نقدم هنا، طريقة جديدة لاستئصال جزئي للفص الكبدي الأيسر في الفئران حديثي الولادة (يوم 0). هذا البروتوكول الجديد مناسبة لدراسة إصابة الكبد الحاد والإصابة وردا في إعداد المواليد.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
ظهرت مفصص الجزئي: نموذج جراحية لتجديد الكبد مورفولوجك
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
تجديد الجهاز المورفولوجية عقب فقدان الأنسجة الحادة شيوعاً بين الفقاريات أقل، ولكن نادراً ما يلاحظ في الحياة بعد الولادة الثدييات. تجديد الكبد الكبار بعد 70% الجزئية ظهرت النتائج في تضخم تتمثل مع بعض النسخ المتماثل في الفصوص المتبقية مع استعادة النشاط الأيضي، ولكن مع خسارة دائمة للفص المصاب في مورفولوجيا والهندسة المعمارية. هنا، نحن بالتفصيل أسلوب جراحية جديدة في الوليد أن يترك بيئة الفسيولوجية المؤدية إلى التجديد. هذا النموذج يتضمن بتر ابيكس الفص الأيسر ونظام إدارة محافظ لاحقة، ويفتقر إلى ضرورة ربط السفن الكبد الرئيسية أو الإصابة الكيميائية، ترك بيئة الفسيولوجية التي قد تحدث فيها تجديد. أننا نقدم هذا البروتوكول إلى بتر الأطراف في الأحداث (P7-14) الفئران، خلالها التحولات الكبد المتضرر من تجديد الجهاز إلى النمو التعويضي بتضخم. ينص البروتوكول على 30 دقيقة قصيرة وقدم إطارا لدراسة آليات التجديد وتدنيها المرتبطة بالعمر في الثدييات، ووصف الجذعية الكبدية المفترضة أو فروعه.
المقدمة
القدرة على إعادة تكوين جهاز، أو لاستعادة الشكل والوظيفة، وقد كان من المعتقد أن يضيع معظمها على مر الزمن التطوري. تم العثور على إمكانات التجدد في الكبد الثدييات الكبار بعد الإصابة الحادة الكيميائية أو الفيزيائية تشمل تعبئة جميع خلايا الكبد المتبقية مما أدى إلى موجات تضخم وجولات قليلة من انقسام الخلية، نتج عنه ولكن الوظيفية الجهاز معماريا مختلفة1،2،3،،من45. في الآونة الأخيرة، بدأت الدراسات لوصف استجابة أجهزة الثدييات الولدان التجديدي للإصابة خلال الأسبوع الأول من الحياة6،
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
أجريت جميع التجارب على الحيوانات طبقاً للمبادئ التوجيهية التي وضعتها الرابطة للتقييم والاعتماد لمختبر الحيوان الرعاية الدولية (آآلاك) وجامعة ستانفورد الفريق الإداري في "الحيوانات المختبرية" الرعاية (أبلاك)، (رقم بروتوكول #10266) وفي الولايات المتحدة، أو قانون رعاية الحيوان الأوروبية، التوجيه 2010/63/الاتحاد الأوروبي. البروتوكول أقرته لجنة "أخلاقيات التجارب الحيوانية" من "حكومة بافاريا"، ألمانيا، وحصل على إذن لا: 55.2-1-54-2532-150-2015.
1-إعداد الحيوان
- إعداد أقفاص فارغة مع الأسرة المناسبة على لوحة تدفئة.
- قبل لمس الحيوانات مع القفازات، فرك الأسرة الأم على القفازات.
- إزالة جميع الجراء من أمهم ومكان في قفص فارغ. قم....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تفاصيل الشكل 1A زمني عام الولدان ظهرت مفصص الجزئي (التخطيطي في الشكل 1B)، والطول المتوقع لوقت الانتظار حتى يتم ملاحظة التجديد. ويمكن تجديد خفية من الفص الأيسر الملاحظة 7-14 يوما بعد الجراحة. وكثيراً ما لوحظ التجديد الكامل بعد 56 يوما بعد الجراحة. الفئران يجب أن تظهر أي علامات شذوذ الفسيولوجية بعد الجراحة.
الفئران التي تمر هيباتيكتوميس مفصص جزئي سمح باسترجاع 2, 7, 14, 35.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
إصابة الكبد الحاد تقليديا ودرست استخدام المادة الكيميائية (أسيتامينوفين، الإيثانول، ورابع كلوريد الكربون)، أو نماذج الجراحية (70% ظهرت الجزئي). قد اتسم رد التجدد بعد 70% ظهرت جزئية إشراك تضخم تتمثل العالمية وجولات متعددة من انقسام الخلية4،5. لوقف النزف، هذا النموذج غير محدودة، كما يجب متصلة بالسفن الكبرى ترك بيئة طبيعية للتجديد. ولذلك استخدمت العديد من الدراسات نماذج أخرى أقل الغازية من الإصابة الحادة من خلال الأضرار الكيميائية، تاركاً الهيكل الإجمالي للتجديد بحي.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب قد لا الكشف.
شكر وتقدير
ونحن نشكر شو ص لأداء ح & ه وعلم الأنسجة؛ وجيم وانغ ومكارتي أ لإجراء مناقشات مفيدة. وكان دعم الأبحاث من خلال تمويل من فرجينيا ودال ك لودفيغ صندوق "أبحاث السرطان"؛ الوطنية القلب والرئة، والدم معهد (R01HL058770 و U01HL099999)؛ وأيد البشرية الحدود العلوم البرنامج الوظيفي التنمية جائزة (CDA00017)، مؤسسة البحوث الألمانية (ري 2787/1)، ومعهد الخلايا الجذعية سيبيل، معهد كاليفورنيا "الطب التجديدي" (RC1 00354) المنح إلى I.W. Y.R. مؤسسة سيبل ستايسي (1119368-104-غبجي) وتوماس. J.M.T. أيده المعاهد الوطنية للصحة (T32GM007365)، وجائزة دائرة البحوث الوطنية (1F30DK108561)، وبول والزمالة سوروس ديزي "الأميركيين جديد".
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| <قوي>< قوية> | |||
| أم مع فضلات اليوم 0 صغار حديثي الولادة (أي سلالة) | |||
| الأم البديلة والقمامة البديلة (اختياري) | |||
| <قوية>الاسم | <قوي>الشركة | رقم الكتالوج | تعليقات |
| < قوي > كواشف قياسية < / قوي > | |||
| مصل فوسفات مخزن (PBS) بروفيدين | |||
| اليود أو ما يعادله من محلول | |||
| مطهر <قوي > الاسم < / قوي > | < قوي > الشركة < / قوي > | < قوي > رقم الكتالوج < strong > | تعليقات < / قوي > |
| < قوي > معدات جراحية < / قوي > | |||
| تشريح مجهر | زايس | ZEMSDV4L MFR # 435421-9901-000 | |
| 3 مم مقص صغير زنبركي مستقيم | Vannas | 72932-01 | |
| 5SF ملقط | دومون | 11252-00 | |
| ملقط كيلي مستقيم | Grainger | 17-050G | |
| وسادة تسخين | شعاع الشمس | 000771-810-000 | |
| مختبرات | الأيزوفلوران | أبوت 0044-5260-05 | |
| نظام تخدير القوارض | كينت Scientific | 1205S | |
| شاش ، 10.16 × 10.16 سم | فيشر سيانتيفك | 13-761-52 | |
| <قوي>الاسم< قوي> | <قوي>الشركة< قوي> | <قوي>رقم الكتالوج | < قوي > تعليقات < / قوي > |
| < قوي > المعدات القياسية < / قوي > | |||
| 1.5 مل أنبوب الطرد المركزي الصغير | Eppendorf | 22363204 | |
| 6-0 خيوط أحادية الكرول | Ethicon | MCP489G | |
| طبق بتري | Fisher Scientific | S35839 | |
| Pipet-Aid ، عادي ، 110 فولت | دروموند | 4-000-110 | |
| Mettler Toledo NewClassic ME الموازين التحليلية | فيشر Scientific | 01-912-402 | |
| غرفة الحث منخفضة التكلفة | كينت العلمية | SOMNO-0730 |
المراجع
- Michalopoulos, G. K., DeFrances, M. C. Liver Regeneration. Science. 276 (80), 60-66 (1997).
- Ponfick, V. A. Surgery of the Liver. Lancet. 1, 881(1890).
- Higgins, G., Anderson, R. M. Experimental Pathology of the liver. Restoration of the liver of the white rat following partial surgical removal. Arch. Pathol. 12, 186-202 (1931).
- Miyaoka, Y., et al.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
