الجمع بين إيفاكافتور وإيفاكافتور-لوماكافتور هما أدوية جديدة لقوات التحالف. ومع ذلك، لا يزال هناك ندرة في التفاهم على PK/PD والصيدلة. نقدم أسلوب [هبلك]--مايكروسوفت أمثل للتحليل المتزامن إيفاكافتور ووالايضات الرئيسية، ولوماكافتور.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
أسلوب LC-MS/MS الأمثل لتحليل العينات السريرية إيفاكافتور، والايضات الرئيسية، ولوماكافتور في السوائل البيولوجية لمرضى التليف الكيسي الفائق
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
عيوب في الجهة الموصلية عبر غشاء التليف الكيسي (CFTR) هي السبب في التليف الكيسي (CF)، هو مرض مع المظاهر الرئوية تهدد الحياة. إيفاكافتور (IVA)، والجمع بين إيفاكافتور-لوماكافتور (لمي) هي اثنين المخدرات اختراق قوات التحالف الجديد أن تعدل مباشرة النشاط والاتجار بها البروتين CFTR معيبة. ومع ذلك، لا يزال هناك ندرة في التفاهم على معلمات الحرائك الدوائية/ميكروبيولوجية والصيدلة إيفاكافتور ولوماكافتور. التقنية [هبلك]-مرض التصلب العصبي المتعدد للتحليل المتزامن لتركيزات إيفاكافتور، هيدروكسيميثيل-إيفاكافتور، إيفاكافتور-كاربوكسيلات، ولوماكافتور في السوائل البيولوجية في المرضى الذين يتلقون القياسية تركيبة إيفاكافتور أو إيفاكافتور-لوماكافتور العلاج قد سبق وضعها في مجموعتنا والتحقق من صحتها جزئيا لمعايير إدارة الأغذية والعقاقير. ومع ذلك، يسمح تحليل الفائق لعدد أكبر من عينات المرضى، مجموعتنا قد الأمثل الأسلوب المبلغ عنها من خلال استخدام عمود كروماتوغرافيا المرحلة عكس حجم مسام أصغر (2.6 ميكرومتر، C8 100؛ 50 x 2.1 ملم) ونظام تدرج المذيبات ( 0-1 دقيقة: 40% ب؛ 1-2 دقيقة: 40-70% ب؛ 2-2.7 دقيقة: عقدت في 70% ب؛ 2.7-2.8 دقيقة: ب 70-90 في المائة؛ 2.8-4.0 دقيقة: 90% ب الغسل؛ 4.0-4.1 دقيقة: 90-40% ب؛ 4.1-6.0 دقيقة: عقد 40% ب) بدلاً من شطف isocratic. وكان الهدف من هذه الدراسة لتقليل الوقت [هبلك]-مرض التصلب العصبي المتعدد تحليل كل عينة كبيرة من ~ 15 دقيقة إلى فقط 6 دقيقة لكل عينة، هو أمر أساسي لتحليل كمية كبيرة من عينات المرضى. هذا الأسلوب المناسب ستكون ذات فائدة كبيرة لدراسات في العلاقات التعرض/الاستجابة لهذه الأدوية تقدم قوات التحالف.
المقدمة
التليف الكيسي (CF) أمراض وراثية شيوعاً تشمل الغدد إفرازات المخاط من الرئة والكبد والبنكرياس والأمعاء يسبب فشل الجهاز المتعدد التدريجي، مثل انخفاض وظائف الرئة وقصور البنكرياس1، 2،3. إيفاكافتور (IVA) هو أول إدارة الغذاء والدواء (إدارة الأغذية والعقاقير الأمريكية) ووافقت وكالة الأدوية الأوروبية (EMA) التليف الكيسي عبر غشاء الموصلية منظم (CFTR) بوتينتياتور المخدرات، مع فعالية سريرية تدل على إنتاج كبير تحسن في وظيفة الرئة عبر الغفل في مجموعة فرعية صغيرة من المرضى CF واضعة G551D-CFTR [جليكاين (ز) في موقف 551 هو الاستعاضة عن حمض الأسبارتيك (د)]4،م....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تم الحصول على الموافقة للأخلاقيات من موناش جامعة البشرية بحوث أخلاقيات اللجنة (موهريك)-
1. تطبيق المقايسة: "جمع العينات المريض"
- تسجيل الوقت عندما يأخذ المريض الجرعة القياسية من 150 ملغ إيفاكافتور أو إيفاكافتور 125 ملغ/lumacaftor 200 مغ.
- ملاحظة انخفاض في الوقت المحدد عندما يتم جمع عينة دم المريض.
ملاحظة: نوصي بجمع عينات من 4-5 على مدى دورة وقت 24 ساعة. إذا أمكن جمع عينة واحدة فقط، النقطة الزمنية المشار إليها هي 2.5-4 ح وظيفة إيفاكافتور أو إيفاكافتور-لوماكافتور تركيبة الجرعات سوف تكون تركيزات ج كحد أقصى في حالة مستقرة قابلة للتحقيق بعد > 5 أيام معاملة على التوالي- - جمع 4-5 مل دم في أنابيب ز....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
لقد مؤخرا أبلغ أسلوب، التحقق من صحتها جزئيا لمعايير إدارة الأغذية والعقاقير، على ثلاثي-الرباعي LC-مرض التصلب العصبي المتعدد ونظام كاشف [هبلك]، باستخدام عمود C8 (5 ميكرومتر، معرف 3.9 مم x 50 مم) مع المرحلة متنقلة تتألف من حمض الفورميك تزاول و 0.1% 100% في الماء (تشكل ، v/v) معدل تدفق من 1 مل/دقيقة. ولوحظ ارتباط خطي من القمم على مدى تركيز يتراوح من 0.01 إلى 10 ميكروغرام/مل في البلازما البشرية لجميع نواتج الأيض، إيفاكافتور، إيفا-M1، إيفا-M6، ولوماكافتور14. هنا وقد تم تحسين هذا الأسلوب للسماح بشكل كبي.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
وكما ذكر سابقا، قد مجموعتنا للمرة الأولى المتقدمة والتحقق من صحة أسلوب [هبلك] و LC-مرض التصلب العصبي المتعدد للكشف السريع والتحديد الكمي إيفاكافتور وايضه الرئيسية هيدروكسيميثيل-إيفا M1 (نشطة) وايفا-كاربوكسيلات M6 (غير نشط)؛ ولوماكافتور في البلازما والبصاق من مرضى التليف الكيسي14. الفحص عنها مجموعتنا سابقا استخدمت بنجاح لقياس تركيز لمي وايفا وايفا-M1، وايفا-M6 في البلازما والبصاق CF المرضى الذين يخضعون للعلاج القياسي حالة مستقرة مع إيفا 150 ملغ/q12 ح (المصطلحات اللاتينية: كاك ح 12؛ مرة وا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
شكر وتقدير
ج. ل. وبرنامج T.V. معتمدة من قبل "المعهد الوطني للحساسية" والأمراض المعدية (نييد) من "المعاهد الوطنية للصحة" (R01 AI111965). المحتوى هي المسؤولة الوحيدة عن المؤلفين ولا تمثل بالضرورة وجهات النظر الرسمية للمعهد الوطني للحساسية والأمراض المعدية أو المعاهد الوطنية للصحة. مولودية هو زميل أبحاث الأسترالي NHMRC الرئيسي. ج. ل. هو الأسترالية الوطنية للصحة ومجلس البحوث الطبية (NHMRC) زميل أبحاث، والتلفزيونية الأسترالية NHMRC صناعة الوظيفي تطوير مستوى 2 زميل أبحاث. E.K.S هو 2017 السفير يونغ المعين للحرفي والصغير الحجم (الجمعية الأمريكية لعلم الأحياء المجهرية) ومعتمد من قبل "منح الدراسات العليا الأسترالية".
أجزاء من هذا العمل قدم في 12th المؤتمر أوسترالياسيان "التل....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| IVA (Cat # S114) ؛ | SelleckChem (الولايات المتحدة الأمريكية). | ||
| LUMA (Cat#S1565) | SelleckChem (الولايات المتحدة الأمريكية). | ||
| IVA-carboxylate (Cat# 510242247CS) | Clearsynth (كندا). | ||
| هيدروكسي ميثيل IVA (القط # 510240849CS) ؛ | Clearsynth (كندا). | ||
| الميثانول (MeOH ، LC-MS grade) ، ؛ | سيجما ألدريتش | ||
| أسيتونيتريل (ACN ، LC-MS grade) ؛ | الفورميك سيجما ألدريتش | ||
| (FA) | سيجما ألدريتش | ||
| ثلاثي رباعي الأقطاب شيمادزو 8030 LC-MS & nbsp ؛ | |||
| فينومينكس كينيتكس (2.6 & ميكرو; م C8 100 Å; 50 & مرات 2.1 مم) | |||
| (مرشح KrudKatcher Ultrea HPLC في الخط 0.5 متر مرشح عمق × 0.004inID). | |||
| 1.5 مل البولي بروبيلين أنبوب الطرد المركزي الدقيق (VWR). | |||
| Eppendorf Centrifuge 5430 | |||
| فلتر حقنة 13 مم (0.45 وميكرو ؛ م نايلون, GRACE, الولايات المتحدة الأمريكية) | |||
| [فينومينكس فيريكس ، 9 مم ، PP ، 300 ومايكرو ؛ L ، PTFE / حاجز سيليكون]. |
المراجع
- Schneider, E. K., et al. Drug-drug plasma protein binding interactions of ivacaftor. J Mol Recognit. 28 (6), 339-348 (2015).
- Solomon, M., Leatte, P. N. Treatments for Cystic fibrosis. , (2009).
- O'Sullivan, B. P., Flume, P.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
