ويهدف هذا البروتوكول وصف خطوة بخطوة التقنية من كسبها الابهري عرضية انقباض (تاك) في الفئران. بالقضاء على التنبيب والتهوية وإلزامية بالنسبة للإجراءات القياسية استخداماً، يبسط الإجراءات المنطوق تاك كسبها ويقلل من الضغط الواقع على الحيوان.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تقنية من كسبها انقباض الابهري عرضية في الفئران لتحريض تضخم البطين الأيسر
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
عرضية انقباض الابهري (تاك) في الفئران واحدة من التقنيات الجراحية الأكثر شيوعاً للتحقيق التجريبي للضغط الناجم عن التحميل الزائد غادر تضخم البطين (لفة) والتقدم به إلى قصور في القلب. يتم تنفيذ هذا الإجراء في معظم التحقيقات التي تم الإبلاغ عنها، مع تنبيب والتهوية من الحيوان الذي يجعلها مرهقة وتستغرق وقتاً طويلاً، ويضيف إلى أعباء العمليات الجراحية للحيوان. والهدف من هذا البروتوكول وصف أسلوب مبسط من تاك كسبها دون تنبيب والتهوية من الفئران. يتم التأكيد على الخطوات الحاسمة للتقنية بغية تحقيق معدلات وفيات منخفضة وعالية الكفاءة في حمل لفة.
C57BL/6 الفئران الذكور (عمرها 10 الأسبوع، 25-30 غ، ن = 60) تم تخديره بحقنه داخل واحدة من خليط من الكيتامين وإكسيلازيني. في التنفس تلقائياً الحيوان عقب ستيرنوتومي جزئي العلوي 3-4 ملم، شريحة من 6-0 خياطة الحرير مترابطة من خلال العين ربط المعونة صدر تحت القوس الاورطي ومرتبطة عبر إبرة 27-قياس يتثلم. الحيوانات تعمل بالشام وخضع نفس إعداد العمليات الجراحية ولكن دون انقباض الابهري. ويشهد فعالية الإجراء في حمل لفة بزيادة كبيرة في نسبة وزن القلب/الهيئة. يتم الحصول على هذه النسبة في أيام 3, 7 و 14 و 28 بعد الجراحة (n = 6-10 في كل مجموعة وكل مرة نقطة). باستخدام تقنية لدينا، لوحظ أن لفة في معاهدة الصداقة والتعاون مقارنة بالحيوانات الشام من يوم 7 من خلال يوم 28. المنطوق والمتأخرة (ما يزيد على 28 يوما) نفوق على حد سواء منخفض جداً في نسبة 1.7 في المائة.
وفي الختام، لدينا تقنية فعالة من حيث التكلفة لمعاهدة الصداقة والتعاون مينيملي في الفئران يحمل نفوق المنطوق وبعد العمليات الجراحية منخفضة جداً وذات كفاءة عالية في حمل لفة. يبسط هذا الإجراء من المنطوق، ويقلل من الضغط الواقع على الحيوان. ويمكن أداؤها بسهولة عن طريق اتباع الخطوات الحاسمة المبينة في هذا البروتوكول.
المقدمة
على مدى السنوات الماضية، تم إجراء دراسة قلبية في نماذج قابلة للحياة الحيوانية1. مقارنة النماذج الحيوانية الكبيرة من فشل القلب، نماذج حيوانية صغيرة لديها العديد من المزايا المحتملة. إلى جانب انخفاض تكاليف السكن، والصيانة، نماذج حيوانية صغيرة متاحة للباحثين أكثر بسبب التسهيلات اللازمة أقل تعقيداً2.
ماوس القلب نماذج تقدم العديد من نفس المزايا كنماذج الفئران. وبالإضافة إلى ذلك السكن إلى انخفاض تكلفته3، نماذج الماوس الاستفادة من توافر سلالات (كو) المعدلة وراثيا والضربة القاضية ذات الصلة. إمكانية خلية نوع معين، إيندوسيبلي كو أو الاستراتيجيات المعدلة وراثيا تجعل الماوس أداة لا....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
الفئران الذكور C57BL/6J (10 أسابيع، 25-30 زاي ن = 60) وتستخدم في هذا البروتوكول. الحيوانات تتلقى الرعاية الإنسانية وفقا للمبادئ التوجيهية التي وضعتها الوزارة الفرنسية للزراعة والتعليم العالي والبحوث، ويتم تنفيذ جميع الإجراءات وفقا "توجيهات مجلس الجماعة الأوروبية" من 24 نوفمبر 1986 ( 86/609/EEC) والقوانين الفرنسية. وأقر البروتوكول " "اللجنة الإقليمية للأخلاقيات" "الحيوان التجريب كريميس" " (#2016092816207606).
1-التحضير لجراحة
- الحفاظ على الفئران لمدة أسبوع واحد بعد وصوله إلى مرفق الحيوان في دائرة ضوء/الظلام ح 12/12 ساعة، في أقفاص القياسية، مع الطعام (للتفاصيل انظر الجدول للمواد) والمياه المتاحة الإعلانية ليبيتوم-<....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
بقاء المنطوق والراحل
بقاء المنطوق كان مرتفعا جداً، 98.3 في المائة (59 من أصل 60) للسلسلة بأكملها (معاهدة الصداقة والتعاون والحيوانات تعمل بالشام). وفاة المنطوق فقط كان بسبب مضاعفات نزيف في ماوس خططت للعملية الصورية. وكان البقاء على قيد الحياة بعد العمليات الجراحية خلال فترة الملاحظة لمدة 28 يوما أيضا ممتازة، ونسبة 98.3 في المائة (58 من أصل 59). حدوث الوفاة بعد العمليات الجراحية الراحل فقط في ماوس تاك في اليوم (د) 16، ربما من أصل القلب.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
والهدف من هذا البروتوكول أن يقدم دليلاً خطوة بخطوة تقنية جراحية لكسبها انقباض الابهري عرضية في الفئران. أبلغ وصف تقني مفصل لانقباض الابهري عرضية في الفئران بغيرها من المؤلفين82،. غير أن هؤلاء المحققين إجراء جراحة عقب تنبيب والتهوية للحيوانات. استخدام خطوة إضافية من تنبيب-التهوية يزيد في تعقيدها ومدة الإجراء بأكمله وتتعرض للضغط العالمي الحيوان. لهذه الأسباب، مفهوم كسبها انقباض الابهري عرضية قد حظيت ببعض الاهتمام. يتم استخدام انقباض الابهري عرضية كسبها في الفئران ل.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب قد لا يوجد تضارب في الكشف عن.
شكر وتقدير
بتأييد هذا العمل بمنحه (N ° 32016) مؤسسة القلب والأوعية الدموية السويسرية إلى الرايت
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| المجهر الجراحي | أوليمبوس | SZX2-TR30 | |
| ماكينة حلاقة | Rowenta | Nomad TN3650FO | |
| <قوي>خيوط: < / قوي> | |||
| بولي بروبيلين 7/0 | Ethicon | BV-1X | |
| بولي بروبيلين 6/0 | BBraun | C0862061 | |
| Silk 6/0 Ligature | FST | 18020-60 | |
| بولي بروبيلين 4/0 | إيثيكون | 8683 | |
| بولي بروبيلين 5/0 | إيثيكون | Z303 | |
| <قوي>الأدوية: < / قوي> | |||
| كيتامين | ميريال | إمالج & إيغريف ؛ ني 1000, LBM154AD | |
| زيلازين | باير | رومبون 2٪, KP09PPC | |
| بوبرينورفين | سيفا | فيترجيزيك, 072013 | |
| <قوي>الأدوات: < / قوي> | |||
| كماشة العظام | أدوات جراحية دقيقة | 16101-10 | |
| مساعد ربط | أدوات جراحية دقيقة | 18062-12 | |
| ملقط ربط | الأدوات الجراحية الدقيقة | 18026-10 | |
| حامل إبرة أدوات | جراحية دقيقة | 12003-15 | |
| ملقط الجراحة المجهرية ؛ | الأدوات الجراحية الدقيقة | 11003-12 | |
| ملقط الجراحة المجهرية | الأدوات الجراحية الدقيقة | 11002-12 | |
| ملقط الأنسجة | الأدوات الجراحية الدقيقة | 11021-12 | |
| حامل إبرة الجراحة المجهرية | الأدوات الجراحية الدقيقة | 12076-12 | |
| مقص الجراحة المجهرية | الأدوات الجراحية الدقيقة | 91501-09 | |
| مقص Mayo | الأدوات الجراحية الدقيقة | 14511-15 | |
| سكين 11 شفرة | جراحي دقيق أدوات | 10011-00< | |
| strong>RNA Extraction و qPCR: < / strong> | |||
| TriReagent | Euromedex | TR-118-200 | |
| Rneasy Mini kit | Qiagen | 74704 | |
| Qubit مقايسة الحمض النووي الريبي الفلوريمتري | فيشر Scientific | 10034622 | |
| RNA 6000 Nano | Kit Agilent | 5067-1511 | |
| مجموعة (كدنا) عالية السعة | فيشر 10400745 | ||
| تقمان ماستر ميكس | فيشر | 10157154 | |
| التقاربي BNP بادئات | فيشر ساينتفيك | Mm01255770_g1 | |
| تقمان ANP بادئات | فيشر Scientific | Mm01255747_g1 | |
| اشعال Taqman ACE | فيشر ساينتفيك | Mm00802048_m1 | |
| Taqman Col1a1 primers | فيشر ساينتفيك | Mm00801666_g1 | |
| تقمان TGFb البادئات | فيشر ساينتفيك | Mm01178820_m1 | |
| تقمان جابده الاشعال | فيشر | Mm99999915_g1 | |
| ABIPrism Thermocycler | Applied Biosystems | 7000 | |
| Software: < / strong> | |||
| GraphPad Prism | GraphPad | Prism 7 | |
| Animal Food< / قوي > | |||
| نظام غذائي كامل للفئران / الفئران البالغة | UB220610R | آمن |
المراجع
- Molinari, F., Malara, N., Mollace, V., Rosano, G., Ferraro, E. Animal models of cardiac cachexia. Int. J. Cardiol. 219 (15), 105-110 (2016).
- Tarnavski, O. Mouse surgical models in cardiovascular research. Methods. Mol. Biol. 573, 115-137 (2009).
- Verma, S. K., Krishnamurthy, P., Kishore, ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
