Протокол, описанных в данном документе использует мыши поднимающей auris Лонг (Лал) мышц для записи Спонтанная и вызывали нерва постсинаптических потенциалов (ток зажим) и токов (мембраной) на стыке нервно. Использование этой техники может обеспечить понимание ключевых механизмы синаптической передачи в условиях нормальных и болезни.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Поднимающей Auris Лонг Подготовка для изучения млекопитающих нервно-мышечной передачи условиях напряжение зажим
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Этот протокол описывает метод для записи синаптической передачи от перекрестка нервно условиях ток зажим и напряжения зажим. Ex vivo подготовка поднимающей auris Лонг (Лал) используется, потому что это тонкая мышца, которая обеспечивает простой визуализации перекрестка нервно шампур микроэлектродные на мотор концевую. Этот метод позволяет для записи спонтанное миниатюрный концевой потенциалов и токов (mEPPs и mEPCs), вызывали нерва концевую потенциалов и токов (ЭПТ и ПЭК), а также свойства мембраны мотор концевую. Результаты, полученные из этого метода включают квантовый контент (QC), количество пузырьков релиз сайтов (n), вероятность везикул релиз (prel), синаптического облегчения и депрессии, а также постоянная времени мышечные мембраны (τ m) и входное сопротивление. Применение этого метода для мыши модели болезней человека можно выделить основных патологий в положениях заболеванием и помочь определить стратегии Роман лечения. От полного напряжения зажима один СИНАПС, этот метод обеспечивает один из наиболее подробный анализ синаптической передачи имеющихся в настоящее время.
Введение
Изучая синаптической передачи на стыке нервно обеспечивает понимание динамической взаимосвязи между нервной и скелетной мышечной систем и является прекрасной моделью для изучения синаптических физиологии. Поднимающей auris Лонг (Лал) является тонкой мышцы, позволяя для нервно соединения легко визуализировать. Предыдущие доклады описал удобство использования Лал для изучения синаптических наркотиков и токсинов и характеризуются скелетных мышечных волокон типа характеристики Лал1,2. Многочисленные исследования использовали Лал для изучения нервно-мышечной физиологии3,<....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все животные процедуры выполнялись в соответствии с животное уход и использование Комитета Райт государственный университет.
1. мышь эвтаназии
- В Зонта поместите курсор мыши в герметичном стекла, обезболивающим камеры.
- Разоблачить мыши через вдыхание к смертельной дозы изофлюрановая (насыщения, или ~ 25%). Оставьте мышь в камере до тех пор, пока нет дыхания можно наблюдать.
- Удаление мыши из камеры и выполнять шейки матки дислокации как дополнительный метод эвтаназии.
2. Удаление волос от дорсальной поверхности головы, шеи и спины
- Чтобы удалить часть волос на дорсальной....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
На рисунке 8 показан пример импульсов тока (рис. 8A) и напряжения ответов (Рисунок 8B) от одного волокна Лал под ток зажим от 12-недельных дикого типа R6/2 мыши. Наличие mEPPs указывает, что эти записи были взяты из мотора концевую. Записи были получены в растворе нормального физиологического раствора. Эти записи ток клещи могут быть проанализированы для определения Rв и τm
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Описанные здесь является подготовка и использование мыши Лал мышц для измерения нервно-мышечной передачи зажим тока или напряжения условиях. Есть несколько важных моментов, чтобы рассмотреть для рассечения, Лал. Очистки излишки соединительной ткани от СПИДа мышц в электрод шампур, как электроды можно загвоздка соединительной ткани, когда их позиционирование на шампур. Однако, только удалить соединительной ткани, которые могут быть приняты прочь легко, чтобы ограничить вероятность повреждения мышц. Изоляции нерва должны в.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не имеют ничего сообщать.
Благодарности
Мы благодарим д-р Марк м. богатые и Даниэль Миранда за редакционные комментарии, Ахмад Khedraki за помощь в создании этой техники и Райт государственный университет для финансовой поддержки (запуска фонд A.A.V.).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Композитный микроскоп Olympus | BX51WI | ||
| 10x Объектив | Olympus | UMPLFLN10XW | |
| 40x Объектив | Olympus | LUMPLFLN40XW | |
| боросиликатное стекло | Sutter Instruments | BF150-86-7.5 | |
| ПЗС-камера | Santa Barbara Instruments Group | ST-7XMEI | |
| Mater-9 Pulse Генератор | AMPI | ||
| Iso-flex Стимульный изолятор | AMPI | ||
| pCLAMP 10 Программное обеспечение для сбора и анализа данных | Молекулярные приборы | 1-2500-0180 | |
| Концентрический биполярный электрод | FHC | CBDSH75 | |
| Манипулятор с шаровым шарниром | Narishige | ||
| Неметаллические шприцы 34 калибра | World Precision Instruments | MF34G-5 | |
| Nikon Стереомикроскоп | Nikon | SMZ800N | |
| No5 Щипцы | Тонкие научные инструменты | ||
| Пружинные ножницы | Fine Science Tools | 15006-09 | |
| No2 Щипцы | Roboz | RS-5Q41 | |
| Микродиссекция Ножницы | Roboz | RS-5912SC | |
| Sylgard 184 Набор силиконовых эластомеров | Dow Corning | 2404019862 | |
| Крем для удаления волос | Nair | ||
| Grass SD9 Стимулятор | Трава Медицинская | ||
| модель P-1000 Микропипетка Пуллер | Sutter Instruments | P-1000 | |
| Axon Digidata 1550 Система сбора данных с низким уровнем шума | Молекулярные приборы | ||
| Низкочастотный фильтр Бесселла Warner | Instrument Corp. | LPF-8 | |
| Левосторонний микроманипулятор | Siskiyou Corp. | MX1641/45DL | |
| Правосторонний микроманипулятор | Siskiyou Corp. | MX1641/45DR | |
| Одинарный контроллер движения | Siskiyou Corp. | MC100e | |
| Siskiyou Corp. | MX1641R | Это было добавлено к оси Z левосторонних и правосторонних микроманипуляторов, чтобы обеспечить моторизацию оси Z. Эта индивидуальная установка дешевле и менее громоздка, чем покупка 4-осевого моторизованного микроманипулятора. Это также позволяет нам управлять обоими микроманипуляторами с помощью одного контроллера | |
| Все химикаты были заказаны от Fisher, за исключением, | |||
| BTS | Toronto Research Chemicals | B315190 | |
| CTX | Alomone Labs | C-270 | |
| 4-Di-2-Asp | Molecular Probes | Molecular Probes больше не является компанией. Теперь заказывают через Fisher |
Ссылки
- Angaut-Petit, D., Molgo, J., Connold, A. L., Faille, L. The levator auris longus muscle of the mouse: a convenient preparation for studies of short- and long-term presynaptic effects of drugs or toxins. Neurosci Lett. 82 (1), 83-88 (1987).
- Erzen, I., Cvetko, E., Obreza, S., Angaut-Petit, D.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
