[كنفوكل] مجهرية يكشف خلية مستقبلات سطح التجميع عن طريق التحليل الطيفي ارتباط الصورة

Adam C. Parslow; Andrew H.A. Clayton; Peter Lock; Andrew M. Scott

doi:10.3791/57164

يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

[كنفوكل] مجهرية يكشف خلية مستقبلات سطح التجميع عن طريق التحليل الطيفي ارتباط الصورة

6.9K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/57164

⸱

أغسطس 2, 2018

Adam C. Parslow¹^,² , Andrew H.A. Clayton³ , Peter Lock⁴ , Andrew M. Scott¹^,²^,⁵^,⁶^,⁷

¹Tumour Targeting Laboratory, Olivia Newton-John Cancer Research Institute, ²School of Cancer Medicine, La Trobe University, ³Centre for Micro-Photonics, Faculty of Science, Engineering and Technology, Swinburne University of Technology, ⁴LIMS Bioimaging Facility, La Trobe Institute for Molecular Science, La Trobe University, ⁵Department of Medical Oncology, Olivia Newton-John Cancer and Wellnes Centre, Austin Health, ⁶Department of Medicine, University of Melbourne, ⁷Department of Molecular Imaging and Therapy, Austin Health

في هذه المقالة

ملخص

يمكن أن تضفي الأجسام المضادة التي تربط لمستقبلات المستهدفة على سطح الخلية المطابقة والتجميع التعديلات. آثار هذه التغيرات الدينامية لوصف وضع المخدرات في الخلايا الهدف. يستخدم هذا البروتوكول [كنفوكل] مجهرية والتحليل الطيفي ارتباط الصورة عن طريق إيماجيج/فيجي تقدير مدى مستقبلات التكتل على سطح الخلية.

الملخص

[كنفوكل] الفحص المجهري يوفر بمنهجية موجوداً لالتقاط التفاعلات الخلوية دون الحرجة لتوصيف ومواصلة تطوير عوامل ما قبل السريرية المسمى مع تحقيقات الفلورسنت. مع التطورات الأخيرة في جسم القائمة على المخدرات السامة للخلايا يتم إيصالها، فهم التعديلات الناجمة عن هذه العوامل ضمن نطاق التجميع مستقبلات واستيعاب أهمية حاسمة. هذا البروتوكول روافع منهجية راسخة immunocytochemistry الفلورسنت وتوزيع فيجي مفتوحة المصدر إيماجيج، يحمل في ثناياه عوامل ترابط تلقائي والدوال الرياضية الصورة، لإجراء ارتباط الصورة المكانية التحليل الطيفي (ICS). هذا البروتوكول كوانتيتاتيس شدة الفلورسنت مستقبلات مسماة كدالة لمنطقة شعاع من المجهر [كنفوكل]. وهذا يوفر مقياس كمي للدولة المستهدفة جزيء التراكم على سطح الخلية. وتركز هذه المنهجية على توصيف الخلايا ثابتة مع إمكانات للتوسع في التحقيقات الزمانية لتجميع مستقبلات. ويقدم هذا البروتوكول بمنهجية موجوداً لتقديم التقدير الكمي لتجميع الأحداث التي تحدث على سطح الخلية، تستخدم أيضا إنشاء تقنيات وأجهزة التصوير غير المتخصصة.

المقدمة

تطوير الأجسام المضادة العلاجية أظهرت نجاحا ملحوظا في علاج أنواع الأورام متعددة¹. التطورات الأخيرة للمخدرات جسم يصرف (ADC) كما توسعت آليات التسليم للمركبات السامة للخلايا الاحتياجات اللازمة لفهم القوى المحركة للتفاعلات بين الأضداد: مستقبلات في الخلية السطحية². في أعقاب نجاح استهداف جسم مضاد لمستقبلات سطح الخلية، يمكن حمل هذه المجمعات أنماط التجميع مشابهة لتلك التي لوحظت في التفاعلات يجند: جسم³. يمكن للتعديلات في تجميع مستقبلات حمل تغييرات في الغشاء والنتيجة في الاستيعاب المستقبلات وإزالتها من على سطح الخلية. في سياق المتقارن الأجسام المضادة-المخدرات، تطلق هذه العملية لاحقاً الحمولة السامة للخلايا ف....