Мы описываем в vivo мышиных модель рассасывании вторжения путем введения сингенных поджелудочных клеток рака в седалищный нерв. Модель позволяет для количественной оценки степени нерва вторжения и поддерживает исследование молекулярных и клеточных механизмов рассасывании вторжения.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
В естественных условиях мышиных седалищного нерва модель рассасывании вторжения
* These authors contributed equally
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Раковые клетки вторгнуться нервов через процесс называется рассасывании вторжения (Пни), в котором рака клетки размножаются и мигрируют в нерв микроокружения. Этот тип вторжения выставляется различных типов рака и очень часто встречается в рак поджелудочной железы. В ортотопическая мышиных моделях микроскопических размеров нервных волокон внутри мыши поджелудочной железы затрудняет изучение PNI. Здесь мы описываем модель heterotopic в vivo пни, где мы вводим сингенных поджелудочный рак клеток линии Panc02-H7 в мышиных седалищного нерва. В этой модели седалищного нервов наркотизированных мышей подвергаются и вводят с раковых клеток. Раковые клетки вторгнуться в нервы проксимально к спинного мозга от точки инъекции. Вторглись седалищного нервов затем извлекаются и обрабатываются с октября для замороженных секционирование. H & E и иммунофлюоресценции пятнать этих разделов позволяют количественной оценки степени вторжения и изменения экспрессии белков. Эта модель может применяться для различных исследований на пни, учитывая его универсальность. С помощью мыши с различных генетических модификаций и/или различных типов раковых клеток позволяет для расследования молекулярных и клеточных механизмов пни и рака различных типов. Кроме того воздействие терапевтических агентов на нерв вторжения могут быть изучены путем применения лечения этих мышей.
Введение
Нервы образуют конкретную опухоль микроокружения, который стимулирует рак роста и миграции1,2,3. Рассасывании вторжения (Пни) — это процесс, через который раковых клеток вторгнуться в и вокруг нервы. Он может быть рассматриваться как уникальный маршрут метастазов рака вторжения простирается от места происхождения по нервам. PNI встречается в нескольких типов рака, включая поджелудочной железы, предстательной железы, головы и шеи, слюнных, шейки матки и колоректального рака, заболеваемость, начиная от 22% до1,100%2. PN....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все процедуры с животных темы были утверждены институциональный уход животных и использования Комитетом на Мемориал Слоун Kettering Рак центр.
1. Подготовка раковых клеток
- Урожай югу вырожденная Panc02-H7 клетки с трипсин 0.25% 5 минут при 37 ° C. Соберите клетки в пластиковых пробирок 15мл.
Настой используется / Примечание: Клетки растут в T-225 колбу, который содержит около 12 х 106 клеток на колбу на 80% confluency и 4 мл трипсина. - Центрифуга клетки на x 900 g при 4° C для 5 минут вымыть клетки, resuspending клетки пеллет в 1 мл PBS (по закупорить вверх и вниз дважды) и передать пробки microcentrifuge 1,....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Этот метод описывает хирургической имплантации поджелудочных клеток рака в мышиных седалищного нерва для создания модели в vivo количественной нерва вторжения. Рисунок 1 иллюстрирует анатомического расположения седалищного нерва и месте инъекции. Рисунок 2 показывает два седалищного нервов обнаженной мыши. PBS вводят нерва (слева) можно сравнить с нерва, вводится с MiaPaCa-2 раковые клетки (справа). Вводится с раковые кл.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
В этом протоколе мы описываем в vivo мышиных модель рассасывании вторжения, который позволяет для количественной оценки седалищного нерва вторжения поджелудочных клеток рака. Эта модель позволяет изучение молекулярных механизмов нерва вторжения. Успешные эксперименты с использованием этого метода требуется тщательный подход к три критических этапов процесса: 1 впрыска раковых клеток (шаги 2.7, 2.8), 2 Добыча вторглись нервов (шаг 3.4) и 3) обработка собранного нервов (шаг 4.1).
Впрыск.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не имеют ничего сообщать.
Благодарности
Авторы признают технические услуги, предоставляемые Фондом молекулярных цитологии и животных фонд Мемориал Слоун Kettering Рак центр. Эта работа была поддержана NIH грантов CA157686 (РЖ Wong) и CA008748 Р30 (Мемориал Слоун Kettering Рак центр поддержки Грант).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| мышей | варьируются в зависимости от экспериментальных потребностей | ||
| Среды для культивирования клеток (PBS, трипсин и DMEM + 10% FBS) | Любые | шаги 1.1, 1.2, 1.3. | |
| Коническая центрифужная пробирка, 50 мл | Falcon | 352098 | Step 1.1 |
| Микроцентрифужная пробирка 1,5 мл | Axygen | MCT-150-C-S | Step 1.2 |
| Электрическая бритва | WAHL | 9962 | Step 2.1. Может быть заменен коммерческим средством для удаления волос |
| Изофлуран, 250 мл | Baxter | 1001936060 | Шаг 2.2 |
| Гипоаллергенная хирургическая лента | 3M Blenderm | 70200419342 | Шаг 2.3 |
| Бетадиновые обменные палочки | PDI | Артикул 41350 Шаг | 2.4 |
| Webcol Спиртовые препараты | Covidien | 5110 | Шаг 2.4 |
| Стерильные хирургические инструменты (ножницы и щипцы) | Шаги 2.4, 2.5, 3.3, 3.4, 3.5 | ||
| 10 μ L Шприц Hamilton | Hamilton | 80308 | Шаг 2.7, 2.8 |
| Стальной микрошпатель | Fisher | Scientific S50823 | Шаг 2.7 |
| Препарирующий микроскоп | Шаг 2.7 | ||
| Бупивацин, 1 г | Enzo Life Sciences | BML-NA139-0001 | Шаг 2.9. Восстановите до 0,5% |
| 5-0 Нейлоновый шовный материал | Ethicon | 698H | Шаг 2.9 |
| Ткань-Тек O.C.T. Компаунд | VWR | 25608-930 | Шаг 4.1 |
| Ткань-Тек Криомолд Формы | VWR | 25608-916 | Шаг 4.1 |
Ссылки
- Liebig, C., Ayala, G., Wilks, J. A., Berger, D. H., Albo, D. Perineural invasion in cancer. Cancer. 115 (15), 3379-3391 (2009).
- Bapat, A. A., Hostetter, G., Von Hoff, D. D., Han, H. Perineural invasion and associated pain in pancreatic cancer. Nat Rev Cancer. 11 (10), 695-707 (2011).
- Deborde, S., Wong, R. J.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
