Bu protokol, bitki hücre duvarlarındaki lignin, selüloz ve hemiselülozun Raman görüntüleme ve çok değişkenli analizi kullanılarak görselleştirilmesi için genel bir yöntem sunmayı amaçlamaktadır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Bitki Hücresi Duvarında Lignin, Selüloz ve Hemiselülozu Görselleştirmek için Raman Görüntüleme ve Çok Değişkenli Analizin Birleştirilmesi
Bu makalede
Özet
Özet
Raman görüntüsünün bitki biyokütle uygulamasına uygulanması, sulu çözeltiler üzerinde mekansal ve kompozisyonsal bilgi sunabileceği için artmaktadır. Analiz, genellikle kapsamlı numune hazırlığı gerektirmez; Yapısal ve kimyasal bilgiler etiketsiz olarak elde edilebilir. Bununla birlikte, her Raman görüntüsü binlerce spektrum içermektedir; Gizli bilgileri ayıklarken, özellikle de benzer kimyasal yapıya sahip bileşenler için güçlükler doğar. Bu çalışma, bu sorunu çözmek için çok değişkenli bir analizi ortaya koymaktadır. Protokol, bitki hücre duvarı içerisindeki lignin, selüloz ve hemiselüloz dahil olmak üzere ana bileşenleri görselleştirmek için genel bir yöntem oluşturmaktadır. Bu protokolde, numune hazırlama, spektral edinme ve veri işleme prosedürleri anlatılmıştır. Numune hazırlama ve veri analizinde operatör becerisine oldukça bağımlıdır. Bu yaklaşımı kullanarak, uzman olmayan bir kullanıcı tarafından bir Raman araştırması yapılabilir.H kalite verisi ve bitki hücre duvar analizi için anlamlı sonuçlar.
Giriş
Bitki biyokütlesi, Dünya'daki en bol yenilenebilir kaynaktır; esas olarak lignin, selüloz ve hemiselülozdan oluşur; ve çekici bir biyoenerji ve biyo-bazlı kimyasal kaynağı olarak kabul edilir1. Ne yazık ki, bozulmaya direnebilir ve bitki hücre duvarına hidrolitik stabilite veya yapısal sağlamlık kazandırabilir. Bu tür bir direnç, erişilebilir yüzey alanına, biyokütle partikül boyutuna, polimerizasyon derecesine, selüloz kristalliğine ve koruyucu lignin2'ye atfedilebilir. Bu nedenle, bitki hücre duvarının yapısal ve kimyasal doğasının kapsamlı bir şekilde anlaşılması, bitki biyolojisi ve kimyası açısından olduğu kadar tic....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1. Numune Hazırlama
- Bitki örneğinden küçük bir doku bloğu (yaklaşık 3 mm x 3 mm x 5 mm) kesin ( örn. Kavak kökü).
- Dokuyu 30 dakika kaynar deiyonize suya daldırın. Oda sıcaklığında (RT) 30 dakika boyunca hemen deiyonize suya aktarın. Doku, kabın altına sızana kadar bu adımı tekrarlayın; dokudaki havanın alınmış olduğunu ve dokunun yumuşadığını belirtin.
Not: Bu adımdan önce altına batan numuneler için, genellikle bu döngüyü 3-5 kez tekrarlayın. - Deiyonize suyun içindeki 20, 50, 70, 90% (h / h) miktarlardaki polietilen glikol (PEG) ve saf PEG'yi hazırlayın ve solüsyonları 65 ° C'de tutun.
- Suyu, yer....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Şekil 1 , bir bitki hücre duvarının Raman görüntüsü için tipik bir mikro-Raman sistemine genel bir bakış sunmaktadır. Örnek olarak, kavak ( Populus nigra L.) orijinal Raman spektrumlarında belirgin taban çizgileri ve sivri uçlar bulunur ( Şekil 2a ). Raman görüntüleme veri seti (APRI) için otomatik ön işleme yöntemini yaptıktan sonra, bu iki spektral kirletici başarıyla kaldırılır ( Şekil 2b
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bitki hücre duvarı, hücre köşesi (CC), ikincil duvar (SW, S1, S2 ve S3 katmanları) ve bileşik orta lamel (CML, orta lamel artı birincil birincil Duvar), bu da numunenin hazırlanması sırasında düz bir yüzey elde edilmesini zorlaştırmaktadır. Bu nedenle, ahşaptan daha karmaşık bir yapıya sahip bitki örnekleri, özellikle çim, çoğunlukla ince kesit vermeye izin vermek için katılaştırılmaya ihtiyaç duyar. PEG, suda çözünür olduğu için kesme ve Raman araştırması için ideal bir sert matristir. Deiyonize suyla durulama ile kola.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.
Teşekkürler
Mali destek için Çin Bilim ve Teknoloji Bakanlığı'na (2016YDF0600803) teşekkür ediyoruz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Mikrotom | Termo Bilimsel Mikrom | HM430 | |
| Konfokal Raman mikroskobu | Horiba Jobin Yvon | Xplora | |
| Fırın | Şangay ZHICHENG | ZXFD-A5040 |
Kaynaklar
- Gonzalo, G. D., et al. Bacterial Enzymes Involved in Lignin Degradation. J. Biotechnol. 236, 110-119 (2016).
- Rosatella, A. A., Afonso, C. A. M. Chapter 2. Ionic Liquids in the Biorefinery Concept: Challenges and Perspectives. , Wiley. 38-64 (2016).
- Sun, L., et al. <....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
