Method Article

Изоляция лимфоциты от мыши небольшой кишечной иммунной системы

DOI:

10.3791/57281

⸱

February 28th, 2018

 , 
1Center for Infectious Diseases, Department of Molecular Genetics and Microbiology, Stony Brook University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Здесь мы описываем подробный протокол для изоляции лимфоцитов из индуктивных сайтов, включая патчи Пейера кишечнике связанных лимфоидной ткани и крылом брыжеечных лимфатических узлов и эффекторных сайтов, включая lamina propria и кишечного эпителия кишечной иммунной системы малых.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Кишечные иммунная система играет важную роль в поддержании барьерной функции желудочно-кишечного тракта, создавая терпимая(ый) ответы на пищевые антигены и синантропных бактерий во время монтажа эффективного иммунного ответа на энтеропатогенные микробы. Кроме того стало ясно, что местные кишечного иммунитета имеет глубокое влияние на отдаленные и системного иммунитета. Таким образом важно изучить как индуцируется кишечных иммунный ответ и что итоги иммунологического ответа. Здесь описывается подробный протокол для изоляции лимфоцитов из тонкой кишки индуктивный как патчи Пейера кишечнике связанных лимфоидной ткани и крылом брыжеечных лимфатических узлов и эффекторных сайты как lamina propria и кишечного эпителия. Эта техника обеспечивает изоляцию большое количество лимфоцитов из небольших кишечных тканей с оптимальной чистоты и жизнеспособности и минимальным полигамное загрязнения в течение приемлемого времени. Технические возможности изолировать лимфоциты и другие клетки иммунной системы от кишечных тканей позволяет понимание иммунной реакции на инфекции ЖКТ, рак и воспалительные заболевания.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) имеет много складок и выступов, которые представляет крупнейший интерфейс, отделяя внутреннего тела и внешней среды. Кишечные иммунная система играет важную роль в поддержании барьерной функции желудочно-Кишечного тракта. Оно постоянно подвергается воздействию пищевых антигенов, синантропных бактерий и болезнетворных микробов. Таким образом оно должно оставаться терпимая(ый) антигенов продовольственной и синантропных бактерий при сохранении способности быстро генерировать эффективного иммунного ответа на энтеропатогенные микробы1. Кишечной иммунной системы может анатомически разделить индуктивных сайтов, где лим....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все эксперименты на животных были проведены в соответствии с рекомендациями Национального института здравоохранения и утверждены Стоуни-Брук университета уход для институциональных животных и использования Комитетом.

Примечание: Убедитесь, что все утверждений перед выполнением процедуры.

1. решение подготовка

  1. HGPG (HEPES, L-глютамин, пенициллин/стрептомицина и гентамицина), 100 ×
    1. Смесь 59,6 g HEPES (500 мм окончательный), 14,6 г Л-глютамин (окончательный 200 мм), 1 × 106 U пенициллин (2000 ед/мл окончательный), стрептомицина 1 г (2 мг/мл окончательный) и гентамицин....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Схематическое представление протокола изображен (рис. 1). Лимфоциты в пределах слизистой кишечника индуктивный и эффекторных сайты отчетливо организуются. Пейера в патчи (PP) и брыжеечных лимфатические узлы (млн.) содержат лимфоциты в хорошо организованной районах Т-клеток и B-клеток фолликулов, тогда как кишечного эпителия содержит лимфоцитов, которые распространяются более диффузно. Propria пластинки (LP) содержит диффузно распределенных лимфоцитов и лимфоц.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Подробный протокол представляется для изоляции лимфоцитов из кишечной слизистой индукционные (млн и PP) и эффектор (LP и IEL отсека) сайтов. Протокол был разработан чтобы сбалансировать ввод (время) и выходного (жизнеспособности и урожайность) для обеспечения максимальной производительности и результатов. Протокол также обеспечивает минимальный полигамное загрязнения между LP и IEL отсеков.

Несколько протоколов для изоляции иммунных клеток из тонкой кишки мыши были опубликованы

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы не имеют ничего сообщать.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Б.С.Ш поддерживается гранта NIH (R01 AI076457) и средства, предоставленные Университет Стоуни-Брук. Z.Q. поддерживается NIH Грант (K12 GM102778).

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
HEPESFisher ScientificBP310-500
L-глютамин Sigma-aldrichG3126-100G
Life Technologies15140-122
ГентамицинLife Technologies15710-072
Гидроксид натрияFisher ScientificS318-500
RPMI 1640Life Technologies21870-076
Бикарбонат натрияFisher ScientificS233-500
Фетальная бычья сывороткаLife Technologies26140-079
10x Сбалансированный раствор соли ХэнксаSigma-aldrichH4641-500ML
1,4-дитиоэритритолSigma-aldrichD9680-5G
0.5M EDTA, pH 8.0Life Technologies15575-020
Хлорид кальция гексагидратSigma-aldrich21108-500G
Гексагидрат хлорида магнияSigma-aldrichM2670-100G
коллагеназа, тип ILife Technologies17100-017
DG градиентный стоковый раствор (Percoll) GE Healthcare17-0891-01
Буфер для лизиса эритроцитовBiolegend420301
70-&микро; Ситечко для клеток M Corning352350
14 мл Полипропиленовая трубка с круглым дномCorning352059
колбы Эрленмейера Kimble26500R-50mL
Магнитная мешалкаThermo Fisher50094596
мешалкаFisher Scientific14-512-148
Пенициллин-стрептомицин

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Hooper, L. V., Macpherson, A. J. Immune adaptations that maintain homeostasis with the intestinal microbiota. Nat Rev Immunol. 10 (3), 159-169 (2010).
  2. Brandtzaeg, P., Kiyono, H., Pabst, R., Russell, M. W. Terminology: nomenclature of mucosa-associated lymphoid tissue.....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Lymphocyte IsolationSmall IntestinePeyer PatchesMesenteric Lymph NodesLamina PropriaIntraepithelial LymphocytesCell StrainerDensity Gradient CentrifugationFlow CytometryHarvest Media

Related Articles