Неинвазивный выборки слизистую жидкость для количественной оценки в Vivo иммунной посредника уровня верхних дыхательных путей

Краткое содержание

Этот протокол описывает неинвазивным методом отбора проб ненарушенных слизистую жидкость из верхних дыхательных путей. Он может использоваться для выполнения количественная оценка в естественных условиях уровни белка посредников, таких как цитокинов и chemokines, в субъектах всех возрастов.

Аннотация

Этот протокол описывает неинвазивной проб жидкости слизистую ненарушенных верхних дыхательных путей. В нем также подробно процедура извлечения до анализа иммунных посредников в жидкости элюаты для изучения сократимость актуальные иммунной подписи, без необходимости для стимуляции процедур (часто используется другими методами). Слизистую жидкость пробы на прокладке фильтровальной бумаги размещены на передней части нижней носовой раковины и влево на 2 мин поглощения. Аналитов этого eluted из фильтр-бумаги, и извлеченные на основе белков элюаты анализируются на основе electrochemiluminescence иммуноанализ, позволяя высок чувствительности количественного определения низкого и высокого уровня аналитов в том же образце. Мы измерили уровни в vivo 20 предварительно иммунной посредников, связанных с конкретными иммунной, сигнальные пути в слизистую оболочку верхних дыхательных путей, но техника не ограничивается этой конкретной группы или отбора проб. Этот метод был впервые реализован в 7-год старый детей от Копенгагена перспективных исследований об астме в когорте₂₀₀₀ (COPSAC₂₀₀₀) детство с аллергическим ринитом. После этого он использовался в продольной COPSAC₂₀₁₀ когорта, отобранных на 1 месяц, 2 года и 6 лет и в случаях острых респираторных симптомов. Мы успешно получены и проанализированы пробы из 620 (89%), 700 детей 1-месячного; несколько образцов были ниже предела обнаружения пробирного (сообщили как медиана (межквартильный диапазон (ИКР)). Количество образцов ниже предела обнаружения (т.е. от 0 до застывания для нижнего предела обнаружения), для каждого посредника был 29 (7,25-119,5). Эта техника позволяет количественная оценка в vivo слизистой иммунной профиля дыхательных путей от рождения, могут быть применены в продольном направлении и может быть применен к исследования о влиянии генетики и Ранняя жизнь экологического воздействия, Патофизиология, endotyping и мониторинга заболеваний органов дыхания и разработки и оценки новых терапевтических средств.

Введение

Жидкости слизистую носа составляет жидкой частью системы верхних дыхательных путей. Он состоит из сложной матрицы посредников, производный от взаимосвязи между эпителием и иммунные клетки, которые составляют первую линию обороны против вторжения микроорганизмов. Слизистой оболочки носа легко доступны, и есть сильные функциональные и иммунологические отношения между носом и бронхов¹. Этот отсек имеет особый интерес по отношению к сократимость, которые являются общими в детстве, таких как астмы и аллергического ринита, но и для ряда других респираторных заболеваний, более распространена позднее в жизни.

Здесь мы описыв....

Протокол

Исследования были проведены в соответствии с руководящими принципами в Хельсинкской декларации. Были получены утверждения от Комитет по этике для Копенгаген (KF 01-289/96 для COPSAC₂₀₀₀ ) и H-B-2008-093 COPSAC₂₀₁₀и Датского агентства по охране данных, и письменное информированное согласие было получено от обоих родителей каждого предмета до подачи заявки.

1. Экспериментальная установка

1. Используйте листами фильтровальной бумаги (волокнистый гидроксилированы полиэфирные листы, смотрите Таблицу материалов)^6,7.
   1. Вырежьте полоски 3 x 15 мм, размер 1....

Результаты

Исходные характеристики иммунных профилей дыхательных путей:
Полные данные об уровнях иммунных медиаторов слизистой оболочки верхних дыхательных путей в возрасте 1 месяца были получены для 620 (89%) из 700 детей, включенных в когорту COPSAC₂₀₁₀. Десять новорожденных были включены до отработки методики, а 19 не посетили визит в возрасте 1 месяца. Кроме того, 47 образцов были исключены, так как они извлекались и измерялись в другой лаборатории, использовавшей.......

Обсуждение

С техникой, представленные здесь мы смогли определить в vivo верхний сократимость слизистой иммунной профиля в детей в возрасте от 1 месяца возраста, которое не было сделано ранее в кратчайшие сроки. Мы отмечает, что наличие конкретных сократимость бактерий и picornaviruses^7,11, а также другие pre и перинатального воздействия, были отражены в иммунной профиль сократимость новорожденных. Кроме того мы использовали эти данные иммунной профиля дыхательных п.......

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Волокнистые гидроксилированные полиэфирные листы	Accuwik Ultra	SPR0730	Фильтровальная бумага
Milliplex Assay Buffer	Millipore	L-AB	Buffer
Пластины для хранения с низким содержанием белка	Thermo Scientific	CLS8161	планшеты
Ингибитор протеазы	Roche	11873580001	полный ЭДТА Ингибитор протеазы Коктейльный
ридер многоточечных планшетов	Mesoscale	NA	Sector Imager 6000
анализов	Мезомасштабный		человеческий 10-плексный анализ цитокинов TH1/TH2 и 9-плексный хемокиновый анализ, а также одинарный IL-17A, TGF-β 1 и TSLP. Описание можно найти в Интернете на www.mesoscale.com