تحقيقات محددة الهدف تمثل أداة مبتكرة لتحليل الآليات الجزيئية، مثل تعبير البروتين في أنواع مختلفة من الأمراض (مثل التهاب وعدوى توموريجينيسيس). في هذه الدراسة، يصف لنا إجراء تقييم كمي تمجربهك ثلاثي الأبعاد لتسلل بلعم المعوية في نموذج مورين من التهاب القولون باستخدام التصوير المقطعي الأسفار بوساطة خاصة-F4/80.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الأسفار بوساطة التصوير المقطعي للكشف والتحديد الكمي لالتهاب الأمعاء مورين المتصلة بلعم
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
نماذج مورين من المرض لا غنى عنها للبحث العلمي. ومع ذلك، لا تستخدم العديد من الأدوات التشخيصية مثل التنظير أو تصوير تمجربهك بشكل روتيني في نماذج حيوانية. قراءات التجريبية التقليدية غالباً ما يعتمدون على التحليلات بعد الوفاة و السابقين فيفو ، الذي منع فحوص المتابعة داخل الفرد وزيادة عدد الحيوانات الدراسة المطلوبة. الأسفار بوساطة التصوير المقطعي يمكن التقييم غير الغازية، المتكررة، والكمية، وثلاثي الأبعاد من المسابر الفلورسنت. وهي حساسة للغاية ويسمح باستخدام صانعي الجزيئية، مما يسمح بكشف محددة ووصف أهداف جزيئية متميزة. على وجه الخصوص، والمسابير المستهدفة تمثل أداة مبتكرة لتحليل التعبير الجيني التنشيط والبروتين في التهاب، أمراض المناعة الذاتية، والعدوى، وأمراض الأوعية الدموية، الهجرة الخلية، توموريجينيسيس، إلخ. في هذه المقالة، نقدم إرشادات خطوة بخطوة على هذا تكنولوجيا التصوير المتطورة للكشف في فيفو وتوصيف لالتهاب (أي تسلل بلعم F4/80-إيجابي) في نموذج مورين مستخدمة على نطاق واسع من التهاب الأمعاء. يمكن أيضا استخدام هذه التقنية في مجالات البحث الأخرى، مثل تتبع الخلية أو الخلايا الجذعية محصنة.
المقدمة
نماذج حيوانية تستخدم على نطاق واسع في البحوث العلمية، ووجود العديد من الإجراءات غير الغازية لرصد المرض النشاط والحيوية، مثل التحديد الكمي لتغيرات وزن الجسم أو تحليل الدم والبول والبراز. ومع ذلك، هذه هي فقط المعلمات البديلات غير المباشرة التي تخضع أيضا للتباين بين الأفراد. أنهم كثيرا ما يجب أن تكملها بعد الوفاة من تحاليل لعينات الأنسجة، مما يمنع المسلسل من المراقبة في نقاط زمنية متكررة ومباشرة عمليات المراقبة الفسيولوجية أو المرضية في فيفو. ظهرت تقنيات التصوير المتطورة في الحيوانات الصغيرة، بما في ذلك عبر التصوير المقطعية والتصوير الضوئي، والتنظير، التي تمكن من التصور مباشرة لهذه العمليات ويسمح أيضا لإجراء تحاليل متكررة ل الحيوانات نفس
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
ووافق جميع التجارب على الحيوانات für لانديسامت Natur، أومويلت und فيربراوتشيرشوتز (لانوف) نوردراين-فيستفالن وفقا "قانون حماية الحيوانات الألمانية" (تيرشوتزجيسيتز).
1-المواد والإعداد التجريبية
- رعاية الحيوان.
- استخدام الفئران مطابقة الجنس والسن من أي سلالة DSS عرضه (مثلاً، C57BL/6) في وزن الجسم ز 20-25.
- خطة الفئران على الأقل خمسة أو أكثر من كل مجموعة تجريبية وبيت الفئران وفقا للمبادئ التوجيهية للرعاية الحيوانية المحلية.
- تقدم تشو القوارض قياسية النظام الغذائي ومياه الشرب يعقم libitum الإعلانية.
- إزالة تشاو القياسية واستبدله تشاو خالية من البرسيم قبل ثلاثة....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تقييم التهاب القولون:
التهاب القولون المستحثة بمفاجآت صيف دبي هو نموذج موريني مستحث كيميائيا من التهاب الأمعاء الذي يشبه الإنسان بنك التنمية بين الأمريكتين ويؤدي إلى فقدان الوزن ونزيف المستقيم وتقرح سطحي وتلف الأغشية المخاطية في الفئران المعرضة15. أنها مفيدة بشكل خاص لدراسة مساهمة نظام المناعة الفطرية لتطوير التهاب الأمعاء10،11. أ.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
على الرغم من أن تقنيات التصوير الطبية قد تطورت بسرعة في السنوات الأخيرة، ونحن لا تزال محدودة في قدرتنا على الكشف عن عمليات التهابات أو الأورام، فضلا عن الأمراض الأخرى، وفي هذه المراحل الأولى من التنمية. ومع ذلك، وهذا بالغ الأهمية لفهم نمو الورم والغزو، أو الانبثاث التنمية والعمليات الخلوية في تطوير اضطرابات الالتهابات والأمراض التنكسية والقلب والأوعية الدموية والمناعية. في حين تعتمد تقنيات التصوير التقليدي على البارامترات الفيزيائية أو الفسيولوجية، يتيح التصوير الجزيئي التصور من المؤشرات الجزيئية المحددة في فيفو.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
شكر وتقدير
ونشكر السيدة سونيا دوفينتيستير، والسيدة الكه فيبر، والسيدة كلاوديا Niepagenkämper للمساعدة التقنية الممتازة.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| <قوي > كواشف < / قوي > | |||
| نظام غذائي خال من البرسيم | Harlan Laboritories ، ماديسون ، الولايات المتحدة الأمريكية | 2014 | |
| مرهم العين Bepanthen | باير ، ليفركوزن ، ألمانيا | 80469764 | |
| ديكستران كبريتات الصوديوم (DSS) | TdB Consulatancy ، أوبسالا ، السويد | DB001 | |
| Eosin | Sigma - Aldrich ، Deisenhofen ، ألمانيا | E 4382 | |
| حمض الإيثيلين ديامين تترا أسيتيك (EDTA) | سيجما - ألدريتش ، ديزنهوفن ، ألمانيا | E 9884 | |
| فلورين 100 فولت / فولت | أبوت ، فيسبادن ، ألمانيا | B506 | |
| Haematoxylin ؛ | سيجما - ألدريتش ، ديزنهوفن ، ألمانيا | HHS32-1L | |
| O.C.T. مركب الأنسجة تيك | ساكورا ، زويتروندي ، هولندا | 4583 | مثبت للتحليلات النسيجية |
| محلول ملحي مخزن بالفوسفات ، PBS | Lonza ، Verviers ، بلجيكا | 4629 | |
| كلوريد الصوديوم 0،9٪ | براون ، ميلسونجين ، ألمانيا | 5/12211095/0411 | |
| مسحوق بيكربونات الصوديوم | سيجما ألدريتش دايزنهوفن ، ألمانيا | S5761 | |
| النظام الغذائي القياسي | ألترومين ، لاج ، ألمانيا | 1320 | |
| Tissue-Tek Cryomold | Sakura ، ليدن ، هولندا | 4566 | |
| Hemoccult (اختبار ورق guaiac) | بيكمان كولتر ، ألمانيا | 3060 | |
| البيوتين الفئران المضاد للفئران المضاد للجسم المضاد F4 / 80 | Serotec ، أكسفورد ، المملكة المتحدة | MCA497B | |
| البيوتين الفئران المضاد للفأر المضاد ل GR-1 & nbsp ؛ | BD Pharmingen ، هايدلبرغ ألمانيا | 553125 | |
| Streptavidin-Alexa546 | المجسات الجزيئية ، دارمشتات ، ألمانيا | S-11225 | الحد الأقصى للإثارة / الانبعاث: 556 / 573nm |
| الأجسام المضادة للفئران المضادة للفئران CD11b TC | Calteg ، Burlingame ، الولايات المتحدة الأمريكية | R2b06 | |
| المنقى المضاد للفأر F4 / 80 BioLegend | ، لندن ، المملكة المتحدة | 123102 | |
| DAPI | سيجما ألدريتش ، ديزنهوفن ، ألمانيا | D9542 | |
| FITC مترافق المضاد للفئران المضادة للفئران BD | Pharmingen ، هايدلبرغ ، ألمانيا | 553104 | |
| FACS buffer | BD Pharmingen ، هايدلبرغ ، ألمانيا | 342003 | |
| Cy7 NHS Ester | GE Healthcare ؛ أوروبا ، فرايبورغ ، ألمانيا | PA17104 | |
| MPO ELISA | Immundiagnostik AG ، Bensheim ، ألمانيا | K 6631B | |
| Cy5.5 المسمى الأجسام المضادة F4 / 80 المضادة للفأر | BioLegend ، لندن ، المملكة المتحدة | 123127 | جاهزة للاستخدام الأجسام المضادة الموسومة (بديل) مضاد |
| للفأر F4 / 80 Antigen PerCP-Cyanine5.5 | eBioscience ، Waltham ، الولايات المتحدة الأمريكية | 45-4801-80 | جاهز للاستخدام الأجسام المضادة الموسومة (بديل) |
| DMSO (ثنائي ميثيل سلفوكسيد) | سيجما ألدريتش ، ديزنهوفن ، ألمانيا | 67-68-5 | |
| إيزوفلوران | سيجما ألدريتش ، دايزنهوفين ، ألمانيا | 792632 | |
| الإيثانول | سيجما ألدريتش ، ديزنهوفن ، ألمانيا | 64-17-5 | |
| ألبومينات مصل الأبقار (BSA) | سيجما ألدريتش ، دايزنهوفين ، ألمانيا | A4612 | |
| محلول ملحي مخزن ثلاثي (TBS) | سيجما ألدريتش ، ديزنهوفن ، ألمانيا | SRE0032 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Equipment | |||
| FACS Calibur Flow Cytometry System | BD Biosciences GmbH، هايدلبرغ، ألمانيا | ||
| FMT 2000 In Vivo Imaging System | PerkinElmer Inc., Waltham, MA, USA | FMT2000 | |
| True Quant 3.1 Imaging Analysis | Software PerkinElmer Inc., Waltham, MA, USA | المدرجة في FMT2000 | |
| Leica DMLB Fluorescent Microscope | Leica, 35578 Wetzlar, Germany | DMLB | |
| Bandelin Sonopuls HD 2070 | Bandelin ، 12207 برلين ، ألمانيا | HD 2070 | الخالط بالموجات فوق الصوتية |
| مشرط يمكن التخلص منه مشرط رقم 10 | Sigma-Aldrich ، Deisenhoffen ، ألمانيا | Z692395-10EA | |
| مقص Metzenbaum 14 سم | Ehrhardt Medizinprodukte GmbH ، Geislingen ، ألمانيا | 22398330 | |
| حقنة قفل لور 5 مل | Sigma-Aldrich ، Deisenhoffen ، ألمانيا | Z248010 | |
| إبر الحقن | Sigma-Aldrich, Deisenhoffen, Germany | Z192368 | |
| Falcon Tube 50ml | BD Biosciences, Erembodegem, بلجيكا | 352070 |
المراجع
- Bruckner, M., et al. Murine endoscopy for in vivo multimodal imaging of carcinogenesis and assessment of intestinal wound healing and inflammation. J Vis Exp. (90), (2014).
- Lewis, J. S., Achilefu, S., Garbow, J. R., Laforest, R., Welch, M. J.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
