки осторожно добавьте фиксатор PFA по каплям, чтобы погрузить фильтры. Инкубируйте при комнатной температуре в течение 30 мин.
    ПРИМЕЧАНИЕ. На всех последующих этапах следует соблюдать осторожность, чтобы не смыть эксплантаты с фильтра. Держите отверстие наконечника пипетки к стене колодца.
  3. Удалить PFA и промыть дважды с 500 мкл PBS, погружая фильтр. Добавить 500 мкл раствора для пермеабилизации в каждую лунку и инкубировать при комнатной температуре в течение 1 часа.
  4. Промойте дважды 500 мкл PBS и добавьте 500 мкл блокирующего раствора в каждую лунку. Инкубируйте при комнатной температуре в течение 1 часа.
  5. Замените блокирующий раствор на250 мкл биотинилированного Dolichorus biflorus agglutinin, разведенного 1: 200 в блокирующем растворе, и инкубируют при 4 ° C в течение 24 часов.
  6. Удалить раствор Dolchorus biflorus agglutinin и дважды промыть 500 мкл PBS на лунку.
  7. Добавьте 250 мкл конъюгированного с Alexa488 стрептавидина, разбавленного 1: 200, в блокирующий раствор и инкубируйте при 4 ° C в течение 24 часов. Альтернативно, инкубируйте при комнатной температуре в течение 2 часов.
    ПРИМЕЧАНИЕ. Лучшее соотношение сигнал / шум достигается при инкубации при 4 ° C.
  8. Промойте дважды с 500 мкл PBS на лунку. Используя щипцы, перенесите фильтры на подготовленные стеклянные слайды, с эксплантатами вверх. Смонтируйте с ~ 50-100 мкл среды для заливки. Покрытие с покровными стеклами № 1,5 длиной 1,5 мм. Разрешить раствору внедряющей среды затвердеть в течение 2 часов при комнатной температуре в темноте. Приступайте к созданию изображений или хранению слайдов, завернутых в фольгу, при температуре 4 ° C до готовности к печати.
  9. Изображение с широкофокусным эпифлуоресцентным микроскопом 7 </ Sup>, соединенной с Hg-лампой, и используют зеркальный блок для синего возбуждения (полоса возбуждения, 460-4 495 нм, зеркальное зеркало 505 нм и полоса пропускания излучения 510-550 нм) и 20X объективы Plan-Apochromat, 0,75 числовые апертура.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Метанефринный почковый анлаген получали из беременных черных-6 инбредных мышей в E11.5 и культивировали. Через 3 дня зачаток мочеточника разветвлялся до 5 раз, что приводило к разрастанию первоначально Т-образного уретрового зачатка. Каждый эксплантов фотографировали, а количество сегментов и конечных точек определяли количественно для определения ветвящихся генераций и для расчета количества конечных точек на ветку ( рисунок 1 ). ImageJ (четвертое поколение, 4 -е

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

В этой рукописи описывается метод выделения развивающегося метанефрического анлагена из эмбриона мыши и культивирования зачатки органа. Этот метод является стандартной методикой, разработанной Grobstein 8 и Saxén 9 , 10 , и был адаптирован и модифицирован многими другими 11 , 12 . Успех метода зависит главным образом от продолжительности диссекции, так как выживаемость эксплантов ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Авторы благодарят Лейфа Оксбурга и Дерека Адамса за щедрое распространение своих знаний, Лейфа Оксбурга за полезные комментарии к рукописи, Стефана Вёльфля и Ульрике Мюллер за их техническую поддержку и Саскию Шмиттекерт, Джулию Гобберт, Сашу Вейер и Виолу Майер за помощь в лаборатория Эта работа была поддержана Отделом Развития, Компанией Биологи (CP).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
DMEM/F-12Thermo Fisher Scientific21331020
пенициллин-стрептомицин (10 000 ЕД/мл)Thermo Fisher Scientific15140148
добавка GlutaMAXThermo Fisher Scientific35050061
DPBS, кальций, магнийThermo Fisher Scientific14040117применение для диссекции
голо-трансферрина человекаSigma-AldrichT0665
Инсулин-трансферрин-селен (ИТС-G) (100x)Thermo Fisher Scientific41400045
ПараформальдегидSigma-Aldrich158127
раствор амфотерицина BSigma-AldrichA2942
Triton X-100Sigma-AldrichX100
Азид натрияSigma-AldrichS8032
ТимеросалSigma-AldrichT5125
ПропилгаллатSigma-Aldrich2370
Mowiol 4-88Sigma-Aldrich81381
ГлицеринSigma-AldrichG5516
Биотинилированный Dolichorus biflorus AgglutininVector LaboratoriesB-1035
Alexa488 конъюгированный стрептавидинJackson Immuno Research016-540-084
Рекомбинантный мышиный белок Ephrin-B2 Fc Chimera, CFR& D Systems496-EB
Рекомбинантный человеческий IgG1 Fc, CFR& D Systems110-HG-100
козий античеловеческий IgG Fc антителаR& D SystemsG-102-C
Фосфатные буферные таблеткиSigma-AldrichP4417использование для фиксации и иммуноокрашивания
Dumont #5, наконечники biologie
, INOX, 11 см		agnthos.se0208-5-PS2 пары щипцов необходимы
Ножницы радужной оболочки, прямые, 12 смagnthos.se03-320-120
Перевязочные щипцы,
прямые, нежные, 13 см		agnthos.se08-032-130
Чашки Петри Nunclo Delta обработанныеThermo Fisher Scientific150679
TMTP01300 Isopor Мембранный фильтр, поликарбонат, гидрофильный, 5.0 &; m, 13 мм, белый, простойMerckMilliporeTMTP01300
Nunclon Multidish
4 лунки, плоское дно		Sigma-AldrichD6789-1CS
Покровное стекло микроскопа толщиной 24 x 50 мм. No.1.5H 0.17+/-0.005 ммnordicbiolabs107222
Чехлы No1.5, 18 мм x 18 ммnordicbiolabs102032
Слайды ~76 x 26 x 1, 1/2-w. грунтовые гладкие гладкиеnordicbiolabs1030418
VWR Лезвия для бритвыVWR55411-055
50 мл центрифужные пробиркиSigma-AldrichCLS430828
центрифужные пробирки 15 млSigma-AldrichCLS430055
Whatman качественная качественная фильтровальная бумага, марка 113V, крепированнаяSigma-AldrichWHA1213125
Фиксированная сцена исследовательский микроскопOlympusBX61WI
Black 6 инбредных мышей, самец, C57BL/6NTacTaconicB6-M
Black 6 инбредных мышей, самка, C57BL/6NTacTaconicB6-F
Стереомикроскоп LeicaLeicaS6 E

Ссылки

  1. Saxén, L. Organogenesis of the kidney. Developmental and Cell Biology Series. 19, Cambridge University Press. (1987).
  2. Lindström, N. O., et al. Integrated β-catenin, BMP, PTEN, and Notch signalling patterns the nephron. eLife. 4, e04000(2015).
  3. Peuckert, C., et al. Multimodal Eph/Ephrin signaling controls several phases of urogenital development. Kidney Int. 90 (2), 373-388 (2016).
  4. Pasquale, E. B. Eph receptor signalling casts a wide net on cell behaviour. Nat Rev Mol Cell Biol. 6 (6), 462-475 (2005).
  5. Bonanomi, D., et al. Ret Is a Multifunctional Coreceptor that Integrates Diffusible- and Contact-Axon Guidance Signals. Cell. 148 (2), 568-582 (2012).
  6. Brown, A. C., et al. Isolation and Culture of Cells from the Nephrogenic Zone of the Embryonic Mouse Kidney. J Vis Exp. (50), e2555(2011).
  7. Olympus Support. , Available from: http://www.olympusamerica.com/cpg_section/cpg_archived_product_details.asp?id=817 (2016).
  8. Grobstein, C. Inductive interaction in the development of the mouse metanephros. J Exp Zool. 130, 319-340 (1955).
  9. Saxén, L., Toivonen, S. Primary Embryonic Induction. , Academic Press. London. (1962).
  10. Saxén, L., Koskimies, O., Lahti, A., Miettinen, H., Rapola, J., Wartiovaara, J. Differentiation of kidney mesenchyme in an experimental model system. Adv Morphog. 7, 251-293 (1968).
  11. Dudley, A. T., Godin, R. E., Robertson, E. J. Interaction between FGF and BMP signaling pathways regulates development of metanephric mesenchyme. Genes Dev. 13, 1601-1613 (1999).
  12. Perälä, N., et al. Sema4C-Plexin B2 signalling modulates ureteric branching in developing kidney. Differentiation. 81 (2), 81-91 (2011).
  13. Thesleff, I., Ekblom, P. Role of transferrin in branching morphogenesis, growth and differentiation of the embryonic kidney. J Embryol exp Morph. 82, 147-161 (1984).
  14. Watanabe, T., Costantini, F. Real-time analysis of ureteric bud branching morphogenesis. Dev Biol. 271, 98-108 (2004).
  15. Sebinger, D. D. R., Unbekandt, M., Ganeva, V. V., Ofenbauer, A., Werner, C., Davies, J. A. A Novel, Low-Volume Method for Organ Culture of Embryonic Kidneys That Allows Development of Cortico-Medullary Anatomical Organization. PLoS One. 5 (5), e10550(2010).
  16. Ekblom, P., Miettinen, A., Virtanen, I., Wahlström, T., Dawnay, A., Saxén, L. In vitro segregation of the metanephric nephron. Dev Biol. 84 (1), 88-95 (1981).
  17. Davies, J. A., Unbekandt, M. siRNA-mediated RNA interference in embryonic kidney organ culture. Methods Mol Biol. 886, 295-303 (2012).
  18. Saxén, L., Lehtonen, E. Embryonic kidney in organ culture. Differentiation. 36 (1), 2-11 (1987).
  19. Bard, J. B. L. The development of the mouse kidney embryogenesis writ small. Curr Opin Genet Dev. 2, 589-595 (1992).
  20. Davies, J. A. A method for cold storage and transport of viable embryonic kidney rudiments. Kidney Int. 70 (11), 2031-2034 (2006).
  21. Batourina, E., et al. Distal ureter morphogenesis depends on epithelial cell remodeling mediated by vitamin A and Ret. Nat Genet. 32 (1), 109-115 (2002).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

Зачатки метанефросаветвление мочеточникового росткаметод культуры органов115 эмбриональный деньполикарбонатный мембранный фильтринкубатор для культур клетокиммунофлуоресцентное окрашиваниеконфокальная микроскопияорганогенез почек
Диссекция и культура мышей эмбриональной почки
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.